蛋清肽及肽钙配合物的制备

为获得高生物效价的补钙制剂及提高蛋清蛋白的附加值,首先对鸡蛋清进行酶法改性,筛选实验用酶,采用正交试验,分别对酶解条件及肽钙反应条件进行优化,并采用红外光谱法比较反应前后图谱的变化。结果表明：选择先碱性蛋白酶后中性蛋白酶进行双酶酶解,酶解条件为底物质量分数6%、碱性酶酶底比1:100、pH8.0、酶解时间3h;中性酶酶底比1:25、pH7.0、酶解时间3h。制备肽钙配合物最优反应条件为肽钙(CaCl2)质量比2.5:1、pH9.5、底物质量分数4%、温度55℃,在此条件下,可溶性钙含量为21.15mg/L,水解度为8.66%。制备蛋清肽时,使用双酶的水解效果优于单酶,蛋清肽与钙形成了双单齿配合物,其钙质量分数为8.75%。     

乳源锌螯合肽酶解制备及其螯合特性分析

为研究乳源锌螯合肽酶解制备最佳工艺条件及其螯合特性,从而为促锌吸收活性物质的研究提供基础,以牛乳酪蛋白为原料,以锌螯合率为指标,确定胰蛋白酶酶解制备锌螯合肽的最佳工艺条件,并对最优条件下酶解物的分子质量分布及氨基酸组成进行测定,同时通过傅里叶变换红外扫描和紫外扫描手段对酶解物和肽锌复合物进行结构表征对比分析。结果显示,最佳酶解条件为时间3 h,温度50℃,p H 8. 5,底物质量浓度为70 g/L,加酶量0. 6%(质量分数)。最佳条件下,酶解物的锌螯合率为87. 78%,分子肽分子质量小,人体必需氨基酸含量丰富。螯合前后光谱存在明显差异,Zn~(2+)与羧基等进行了配位结合。乳源锌螯合肽具有较高的锌螯合活性,实验结果为补锌剂的生产应用奠定了基础。     

玉米肽的酶法糖基化修饰及产物溶解性的研究

以玉米醇溶蛋白为原料,先利用Alcalase碱性蛋白酶酶解制备玉米肽,再以转谷氨酰胺酶为催化剂,氨基葡萄糖为酰基受体,通过糖基化反应修饰玉米肽,以接糖量为指标,采用单因素实验和正交实验优化糖基化反应条件,并对修饰产物的溶解性进行研究。结果表明,氨基葡萄糖糖基化修饰玉米肽的最优条件为:反应初始pH 7.7,反应温度44℃,玉米肽质量分数3.5%,玉米肽与氨基葡萄糖质量比1∶3,酶添加量55 U/g(以玉米肽质量计),反应时间7 h。在最优条件下,接糖量为149.60 mg/g。与玉米肽相比,玉米糖肽的溶解性显著增加,尤其是pH 6.0时,玉米糖肽的溶解性增加16.31%。     

基于乙醇注入-高压均质的蛋清肽脂质体制备及体内外缓释效果

为提高蛋清肽的稳定性,本实验采用高压均质辅助乙醇注入法制备蛋清肽脂质体。通过单因素试验确定脂质体制备的最佳工艺条件：2 mg/mL胆固醇、10 mg/mL蛋黄卵磷脂、50 mg/mL蛋清肽溶液、芯壁体积比3∶5、40 MPa高压均质7 min、100 W超声30 s,该条件下得到包埋率为（65.7±3.6）%的蛋清肽脂质体。选择1%吐温-80作为稳定剂,可以保证脂质体在30 d内具有良好的贮藏稳定性。此外,体外、体内释放实验结果表明,脂质体的包埋对蛋清肽有明显的缓释效果,并且小鼠血清中6 种必需氨基酸最高质量浓度明显提高;其中,色氨酸延后3.5 h释放,苯丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸延后2 h释放,脂质体包埋后赖氨酸最高质量浓度增加最多（523.53%）,蛋氨酸质量浓度增加最少（109.31%）。本研究获得了一种稳定性较强、包埋率较高、缓释效果较好的蛋清肽脂质体,可以有效实现氨基酸持续补充,为蛋清肽相关功能性产品的开发提供一定技术支持。     

鲢鱼鳞胶原肽-铁螯合物的制备及其特性表征

该研究将鲢鱼鳞胶原肽与亚铁离子进行螯合,以螯合率为评价指标,通过单因素实验结合响应面分析法,探究胶原肽-铁螯合物的最佳制备条件并对其分子量分布、氨基酸组成和结构进行表征。结果表明：胶原肽-铁螯合物的最佳制备条件为pH值7.5、肽铁质量比5:1、肽液质量分数2.5%、螯合时间40 min、螯合温度35 ℃,在此条件下,铁的螯合率为92.04%。由分子量分布和氨基酸组成分析可知,胶原肽与Fe2+螯后1 000 u以下的分子量占比下降,胶原肽中存在的谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸和精氨酸对螯合反应具有重要作用;紫外和红外光谱结果表明,胶原肽中的羧基、氨基和酰胺基等基团参与了螯合反应;X射线衍射图谱也显示鲢鱼鳞胶原肽-铁螯合物呈现出不同于胶原肽的非晶形结构。该研究可望为鲢鱼鳞胶原肽-铁螯合物的制备、工艺优选及结构表征提供参考。     

Zn（Ⅱ）亲和肽的分离纯化及肽-锌配合作用 研究

采用自制的壳聚糖-Zn亲和层析介质对罗非鱼蛋白多肽进行分离纯化,筛选出与Zn~(2+)有较强配位作用的亲和肽,并研究Zn~(2+)与亲和肽的配位作用动力学及形成配合物的结构特征。采用高效液相色谱、电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)、紫外及红外光谱仪、扫描电子显微镜等分析手段对肽-锌配合物进行结构表征。结果表明,制备的壳聚糖-Zn亲和介质能够实现从罗非鱼蛋白酶解产物中选择性筛选分离出与Zn~(2+)有较强配位作用的亲和肽;多肽原液、TP_1组分、TP_2组分与Zn~(2+)通过配合反应形成肽-锌配合物的锌含量分别为8.533%、1.700%、16.87%;所得亲和肽与Zn~(2+)具有较强配位作用,配合物的稳定常数为1.005×10~6,并分析了肽-锌配合物的基本结构特征。     

河蚬抗氧化肽—锌螯合物的制备及结构表征

以河蚬肉为蛋白源,添加中性蛋白酶进行酶解,采用葡聚糖凝胶G-50分离纯化得抗氧化肽,根据螯合最佳工艺制备抗氧化肽—锌螯合物,采用茚三酮法和硫化钠法对螯合产物进行定性分析,并通过紫外、红外、荧光光谱、X射线衍射和扫描电镜对产物结构进行分析。结果表明:所得螯合产物是一种抗氧化肽—锌螯合物;抗氧化肽中的羧基、氨基及酰胺键均参与了螯合反应,反应前后肽结构发生了显著变化;根据已得图谱分析可初步预测河蚬抗氧化肽—锌螯合物的结构。     

不同分子质量糖基化核桃肽的制备及功能特性分析

以核桃粕制备的核桃蛋白为原料,通过酶解、超滤制备3种不同分子质量的核桃肽,分别与5种糖类(葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糊精、葡聚糖)进行糖基化改性,以乳化性质和抗脂质氧化能力为指标,研究核桃肽糖基化改性最优工艺条件。利用凝胶电泳、傅里叶变换红外光谱及圆二色谱表征核桃肽的糖基化共价接枝反应产物,研究其理化特性,同时基于激光共聚焦显微镜明确糖基化改性产物的乳状液稳性。结果表明：分子质量大于30 kDa核桃肽与麦芽糊精的糖基化反应最佳工艺条件为核桃肽-麦芽糊精比例1∶2、反应时间8 h、反应温度80℃、肽质量浓度15 mg/mL,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳实验结果证实了分子质量大于30 kDa核桃肽与麦芽糊精通过糖基化反应生成共价复合物,傅里叶变换红外光谱分析表明糖分子以共价键的形式接入到核桃肽分子中;圆二色谱表明肽结构发生改变,α-螺旋从4.85%增加至6.43%、反平行从30.16%增加至35.91%、平行从3.28%增加至4.33%、β-转角从23.21%降至20.77%、无规卷曲从33.59%降至31.22%。糖基化反应改性除Fe²⁺螯合能力没有改善,其溶解...     

酪蛋白肽锌螯合物的制备及体外消化分析

为开发安全高效且易吸收的补锌剂,利用碱性蛋白酶酶解和乳酸菌发酵相结合的方法制备生物活性肽,并以此多肽制备了酪蛋白肽锌螯合物。采用光谱法对螯合物结构进行表征,利用体外消化模型和Caco-2细胞实验对其胃肠消化特性及生物安全性进行评价。结果表明,制备酪蛋白肽的最优条件为酶解pH为9、碱性蛋白酶添加量为0.3%(w/v),乳酸菌发酵时间为12 h,此时反应体系中多肽含量为142.39±0.95 mg/g,对锌的螯合率为31.41%±0.97%。与锌螯合后,酪蛋白肽表面的致密结构遭到破坏,形成疏松的状态;光谱学分析表明,Zn²⁺能与酪蛋白肽上的活性基团进行结合,螯合位点为羧基氧、羟基氧和氨基。体外模拟消化结果显示,酪蛋白肽锌螯合物在消化过程中锌溶解性优于硫酸锌;在胃肠消化后酪蛋白肽锌螯合物DPPH和ABTS⁺自由基的清除能力分别提升了26.19%±3.30%和71.96%±7.06%,而铁还原力下降了36.26%±2.80%;同时,在消化过程中肽锌螯合物的β-转角与无规则卷曲含量减少,β-折叠结构增加,Zn²⁺起到了维持多肽结构...     

酶膜生物反应器制备抗凝血酶蛋清水解物的研究

采用酶膜生物反应器(EMBR)制备抗凝血酶蛋清水解物,并用人工神经网络方法优化工艺。在0.13～0.15MPa 条件下,采用L18(37 × 21)混合水平正交试验考察底物质量分数、酶质量分数、pH 值、温度、滤过液流速和水解时间对蛋清水解物的抗凝血酶生物活性的影响,并用多层前馈网络(BP 神经网络)对EMBR酶解的过程进行模拟和预测,获得抗凝血酶水解产物的最优制备工艺条件。结果表明,在底物质量分数1%、酶质量分数1%、pH8.0、温度55℃、滤过液流速10mL/min、水解时间4h 时,产物的最低抗凝血酶IC50 预测值为10.43mg/mL,与实测值仅相差4.03%,说明采用EMBR 制备蛋清酶解物的方法可行,并经人工神经网络方法优化得到了抗凝血酶蛋清水解物的最优制备条件。     

正交试验优化花生肽螯合锌的制备工艺

研究了花生蛋白水解物和锌离子制备肽锌螯合物的工艺条件,以螯合率为评价指标,考察肽与锌的质量比、反应pH、反应温度和反应时间对螯合反应的影响。在单因素试验基础上,采用4因素3水平正交法确定花生肽-锌螯合物的制备工艺。最佳工艺条件:花生肽-锌质量比4∶1、反应体系pH 6.0、反应温度50℃、反应时间40 min。在此条件下,锌的螯合率为57.04%。     

蛋清肽的制备及其对保加利亚乳杆菌促生长的作用

研究Alcalase碱性蛋白酶酶解蛋清制备蛋清肽和蛋清肽对保加利亚乳杆菌生长的影响。结果表明：通过Box-Behnken设计确定酶解的最佳工艺为：底物质量浓度4.5 g/100 mL、酶解pH 9.0、酶解温度64 ℃、加酶量（[E]/[S]）5.0%,此条件下,酶解3 h后水解度达21.89%。蛋清肽可显著促进保加利亚乳杆菌生长,当添加体积分数3.0%、酶解3 h的蛋清肽（分子质量主要集中在1 513 u）时,其促生长效果最好,此时,与未添加蛋清肽组相比,活菌数提高了1（lg（CFU/mL））。     

蛋清肽水解工艺及饮料配方的优化研究

以蛋清粉为原料,采用碱性蛋白酶水解蛋清蛋白制备蛋清肽饮料,利用正交试验设计优化蛋清蛋白的水解工艺和蛋清肽饮料的加工配方。结果表明,各因素对蛋清蛋白水解度影响的主次顺序为:pH温度时间。优化后蛋清蛋白的最佳水解条件为:酶解温度55℃, pH 8.5,酶解时间4 h。此条件下蛋清蛋白的水解度为32.9%,溶液DPPH清除率为42.10%。各因素对蛋清肽饮料感官评分影响的主次顺序为:蛋清水解液添加量体积分数柠檬酸添加量质量分数蔗糖添加量质量分数。优化后蛋清肽饮料的配方为:柠檬酸添加量质量分数0.4%、蛋清水解液添加量体积分数25%、蔗糖添加量质量分数12%。此条件下的蛋清肽饮料酸甜适中,滋味可口。     

响应面法优化锐孔法制备大米抗氧化肽微胶囊工艺

为提高大米抗氧化肽的稳定性,以海藻酸钠为壁材,采用锐孔法对大米抗氧化肽进行微胶囊化。以包埋率为考察指标,在单因素试验基础上,进一步采用响应面分析法对芯材与壁材质量比、海藻酸钠质量分数、包埋温度、CaCl2质量分数、蔗糖脂肪酸酯质量分数工艺条件进行分析和优化,并对所制备的微胶囊进行了存放实验和电镜扫描。响应面优化试验结果表明：制备大米抗氧化肽微胶囊的最佳工艺条件为芯材与壁材质量比0.3∶1、海藻酸钠质量分数1.4%、包埋温度50 ℃、CaCl2质量分数1.8%、蔗糖脂肪酸酯质量分数0.26%,经验证,在上述最优条件下制备的微胶囊包埋率为81.24%,与模型预测值81.75%相比,相对误差仅为0.6%。存放实验结果表明微胶囊中抗氧化肽的稳定性明显提高;扫描电镜结果显示微胶囊表面形态结构完整。实验结果表明微胶囊化是保护抗氧化肽活性的一种较好方法,可为大米抗氧化肽微胶囊的实际生产提供参考。     

蚕蛹源肽锌纳米粒子的制备及其结构表征

为开发安全易吸收的补锌制剂,提升蚕蛹的利用价值,通过酶解蚕蛹蛋白制备蚕蛹肽,并将其与锌螯合生成肽锌螯合物。以锌螯合能力为指标,确定蚕蛹肽的酶解制备工艺及蚕蛹肽锌螯合物的制备工艺,采用紫外光谱、荧光光谱、扫描电镜、元素分析仪、粒径分析及红外光谱等技术对螯合前后的样品进行结构表征。结果表明,酶解制备蚕蛹肽的条件为碱性蛋白酶加酶量为1%、pH8.0、温度50℃、酶解时间6 h,该条件下的螯合率达58.05%;肽锌纳米粒的最佳制备条件为肽锌质量比1:0.5、pH6.5,温度55℃,时间20 min,此时螯合率达72.63%;添加硫酸锌后,紫外光谱与荧光光谱强度的减弱显示Zn²⁺与蚕蛹肽成功的发生了结合,所得蚕蛹肽-锌螯合物为粒径71.99 nm的纳米粒子,表面呈均匀的颗粒状结构,锌相对含量达37.46%,肽链中的-COOH、-NH₂和-C=O是锌离子与蚕蛹肽的主要结合位点。综上,蚕蛹是制备肽锌螯合物的良好原材料,这为丰富有机锌补充剂资源库和蚕蛹综合利用奠定了一定的理论基础。     

大豆分离蛋白水解物螯合锌(Ⅱ)的合成与制备

本文研究了大豆分离蛋白水解物中分子量小于10kDa的混合肽与锌合成制备金属蛋白盐的工艺条件。实验结果表明，获得螯合物的最佳条件是：多肽反应液浓度4％，肽锌质量比2．25：1，pH值为5．0，温度60℃，时间40min。     

响应面法优化鳕鱼皮胶原蛋白肽螯合铁工艺

采用响应面法优化鳕鱼皮胶原蛋白肽与氯化亚铁进行螯合反应的条件,制备小分子肽螯合铁产品。以pH值、小分子肽与FeCl2的质量比和小分子肽液质量分数3因素的5水平进行二次正交旋转组合试验,建立螯合物得率的二次回归方程。结果表明：最佳螯合工艺条件为胶原蛋白肽与氯化亚铁的质量比4:1、小分子肽液质量分数3.5%、pH7.0。在此条件下,螯合物得率为37.31%,与模型的预测值37.46%接近。红外光谱检测结果显示,亚铁离子与小分子肽中的NH2+和COO－有螯合,是一种新型螯合物。     

正交试验优化染料木素-锌配合物合成工艺

以天然活性成分染料木素为配体,与锌金属离子配位,合成染料木素-锌配合物。以配合物产率为考察指标,采用单因素试验和L_9(3~4)正交试验设计确定染料木素-锌配合物的最佳合成工艺条件,同时采用紫外光谱法和红外光谱法对染料木素-锌配合物进行了结构表征。结果表明,合成工艺中各因素的影响次序为反应pH反应温度反应时间,染料木素-锌配合物的最优合成工艺条件为反应pH 9.0、反应温度60℃、反应时间6 h,此条件下配合物的产率达39.67%。结构表征结果初步显示染料木素是通过4位羰基和5位羟基与锌金属离子进行配位的。筛选的合成工艺可有效提高染料木素-锌配合物的产率。     

纳豆菌发酵玉米蛋白粉制备玉米肽工艺优化

为了探索玉米肽的制备技术,以玉米蛋白粉为基质,应用纳豆菌发酵法制备玉米肽工艺进行了试验研究。分别对接种量体积分数、玉米蛋白粉质量分数、发酵温度、发酵时间进行了单因素试验研究,采用四因素三水平正交试验设计对玉米肽发酵工艺条件进行了优化,得到最优条件为:发酵温度40℃、发酵时间72 h、接种量体积分数4%、玉米蛋白粉质量分数5%。在此最优条件下发酵,玉米蛋白粉的水解度为11.17%,与理论预测值基本相符。     

低聚壳聚糖Zn（Ⅱ）配合物清除DPPH活性的研究

控制反应物低聚壳聚糖和氯化锌的比例,合成了两种金属含量不同的低聚壳聚糖锌配合物,用红外光谱对产物结构进行表征,原子吸收光谱证实两种配合物中的锌质量分数分别为5.04%和8.68%.考察了其对DPPH的清除活性,结果表明:两种配合物对DPPH有明显的清除效果,锌质量分数为5.04%和8.68%的低聚壳聚糖锌配合物对DPPH的半抑制浓度IC50分别为1.50 mg/mL和1.76 mg/mL,但均大于低聚壳聚糖对DPPH的半抑制浓度IC500.42 mg/mL,这可能是因为金属离子的引进,使部分活性氨基和羟基的数目减少所致.