中山地区血小板供者HLA基因分型资料库的建立

目的 建立血小板供者HLA基因分型资料库,探讨HLA-A、B基因频率及单体型频率,为临床患者提供HLA匹配的血小板,解决血小板输注无效(PTR)患者的血小板输注.方法 采用聚合酶链反应-序列特异寡核苷酸探针杂交技术 (PCR-SSOP)对568名中山地区单采血小板捐献者进行HLA-I类(A、B位点)基因分型并形成数据库,根据HLA表型群体资料,使用最大数学预期值算法(EM)计算HLA-A、B单体型频率.结果 HLA-A位点共检出17种等位基因,HLA-B位点共检出29种等位基因,单体型数153种.结论 血小板供者HLA分型资料库的建立可以为PTR患者迅速寻找到HLA相合血小板,提高血小板输注效果.     

中华骨髓库云南分库HLA基因多态性分析

目的了解中国造血干细胞捐献者资料库云南省分库HLA-A、B、DRB1基因多态性,及等位基因频率特征。方法采用流式PCR-SSOP方法对来自中国造血干细胞捐献者资料库云南分库的1000名无血缘关系的捐献者进行基因分型,运用直接计数法计算HLA-A、B、DRB1基因频率,并与其他人群进行比较。结果在云南地区人群中共检出了68种HLA基因特异型。其中HLA-A位点18个,HLA-B位点37个,HLA-DR位点13个。A*02(37.31%)、A*11(34.96%)和A*24(21.13%)3个等位基因为云南分库捐献者HLA-A座位的主要等位基因;B*46(13.1%)、B*15/62(11.8%)和B*40/60(9.7%)3个等位基因为云南分库捐献者HLA-B座位的主要等位基因;HLA-DRB1座位以DRB1*12(20.06%)、DRB1*04(14.44%)、DRB1*09(13.51%)和DRB1*15(13.11%)4个等位基因频率为高。结论云南造血干细胞捐献者资料库人群的HLA基因多态性与南方汉族接近,也有其自身的一些特点。     

石家庄地区已知HLA型别单采血小板捐献者基因资料库库容评价

目的 分析石家庄地区单采血小板捐献者HLA-I类基因(A、B位点)分布特点,探讨在该地区血小板捐献者基因资料库中找到HLA-I类基因(A、B位点)相合供者的概率并进行血小板捐献者基因资料库最小规模评价。方法 对石家庄地区1 935位无血缘关系的血小板捐献者HLA-I 类基因A、B位点基因分型采用聚合酶链反应-序列特异引物(PCR-SSP)和聚合酶链反应-直接测序分型(PCR-SBT)方法,得到基因型后转化为对应的抗原特异性,计算基因频率和单体型频率,进行血小板捐献者基因资料库最小规模评价,并统计交叉反应组(CREG)表型频率及不配合率。结果 1 935位无血缘关系的血小板捐献者中共检出HLA-A位点抗原特异性19种,其中频率最高的抗原为A2(0.313 4)和A11(0.158 4);检出HLA-B 位点抗原特异性43种,其中频率最高的为B13(0.118 1)和B61(0.086 3);观察到HLA-A-B单体型355种,频率大于0.01的共28种,其中频率最高的为A2-B13(0.044 4)和A2-B62(0.029 5);石家庄地区单采血小板捐献者A-A、A-B抗原CREG表位不配合的概率最高分别为1C-2C和7C-5C,Broad CREG不配合概率最高的为4C-6C。结论 理论上石家庄地区建立一个总库容1 500人的血小板捐献者基因资料库有93.18%的患者有95%的可能性找到至少1例HLA相合的供者,本研究1 935人的基因资料库基本可以满足本地区血小板输注无效患者寻找HLA相合供者的需求。     

江苏骨髓分库汉族造血干细胞捐献志愿者HLA-A、B、DRB1基因多态性和单倍型研究

目的分析中国造血干细胞捐献者资料库(简称江苏分库)汉族人群中HLA-A,B,DRB1基因多态性和单倍型的分布特征。方法用PCR-SSP和PCR-SSOP基因分型技术对江苏分库20 248名无关志愿者作HLA-A、B、DRB1低分辨基因分型,以直接计数法计算等位基因频率,应用Arlequin 3.01软件以最大似然法分析单倍型频率。结果江苏分库汉族志愿者HLA抗原频率分布符合Hardy-Weinberg平衡;共检出HLA-A位点等位基因18个,B位点等位基因34个,DRB1位点等位基因13个;A位点频率最高的是A*02(29.6%),B位点频率最高的是B*15(14.4%),DRB1位点频率最高的是DRB1*09(16.2%);频率最高的HLA-A,-B,-DRB1单倍型是A*30-B*13-DRB1*07(6.92%),频率最高的HLA-A、B单倍型是A*30-B*13(8.04%),频率最高的HLA-B,DRB1单倍型是B*13-DRB1*07(8.07%),频率最高的HLA-A、DRB1单倍型是A*02-DRB1*09(7.70%)。结论对江苏分库汉族人群HLA的分布状况的了解,有助于指导临床寻找HLA匹配的无关骨髓供者,为HLA与疾病相关研究和我国人群群体遗传学研究等提供了有意义的基础性资料。     

云南地区人群HLA-A、B、DRB1等位基因遗传多态性的分析

目的了解中国造血干细胞捐献者资料库云南省分库HLA-A、B、DRB1基因多态性,分析云南地区人群HLA-A、B、DRB1等位基因频率特征。方法采用流式序列特异性寡核苷酸探针(PCR-sequence specific oligonucleotide probes,PCR-SSOP)结合直接测序法(PCR-sequence based typing,PCR-SBT)方法,对来自中国造血干细胞捐献者资料库云南分库的1 000名无血缘关系的捐献者进行基因分型,运用方根法计算HLA-A、B、DRB1基因频率,并与其他人群进行比较。结果在云南地区人群中共检出68种HLA基因特异型。其中HLA-A位点18个,HLA-B位点37个,HLA-DR位点13个。A*11(34.66%)、A*02(34.2%)和A*24(19.63%)3个等位基因为云南分库捐献者HLA-A座位的主要等位基因;B*46(12.83%)、B*40(60)(10.9%)和B*15(62)(9.78%)为HLA-B座位的主要等位基因;HLA-DRB1座位以DRB1*12(16.7%)、DRB1*15(16.46%)、DRB1*09(13.46%)和DRB1*04(12.77%)4个等位基因频率为高。最常见的A-B-DRB1单倍型是A*02-B*46-DRB1*09,频率是3.76%。结论云南地区人群的HLA基因多态性与南方汉族接近,但有其自身的一些特点。有必要在本地区开展造血干细胞捐献者的招募工作。     

南京地区血小板固定捐献者HLA和HPA基因资料库的建立及库容评估分析

目的 探讨南京地区血小板固定捐献者HLA-A、-B和HPA-1～6w、10w、15、21w基因多态性分布特点并进行血小板固定捐献者基因资料库库容评估分析。方法 采用荧光定量PCR法对南京地区1059例血小板固定捐献者血液样本进行HLA-A、-B位点和HPA-1～6w、10w、15、21w基因分型,计算等位基因频率、HLA单体型频率、HPA组合型频率,并以此为数据基础,评估库容水平。结果 1059例血小板固定捐献者中共检出HLA-A位点等位基因15个,频率较高的有A^*02、A^*11、A^*24、A^*33、A^*30;检出HLA-B位点等位基因29个,频率较高的有B^*15、B^*40、B^*13、B^*46、B^*51、B^*58;观察到HLA-A-B单体型共269种,频率>0.01的有22种,其中频率最高的为A^*02-B^*     

潍坊地区血小板捐献汉族人群HLA-A、B和HPA1-17系统基因多态性研究

目的探讨潍坊地区汉族血小板捐献者HLA-A、B和HPA1-17系统基因多态性区域分布特点,初步建立血小板捐献者HLA、HPA基因资料库。方法分别采用PCR-SSOP和PCR-SSP方法对200名无血缘关系的汉族血小板捐献者做HLA-A、B和HPA1-17系统基因分型,计算基因频率、基因型频率。结果受检者共检出HLA-A位点14个,HLA-B位点30个,其中HLA-A座位频率较高的有A*02、A*11、A*30和A*24,基因频率分别为0.317 5、0.1450、0.127 5、0.125 0;HLA-B座位频率较高的有B*15、B*13、B*40和B*51,基因频率分别为0.157 5、0.145 0、0.1200、0.100 0。每个标本均检测到HPA1a、4a、5a、7a-14a、16a、17a基因,HPA7a-14a、16a、17a呈单特异性,未检测出相应的等位基因HPA-b;在HPA1-17中,杂合度最高的是HPA15,基因型HPA15a/15a、HPA15a/15b、HPA15b/15b频率分别是0.28、0.565、0.155;其次为HPA3,基因型HPA3a/3a、HPA3a/3b、HPA3b/3b频率分别是0.355、0.51、0.135。经χ2检验,结果符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。结论探明了潍坊地区汉族血小板捐献者HLA-A、B和HPA1-17系统区域性分布特点,为免疫性血小板减少患者寻找匹配的血小板提供保障。     

山东省汉族人群HLA-A、B、DRB1位点基因多态性研究

目的分析山东省汉族人群HLA-A、B、DRB1位点基因多态性,获得更完整、准确的群体HLA分子遗传学数据。方法应用PCR-SSP及SSOP技术对7418名山东省汉族造血干细胞志愿捐献者进行HLA-A、B、DRB1位点基因分型。结果共检出低分辨HLA-A基因18种,B基因44种,DRB1基因13种,其中包括一些以前国内未检出的低频率基因。山东汉族人群最常见的HLA基因为A*02、B*13和DRB1*15,其相应基因频率分别为0.2883、0.1431和0.1762;山东汉族人群最常见的A-B单倍型为A*30-B*13,频率为0.0896,最常见的A-B-DRB1单倍型是A*30-B*13-DRB1*07,频率为0.0743。结论山东省汉族人群HLA-A、B、DRB1基因具有显著多态性,大样本和DNA分型有助于低频率基因的检出,适当扩大造血干细胞库志愿捐献者登记人数及各地重新进行HLA多态性分析实有必要。     

肇庆地区血小板供者库的建立及应用

目的 建立肇庆地区已知人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因分型及人类血小板抗原(human platelet alloantigen,HPA)HPA-1~6、9、15基因型的无偿机采血小板供者库,为临床血小板输注无效(platelet transfusion refractory,PTR)患者提供HLA及HPA相合的血小板.方法 采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(polymerase chain reaction-sequence specific olignuliotide probe,PCR-SSO)检测血小板供者的HLA基因分型及聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)检测HPA-1~6、9、15基因型.对杂合度高的HPA-3、15随机抽样20个标本进行测序.对3例患者进行HLA-I分型.结果 成功检测出101名无偿血小板捐献者HLA及HPA-1~6、9、15基因型;HPA-3、15的测序结果与PCR-SSP一致.HLA-A位点等位基因共检出11个;HLA-B位点共检出等位基因20个.3例患者中的1例从已知的HLA血小板库中找到完全一致供者,另外2例也找到三位点吻合的血小板供者.结论 建立基于HLA-I类抗原及HPA基因分型的血小板供者资料库,有助于给PTR患者提供HLA和HPA相合的单采血小板.     

辽南地区造血干细胞捐献者HLA基因分布和单倍型分析

目的了解辽南汉族造血干细胞捐献者的HLA基因多态性和单倍型的分布特点。方法应用PCR-SSP和PCR-SSO2种方法对辽南地区的9678份样本进行HLA-A、B、DRB1位点的基因分型,并对分型结果作统计学分析。结果辽南地区造血干细胞捐献者HLA基因分型,共检出A位点表型特异性18种,检出率为85.71%;B位点共检出表型特异性41种,检出率为93.18%;DR位点共检出表型特异性13种,检出率为92.86%。基因分布符合Hardy-Weinbery规律(P>0.05)。在HLA单倍型分布中,A30B13、A2B46、A33B58、A30DR7、A33DR13、A2DR10、B13DR7、B46DR9、B52DR15等均具有较高的连锁频率。结论本组数据了解辽南地区,汉族人造血干细胞捐献者的HLA基因分布特点,有利于估计相合供者的概率。     

岳阳地区血小板捐献者HPA1～17,HLA-A和B基因多态性研究

目的 研究湖南省岳阳地区机采血小板捐献者人类血小板抗原（HPA） 1-17及人类白细胞抗原HLA-A和B基因分布及多态性.方法 分别采用PCR-SSP法和PCR-SSO法对200名岳阳地区机采血小板捐献者进行HPA1-17和HLA-A和B基因分型,计算基因频率、基因型频率,并与其他人群进行比较.结果 岳阳人群HPA1-17系统中,HPA7-14和HPA16-17的基因型均为aa型,不具有多态性;HPA1,2,4和5主要以aa型为主,aa基因型频率分别是0.970 0,0.900 0,0.985 0和0.980 0,未检出bb型;仅在HPA3,6和15中检出bb型,bb基因型频率分别是0.185 0,0.035 0和0.465 0;杂合度最高的是HPA15,其aa,ab和bb基因型频率分别是0.305 0,0.230 0和0.465 0,HPA3杂合度居次,其aa,ab和bb基因型频率分别是0.380 0,0.435 0和0.185 0.HLA-A位点检出12个等位基因,频率最高的3个是A＊11（0.3325）,A＊02（0.295 0）和A＊24（0.205 0）;HLA-B位点检出28个等位基因,频率最高的5个是B＊ 40（60）（0.177 5）,B＊ 46（0.142 5）,B＊ 13（0.100 0）,B＊51（0.082 5）和B＊ 15（75）（0.077 5）.结论 岳阳地区机采血小板捐献者HPA1-17和HLA-A,B基因多态性与南方汉族接近,但也呈现出自身特点,需建立该地HLA/HPA基因分型血小板供者库服务于临床.     

甘肃酒泉地区人群HLA-A、B、DRB1等位基因多态性研究

目的研究中国造血干细胞捐献者资料库甘肃分库汉族捐献者HLA-A、B、DRB1等位基因频率分布特征。方法采用反向特异性寡核苷酸探针杂交法(PCR-SSO)基因分型技术,对甘肃酒泉地区215份健康无血缘关系的汉族人群的人类白细胞抗原(HLA-A、-B、-DRB1)等位基因进行基因分型。结果在受检人群中共检出54种HLA特异性基因,A*02(32.47%)、A*11(20.62%)、A*24(14.95%)、B*15(15.72%)、B*40(13.4%)、DRB1*09(16.49%)、DRB1*12(15.46%)、DRB1*04(11.86%)和DRB1*15(10.57%)为本地区汉族人群的优势基因,其中A位点检出以往国内报道较少的A*74等位基因。结论甘肃酒泉汉族人群HLA-A、B、DRB1等位基因的分布特征接近北方汉族人群,与中国汉族人总体分布特征相似。未发现群体特有的基因,但具有其自身分布特征。这为不同地区、不同人群有可能在中国造血干细胞库甘肃地区汉族捐献者中寻找到HLA相合的供者提供了依据。     

流式技术在骨髓库标本基因分型中的应用初探

目的探讨流式技术结合SSO方法在骨髓库标本HLA分型中的应用。方法使用序列特异性寡核苷酸探针结合流式技术（Flow-SSO）为中华骨髓库捐献者进行HLA检测，得出各位点的等位基因频率，并使用r检验对各位点的基因分布进行Hardy-Weinberg平衡检验。结果970份标本检出HLA—A、B、DRB1位点共61种基因座位，其中，A位点共16种等位基因，66种基因型，未见A34与A36；HLA—B位点共32种等位基因，188种基因型；HLA—DRB1位点共检出13种等位基因，85种基因型。各位点分布均符合Hardy-Weinberg平衡。中华骨髓库实验室以2％的比例对所检标本进行抽检，各结果均达质控要求。结论流式技术结合SSO方法是大批量标本HLA检测中较为理想的方法。     

已知HLA单采血小板供者资料库库容估计

目的:探讨江苏地区汉族人群HLA-I类抗原已知的单采血小板供者库的合适的库容水平。方法:采用Luminex-SSO法对16 062名江苏部分地区造血干细胞捐献者进行HLA基因分型。根据HLA-Ⅰ类(A, B位点)表型频率计算找到HLA匹配供者概率。结果:获取了江苏部分地区HLA-Ⅰ类(A, B位点)表型群体遗传学资料,利用表型群体遗传学资料估计推测出了已知HLA单采血小板供者资料库库容。结论:建立一个总库容1 500人的血小板捐献者资料库是恰当的,它可以满足表型频率 0.002的患者有95%的可能性找到至少1名表型相同的供者。     

3238名江苏汉族造血干细胞捐献者HLA-A、B、DRB1位点高分辨基因分型结果的研究

目的 分析中国江苏地区汉族人群造血干细胞捐献志愿者的HLA-A、B、DRB1位点在高分辨基因分型水平上的基因多态性弹倍型分布特征以及常见与罕见等位基因的分布.方法 大量应用基因序列分型技术和少量应用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针技术对中华造血干细胞捐献志愿者资料库江苏分库3238名无关供者的HLA-A、B、DRB1位点等位基因作高分辨分型.结果 HLA-A基因46个,HLA-B基因85个,HLA-DRB1基因51个.HLA-A位点频率最高的是A*11∶01(16.52％),HLA-B位点为B*13∶ 02(11.60％),HLA-DRB1位点为DRBl* 07∶01( 15.78％).单倍型频率最高是A* 30∶ 01-B* 13∶02-DRBl* 07∶01 (8.87％).HLA-A位点常见等位基因(CWD)种类有40种,在样本中的含量达到99.8％,HLA-B位点CWD则有77种(99.5％),HLA-DRB1位点的CWD有47种(99.8％),并发现少量在中国人群未报道的罕见基因.结论 本资料从高分辨水平反映了江苏地区汉族人群HLA的分布状况.对指导临床寻找HLA匹配的无关造血干细胞供者,HLA与疾病相关研究和我国人群群体遗传学研究等有重要意义.     

黑龙江地区汉族HLA-A、B、DRB1基因及单倍型的研究与应用

目的研究中国造血干细胞捐献者资料库黑龙江分库汉族捐献者HLA-A、B、DRB1等位基因和单体型频率分布特征,探讨中国广大地区乃至世界其他人种利用黑龙江汉族捐献者进行造血干细胞移植的可能性。方法采用序列特异性引物(PCR-SSP)和序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP)基因分型技术,对黑龙江地区汉族捐献干细胞的9 019名供者进行HLA-A、B、DRB1基因低分辨检测。结果共观察到77个HLA等位基因,其中频率>0.1的A、B、DRB1座位特异性分别为A2、A11、A24、B13、DR15、DR9、DR7、DR12、DR4。432条A-B单体型中,25条单体型的频率高于0.01,101条单体型呈现显著的正连锁不平衡,21条表现为强连锁不平衡(RLD>0.40);437条B-DRB1单体型中,22条单体型的频率高于0.01,115条单体型呈现显著的正连锁不平衡,16条表现为强连锁不平衡;2 002条A-B-DRB1单体型中,971条单体型有意义(频率≥1.66×10-4),18条单体型频率高于0.005。截止2007年3月通过中国造血干细胞捐献者资料库管理中心检索,成功移植20例。结论黑龙江汉族人群HLA-A,B,DRB1等位基因和单体型的分布特征接近北方汉族人群,与中国汉族人总体分布特征相似。未发现群体特有的基因和单体型,但具有其自身分布特征。不同地区、不同人群有可能在中国造血干细胞库黑龙江地区汉族捐献者中寻找到HLA相合的供者。其中中国人群最容易找到HLA相合供者,其次是日本人和韩国人。     

四川地区汉族群体HLA基因频率分布

目的 检测四川汉族人群HLA-A、-B、-DRB1位点基因多态性,获得完整、准确的四川汉族HLA分子遗传学数据.方法 应用PCR-SSP技术对1877名四川汉族健康人群进行HLA-A、-B、-DRB1位点基因分型.结果 四川汉族人群中共检出HLA-A等位基因16个,HLA-B等位基因37个,HLA-DRB1等位基因14个.其中最常见的HLA-A等位基因为A＊11、A＊02、A＊24,基因频率分别为31.3%、29.4%、18.6%;HLA-B常见的等位基因为B＊40、B＊46、B＊15,基因频率分别为16.9%、13.7%、13.1%;HLA-DRB1常见的等位基因为DRB1＊09、DRB1＊12、DRB1＊04,基因频率分别为17.1%、13.8%、13.0%.结论 四川汉族人群HLA-A、-B、-DRB1基因具有显著多态性,大样本的DNA分型有助于HLA低频率基因的检出.     

中华骨髓库造血干细胞捐献志愿者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1高分辨等位基因频率分析

目的分析中华骨髓库造血干细胞捐献者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1 5位点在高分辨基因分型水平上的等位基因频率特征。方法根据718名中华骨髓库捐献者HLA5位点高分辨分型数据,运用直接计数法计算各位点基因频率。结果在718名捐献志愿者中,共检出28个HLA-A等位基因、61个HLA-B等位基因、30个HLA-C等位基因、40个HLA-DRB1等位基因、18个HLA-DQB1等位基因;其中HLA-A位点最常见等位基因为A*1101(21.66%)、A*2402(16.37%)、A*0201(13.79%);HLA-B位点最常见等位基因为B*4001(11.49%)、B*4601(9.54%);HLA-C位点最常见等位基因为Cw*0702(15.74%)、Cw*0102(15.32%)、Cw*0304(11.56%);HLA-DRB1位点最常见等位基因为DRB1*0901(14.69%)、DRB1*1501(12.40%)、DRB1*0701(9.89%);HLA-DQB1位点最常见等位基因为DQB1*0301(20.54%)、DQB1*0303(15.81%)、DQB1*0601(10.79%)。结论本研究在高分辨基因分型水平提供了一套有关中国人群HLA-A,-B,-C,-DRB1和-DQB1 5位点基因频率数据。     

血小板捐献者血型资料数据库的建设与应用展望

供受者血小板配合输注可有效解决免疫性血小板输注无效问题。由于受HLA和HPA基因系统多态性、人群中CD36抗原缺乏个体比例及临床应用需求时限性等因素的影响,需要提前建立有一定规模的血小板捐献者血型资料库,才可能在临床需要时及时提供配合性血小板。血小板捐献者血型资料库涉及HLA-A,-B基因型资料库、HPA基因型资料库和CD36抗原阴性资料库;国内部分血站已建立200—4 000(人)份捐献者血小板血型资料库。建库中献血者选择、HLA-C位点覆盖问题、HPA系统最适检测范围和检测方法选择仍有待标准化。血小板捐献者血型资料库具有良好的应用前景,但仍需要通过扩大血小板捐献者基因型资料库规模、缩短配合血小板制备发放流程所需时间和加强临床沟通等措施,来提升基因型配合血小板的临床应用。     

HPA和HLA已知型的血小板供者库建立及应用

目的 开展血小板同型或配合性输注是预防和治疗免疫性血小板输注无效(PTR)的良策.为此建立一定规模的HPA和HLA已知型血小板资料库,为临床提供匹配的单采血小板,是血小板输注安全有效的保障.方法 对所有供者库单采血小板进行ABO、HLA-A、B及HPA1-6,15基因分型.根据ABO、HPA同型和HLA同型或HLA交叉反应组相同(CREG)配型策略,编制数据库软件,建立上海市单采血小板供者资料库.结果 上海市血小板供者库至今已接受80人/次患者查询,共有78名患者找到合适的供者.HPA和HLA的CREG相同配合率为97.5％.其中50名患者接受了单采血小板的同型(或配合型)输注,47名输注有效(24 h血小板回收率＞20％).其中更有15名患者同型输注疗效明显,24 h回收率＞80％.结论 建立血小板供者HPA和HLA Ⅰ类抗原基因分型资料库,为患者提供HLA和HPA、ABO匹配的单采血小板,可以降低PTR的发生率,是解决免疫性PTR的根本手段.