激动β_3肾上腺素能受体上调载脂蛋白A-Ⅰ促进泡沫细胞胆固醇流出的研究

目的 通过激动或抑制HepG2细胞的β3肾上腺素能受体(β3-AR),探讨β3-AR调节胆固醇逆转运过程的可能机制。方法 将培养的HepG2细胞随机分为对照组、β3-AR激动剂组(激动剂组)和β3-AR拮抗剂组(拮抗剂组),ELISA法检测上清液载脂蛋白(apo)A-Ⅰ、apoA-Ⅱ及β3-AR水平;测定细胞内胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯水平,3 H标记的胆固醇测定胆固醇流出率,实时定量PCR和蛋白印迹法分别检测细胞中三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和肝X受体α亚型(LXRα)的表达。结果 与对照组比较,激动剂组apoA-Ⅰ、游离胆固醇、胆固醇流出率显著增加,胆固醇、胆固醇酯显著降低,ABCA1和LXRαmRNA及ABCA1和LXRα蛋白显著增加;拮抗剂组胆固醇、胆固醇酯显著升高,apoA-Ⅰ、胆固醇流出率显著减少,ABCA1和LXRαmRNA及ABCA1和LXRα蛋白显著降低。与激动剂组比较,拮抗剂组ABCA1和LXRαmRNA及ABCA1和LXRα蛋白显著降低(0.49±0.10 vs1.24±0.02,0.85±0.05 vs 1.32±0.05,0.38±0.01 vs 1.45±0.20,0.08±0.01 vs 0.76±0.02,P0.01)。结论激动HepG2细胞的β3-AR,可上调apoA-Ⅰ表达,促进巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇逆转运相关蛋白的表达。     

β3肾上腺素能受体对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的:分别应用选择性β3肾上腺素受体(β3-adrenoceptor,β3-AR)阻断剂及激动剂对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)致慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)模型大鼠进行干预,观察β3-AR是否在CHF进展中介导心肌纤维化。方法:90只健康雄性Wistar大鼠随机分为4组:1正常对照组:腹腔注射0.9%氯化钠;2 CHF组:腹腔注射ISO+0.9%氯化钠;3β3-AR激动剂干预心衰组(BRL组):腹腔注射ISO+尾静脉注射BRL37344;4β3-AR抑制剂干预心衰组(SR组):腹腔注射ISO+SR59230A。干预结束后检测血流动力学指标,心肌病理学变化,胶原容积分数(CVF),心肌羟脯氨酸(Hyp)含量等。结果:1模型组大鼠在12周后心功能明显下降,出现心肌重构,CHF模型成功建立。2BRL组大鼠较CHF组LVSP、±dp/dtmax降低,LVEDP、LVW/BW升高(P0.05或P0.01),心肌出现明显变性及纤维化改变,CVF升高(P0.05),心肌Hyp含量升高(P0.05);SR组较CHF组HR、LVEDP下降(P0.05或P0.01),LVSP显著升高(P0.05)。结论:1腹腔注射ISO可成功复制CHF大鼠模型。2β3-AR激动后可促进心肌纤维化,提示β3-AR可能通过介导心肌重构参与CHF进展。     

β_3-肾上腺素能受体对心力衰竭大鼠心室肌细胞L-型Ca~(2+)通道的调控

目的观察β3-肾上腺素能受体(AR)兴奋对实验性心力衰竭(简称心衰)大鼠心室肌细胞内L-型Ca2+通道(ICa-L)的影响。方法雄性成年Wistar大鼠随机分为心衰组及对照组。通过结扎大鼠冠状动脉前降支制作大鼠实验性心衰模型,经典酶分离法分离心肌细胞,膜片钳技术观察β3-AR激动剂BRL-37344对心室肌细胞ICa-L的影响。结果与对照组比较,心衰心室肌细胞的ICa-L电流明显降低(P<0.05);当膜电位在-20,-10,0,10mV时,BRL37344(1mol/L)降低对照组细胞ICa-L的幅度分别为41.8%、20.0%、15.1%、11.3%(P<0.05);BRL37344(1mol/L)降低心衰组心肌细胞ICa-L的幅度分别为63.0%、40.4%、67.6%、62.8%(P<0.05);同等剂量的BRL37344(1mol/L)降低心衰心室肌ICa-L的幅度大于对照心室肌ICa-L的幅度(P<0.05)。结论β3-AR激动剂可以下调大鼠心室肌细胞内ICa-L,在心衰大鼠心肌ICa-L下调幅度更明显。     

β肾上腺素能受体激动剂对离体大鼠肺泡液体清除率的作用

目的探讨β1肾上腺素能受体激动剂地诺帕明、β2肾上腺素能受体激动剂特布他林、β3肾上腺素能受体激动剂BRL37344对离体大鼠肺泡液体清除率(AFC)的作用及机制。方法5%白蛋白等渗生理盐水溶液和不同药物混合后灌注到离体大鼠的肺泡腔内,根据灌注前及其孵育1h后白蛋白浓度的变化来计算大鼠AFC。结果基础AFC为6.9%±2.2%,地诺帕明、特布他林、BRL37344可显著提高AFC(分别为17.1%±2.4%、19.5%±1.2%、19.9%±2.5%)。β1肾上腺素能受体阻滞剂Atenolol可完全抑制地诺帕明提高AFC(6.1%±0.9%)的作用,但不能阻滞特布他林和BRL37344的作用。β2肾上腺素能受体阻滞剂ICI118551完全抑制了特布他林和BRL37344提高AFC(分别为5.7%±0.6%和7.8%±2.6%)的作用,部分抑制了地诺帕明的作用(AFC为12.7%±1.8%)。β3肾上腺素能受体阻滞剂SR59230A部分抑制了BRL37344和特布他林的作用(AFC分别为13.8%±3.1%和14.5%±3.4%),但不能阻滞地诺帕明的作用。结论地诺帕明、特布他林、BRL37344可以显著提高大鼠的AFC。但地诺帕明和特布他林是分别通过β1、β2肾上腺素能受体起作用;而BRL37344可能是通过β2肾上腺素能受体调节的。ICI118551和SR59230A可能分别具有抑制β1或β2肾上腺素能受体的作用。     

β_3肾上腺素能受体激动对慢性心力衰竭大鼠心房肌细胞瞬时外向钾电流的影响

目的探讨选择性β_3肾上腺素能受体(β_3-adrenoreceptor,β_3-AR)激动剂BRL-37344对慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)大鼠左心房肌细胞瞬时外向钾电流(I_(to))的影响。方法 26只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组,n=6)和CHF组(n=20),CHF大鼠模型的建立采用主动脉缩窄法。CHF组大鼠再被分为CHF对照组和BRL组(经尾静脉注射BRL-37344 0.4 nmol/kg,每周2次,共4周)。采用酶解法分离获得大鼠左心房肌细胞。左心房肌细胞I_(to)的测定采用全细胞膜片钳技术(以电流密度pA/pF表示)。结果当指令电压为+60 mV时,Sham组,CHF组、BRL组大鼠左心房肌细胞I_(to)电流密度达最大值,分别为(20.85±3.44)pA/pF、(11.54±1.21)pA/pF、(6.29±1.50)pA/pF。当指令电压从+60 mV至+30 mV时,BRL组和CHF对照组I_(to)电流密度均显著低于Sham组,差异有统计学意义(P0.01);BRL组显著低于CHF对照组,差异有统计学意义(P0.05或0.01)。当指令电压从+20 mV至0 mV时,BRL组和CHF对照组I_(to)电流密度均显著低于Sham组,差异有统计学意义(P0.01);但BRL组与CHF对照组之间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论β_3-AR选择性激动剂BRL-37344显著抑制了CHF大鼠心房肌细胞I_(to)电流密度。     

β_3肾上腺素能受体通过微小RNA对慢性心力衰竭大鼠左心房肌L型钙离子通道的调控

目的探讨β_3肾上腺素能受体(β_3-AR)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠左心房肌L型Ca2+通道亚单位α2δ-2编码基因CACNA2D2的调控是否与微小RNA(miRNA)-1及miRNA-328存在关联。方法 22只雄性Wistar大鼠随机选6只为正常对照组(NC组),另16只采用皮下注射异丙肾上腺素建立CHF动物模型,将存活的12只大鼠再随机分为CHF组6只和BRL组(在大鼠尾静脉注射β_3-AR特异性激动剂BRL-37344) 6只。采用超声心动图检测大鼠左心房内径(LAD)、左心房射血分数(LAEF)及LVEF。采用苏木精-伊红染色检测大鼠左心房肌病理学变化。采用实时荧光定量PCR检测大鼠左心房肌β_3-AR、CACNA2D2以及miRNA-1、miRNA-328表达水平。结果BRL组大鼠LAD显著大于NC组和CHF组[(4. 42±0. 15) mm vs (3. 50±0. 21) mm和(4. 09±0. 17) mm,P 0. 01]; BRL组LAEF显著低于NC组和CHF组[(34. 91±1. 51)%vs (59. 89±3. 17)%和(40. 09±0. 95)%,P 0.01]。与CHF组比较,BRL组大鼠左心房肌细胞水肿进一步加重,可见明显肥大细胞等病理学改变更显著。与NC组比较,CHF组大鼠左心房肌β3-AR、CACNA2D2、miRNA-1及miRNA-328表达上调(P 0. 01);与CHF组比较,BRL组大鼠左心房肌β3-AR、CACNA2D2、miRNA-1及miRNA-328表达进一步上调(P 0. 01)。miRNA-1、miRNA-328、CACNA2D2与β3-AR表达呈正相关(r=0. 870、0. 904、0. 911,P 0. 01); CACNA2D2与miRNA-1、miRNA-328表达呈正相关(r=0. 880、0. 954,P 0. 01)。结论β3-AR对左心房CACNA2D2的正性调控可能与miRNA-1、miRNA-328存在关联。     

心力衰竭大鼠心肌β_3肾上腺素受体表达及其对钙离子相关调节蛋白的作用

目的研究心力衰竭(HF)大鼠心肌β3肾上腺素受体(beta3-adrenergic receptors,β3-AR)表达情况及对钙离子相关调节蛋白的作用。方法以正常大鼠作对照组,皮下注射生理盐水;实验组大鼠皮下注射异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO),常规饲养8w。造模成功后实验组随机分为3组,激动剂组给予尾静脉注射β3-AR激动剂BRL37344,抑制剂组给予尾静脉注射β3-AR抑制剂SR59230A,HF组给予生理盐水。用药8w后行心脏彩超、RT-PCR法检测心肌组织钙调蛋白(CaM)、钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、肌内质网Ca2+-ATP酶异构体2a(SERCA2a)的mRNA表达。结果①HF组较对照组β3-ARmRNA表达水平增高,CaM、CaMKⅡ、SERCA2amRNA表达水平减低(均P0.05)。②与HF组相比较,激动剂组β3-ARmRNA水平表达增加,CaM、CaMKⅡ、SERCA2a表达进一步减少(均P0.05)。③抑制剂组β3-ARmRNA表达水平较对照组减少,CaM、CaMKⅡ、SERCA2a较对照组减低,但较HF组增加(均P0.05)。结论β3-AR激动剂减低衰竭心肌CaM、CaMKⅡ、SERCA2a的mRNA表达,导致心功恶化,β3-AR抑制剂则相反,可延缓HF进展,预示β3-AR抑制剂在药物治疗HF中的应用前景。     

心力衰竭心肌β3肾上腺素能受体与氧化应激关系的实验研究

目的 研究心力衰竭(心衰)大鼠心肌β3,肾上腺素能受体(β3-AR)变化,观察选择性β3-AR抑制剂(SR59230A)对β3-AR、氧化应激状态的影响.方法 将异丙肾上腺素(ISO)诱导的心衰大鼠随机分成ISO组(18只)与ISO+SR59230A组(21只),同时以正常大鼠为对照组(7只).ISO+SR59230A组给予SR59230A,每日2次腹腔注射;ISO组给予相应生理盐水1 ml;对照组不予处置.6周后测定心功能、心肌β3-AR、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、小三磷酸鸟苷结合蛋白(Racl)mRNA、蛋白表达及脂质过氧化物(LPO)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)指标.结果 心衰大鼠心功能恶化,心肌β3-AR mRNA表达增加,SR59230A可改善心功能,降低β3-AR mRNA表达(均为P<0.05).心衰时,eNOS、Racl mRNA及蛋白上调,LPO产生增加、T-SOD水平降低.SR59230A降低eNOS、Racl表达,增加心肌组织T-SOD水平,使LPO减少(均为P<0.05).结论 心衰时,β3-AR表达增加,加重心肌氧化应激反应,恶化心功能.β3-AR抑制剂改善心功能可能通过抑制氧化应激、延缓心衰进展来实现.     

干扰肝细胞核因子-1α对HepG2细胞载脂蛋白M及胆固醇相关代谢酶表达的影响

目的 检测肝细胞癌和癌旁组织中肝细胞核因子(HNF)-1α、肝受体同系物(LRH)-1与载脂蛋白(apo)M表达的相关性,探讨HNF-1α对apoM、apoA-Ⅰ和胆固醇合成与转化关键酶表达的影响.方法 RT-PCR检测人肝细胞癌组织和癌旁组织中HNF-1α、LRH-1、apoM的表达水平.采用小干扰RNA(SiRNA)在人肝癌细胞株HepG2细胞中干扰HNF-1 α表达后,RT-PCR检测apoM、apoA-Ⅰ及羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)、胆固醇7 α-羟化酶1(CYP7A1)、法尼醇X受体(FXR)、小异源二聚体伴侣(SHP)-1的变化情况;Western blot检测apoM在蛋白水平的变化情况.对不同数据进行单因素方差分析、配对t检验或直线相关分析.结果 HNF-1 α、LRH-1、apoM mRNA在人肝细胞癌组织中明显高于癌旁组织(t值分别为-7.075,-8.803,-7.167,P值均＜0.01);HNF-1α和LRH-1与apoM的mRNA表达水平呈正相关(r=0.353,P＜0.01;r=0.523,P＜0.01).干扰HNF-1α后,与阴性对照相比,apoM、FXR、SHP-1 mRNA水平分别下降47.4%(F=77.627,P＜0.01)、47.9%(F=76.363,P＜0.01)、65.2%(F=365.772,P＜0.01),apoM蛋白水平下调54.3%(F=43.482,P＜0.01);HMGCR、CYP7A1 mRNA水平分别升高101.1%(F=218.666,P＜0.01)、138.5%(F=171.926,P＜0.01);而对apoA-Ⅰ无明显影响(F=0.170,P＞0.05).结论 HNF-1 α可提高apoM的表达水平,并通过促进胆固醇代谢关键酶的表达和抑制胆固醇代谢相关抑制因子的生成而促进胆固醇的转化,对心血管疾病具有保护作用.

Abstract：

Objective To determine wether there were connections among hepatocyte nuclear factor1 alfa (HNF-1α),liver receptor homolog-1 (LRH-1),apolipoprotein M (apoM) and to investigate the effects of HNF-1 αt in HepG2 on the expressions of apoM,apolipoprotein A-Ⅰ (apoA-Ⅰ) and the key enzymes in cholesterol metabolism and biotransformation.Methods The mRNA expressions of apoM,LRH- 1 and HNF- 1 α were detected by RT-PCR.HNF- 1 α was interfered and RT-PCR was used to detect the changes of apo M,apo A-Ⅰ,Cyp7Al,farnesoid X receptor (FXR) and small heterodimer partner-1 (SHP-1).Western blot was used to detect the change of apo M protein.Results The expressions of apoM,LRH-1 and HNF-1αmRNA were obviously higher in HCC tissue than that in para-cancer tissue (the vaule of tis -7.167,-7.075,-8.803,P ＜0.01 respectively).HNF-1 α and LRH-1 positively correlated with the expression of apoM (r = 0.353,P ＜0.01;r = 0.523,P ＜ 0.01 respectively);RT-PCR and western blot results showed that the expressions of apoM,FXR and SHP-1 mRNA,could be obviously suppressed by HNF-1 α interfering as compared to the negative controls by 47.4%,47.9%and 65.2% (P ＜ 0.01) respectively,and the expression of apoM protein also decreased by 54.3% (F = 43.482,P ＜ 0.01).The expressions of HMGCR and CYP7A mRNA increased by 101.1% and 138.5% (P ＜ 0.01) respectively as compared to the negative control.But there is no effect on expression of apoA-Ⅰ mRNA (F = 0.170,P ＞ 0.05).Conclusions HNF-1 α could promote cholesterol biotransformation by increasing the expression of apoM and the key enzymes in cholesterol metabolism and decreasing inhibiting factor.So HNF-1 α provided protection against cardiovascular disease.     

肾上腺素能β受体在人膀胱逼尿肌中作用的年龄相关性研究

目的研究肾上腺素能β受体膀胱逼尿肌反应性的年龄相关性改变及其可能机制.方法采用细胞功能试验来检测10位老年患者逼尿肌细胞对异丙肾上腺素(肾上腺素能β受体激动剂)、BRL37344(选择性β3受体激动剂)、forskolin(腺苷酸环化酶激活剂)和DBcAMP(二丁基环腺苷酸)的反应性.同样用非选择性肾上腺素能β受体配基[3H]-双氢心得舒来进行放射性配基结合测定.并以青年人的膀胱逼尿肌标本作为对照.结果对照组和老年组之间KCl诱导的逼尿肌收缩程度无显著性差异;与对照组相比,老年组对异丙肾上腺素、BRL37344和forskolin的反应性分别下降了15.0%、17.6%和12.6%(P＜0.001),异丙肾上腺素和BRL37344的pD2(-IgEC50)值也显著降低;两组间对DBcAMP的反应性并无差别;随年龄增加逼尿肌细胞的肾上腺素能β受体的最大结合部位显著下降,但平衡解离常数却无明显差别.结论老年人膀胱平滑肌存在对肾上腺素能β受体的反应性下降,这可能是造成老年人膀胱顺应性减退的原因.受体密度的降低和腺苷酸环化酶活性的下降导致的cAMP合成减少可能是造成肾上腺素能β受体反应性下降的分子基础.     

β3肾上腺素能受体阻断剂对扩张型心肌病大鼠心功能的影响

目的研究选择性β_3肾上腺素能受体(β_3-AR)阻断剂SR59230A对扩张型心肌病大鼠心功能的影响。方法雄性Wistar大鼠72只,随机取14只分为对照组(Nor-C)和用药组(Nor-T),每组7只。其余大鼠应用异丙基肾上腺素制备心力衰竭(简称心衰)模型后,存活大鼠随机分为心衰组(HF-C,8只)和心衰用药组(HF-T,9只)。Nor-T组与HF-T组给予2 mmol/L的SR59230A 0.3 ml尾静脉注射,Nor-C组与HF-C组给予同等剂量生理盐水。血流动力学指标测定后,留取左心室心肌组织,测定内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)mRNA、β_3-AR蛋白表达以及cGMP水平。结果Nor-T组与Nor-C组比较,大鼠左心室压力最大上升速率(dp/dt_(max))及左心室压力最大下降速率(dp/dt_(min))绝对值显著增高(P<0.05);左心室收缩末期压力(P_(ES))有上升趋势,左心室舒张末期压力(P_(ED))有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);左心室等容舒张时间常数(Tc)显著缩短(P<0.05)。HF-T组较HF-C组dp/dt_(max)、dp/dt_(min)绝对值及P_(ES)显著升高(P<0.05或<0.01);而P_(ED)、Tc则明显减低(P<0.05)。HF-C组与Nor-C组比较,eNOS mRNA及β_3-AR蛋白表达显著增加(P<0.01);而Nor-T组与Nor-C组、HF-T组与HF-C组间差异无统计学意义(P>0.05)。HF-C组较Nor-C组心肌cGMP水平显著增加(P<0.01);Nor-T组与HF-T组cGMP水平分别低于Nor-C组与HF-C组(P<0.05或<0.01)。结论①β_3-AR阻断剂SR59230A可以改善大鼠心功能,尤其以心衰大鼠为著;②心衰时β_3-AR、eNOS表达增加,心肌cGMP水平增高;③β_3-AR阻断剂改善心功能的作用机制主要是通过抑制cGMP水平实现的。     

BRL37344对3T3-L1脂肪细胞脂肪分解与脂肪因子表达的影响

目的观察BRL37344对3T3-L1脂肪细胞脂肪分解及瘦素、TNF-αmRNA表达的影响。方法将3T3-L1前脂肪细胞分化成熟后,用0、10-9、10-7mol/L浓度与0、12、24、48 h作用时间的BRL37344进行干预。采用酶法检测甘油释放含量,RT-PCR法检测细胞瘦素、TNF-αmRNA表达。结果 BRL37344可显著增加3T3-L1脂肪细胞的脂肪分解,10-9、10-7mol/L的BRL37344作用48 h后,细胞内瘦素mRNA表达量分别降低38%、97%,TNF-αmRNA表达量分别降低65%、130%,呈剂量依赖性;10-7mol/L的BRL37344作用12、24、48 h后,瘦素mRNA表达量分别降低6%、48%、119%,TNF-αmRNA表达量分别降低10%、66%、158%,呈时间依赖性。结论 BRL37344可促进脂肪细胞的脂质分解,抑制瘦素、TNF-αmRNA表达,其抗肥胖作用与促进脂肪分解,改善瘦素、TNF-α抵抗状态有关。     

肝细胞核因子-1β基因与MODY5

肝细胞核因子 - 1β(HNF- 1β)又名变异型肝细胞核因子 - 1(VHNF- 1)或肝细胞因子 - B3(L FB3) ,是一种核蛋白。作为转录因子 ,HNF- 1β能识别启动子、启动子近侧元件和增强子等顺式元件中的特异靶序列并与之结合 ,对靶基因的转录起到激活或阻遏的作用 ;也可与其它转录因子相互作用 ,协同调节靶基因的最终活性状态。近来发现 HNF- 1β基因(TCF2 )突变与青少年起病的成年型糖尿病 (maturity- onsetdiabetes of the young,MODY)伴肾脏畸形有关 ,现就此作一介绍。一、HNF- 1β及 HNF- 1β基因HNF- 1β属组织特异性的包含同源结构…     

激动β_3肾上腺素受体对载脂蛋白E基因敲除小鼠肺脏血管紧张素受体表达的影响

目的探讨激动β3肾上腺素受体(β3-AR)对载脂蛋白E基因敲除(apoE-/-)老年高脂小鼠肺脏血管紧张素受体(ATR)表达的影响。方法野生型C57BL/6J小鼠10只作为对照组,apoE-/-老年高脂小鼠40只随机分为高脂模型组、β3-AR激动剂小剂量组(小剂量组)、β3-AR激动剂大剂量组(大剂量组)和β3-AR拮抗剂组(拮抗剂组),每组10只。给予高脂饮食饲养至36周龄后分别给予药物干预12周。采用全自动生化分析仪检测TC和VLDL/LDL-C水平,实时定量PCR或Western blot测定肺组织β3-AR、AT1R和AT2R的mRNA及蛋白表达水平。结果与高脂模型组比较,小剂量组、大剂量组TC和VLDL/LDL-C水平明显降低[(18.27±1.30)mmol/L,(17.06±1.50)mmol/L vs(22.20±1.29)mmol/L和(14.31±0.31)mmol/L,(12.78±0.55)mmol/L vs(19.41±0.40)mmol/L,P<0.01]。与对照组比较,高脂模型组和拮抗剂组AT1R mRNA和AT1R蛋白水平明显升高,AT2R mRNA、β3-AR蛋白水平明显降低(P<0.05)。与高脂模型组比较,小剂量组和大剂量组AT1R表达下调,AT2R和β3-AR表达上调(P<0.05,P<0.01)。结论β3-AR激动剂在改善apoE-/-老年高脂小鼠血脂代谢紊乱的同时,影响了肺组织β3-AR和ATR各亚型表达,这种受体间交互作用可能与维持高脂血症条件下肺脏的正常功能有关。     

益气温阳活血方对慢性心力衰竭心室重塑大鼠β3-肾上腺素能受体、血清Ⅰ型前胶原羧基端肽和Ⅲ型前胶原氨基端肽的影响

目的探讨益气温阳活血方对慢性心力衰竭心室重塑大鼠β3-肾上腺素能受体(β3-AR)、血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)的影响。方法通过异丙肾上腺素(ISO)诱导慢性心力衰竭动物模型。计算左、右心室心肌的心脏指数(LVMI、RVMI),应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清PⅠCP和PⅢNP含量,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法以及Western印迹法检测β3-AR mRNA及蛋白质表达水平。结果与正常组比较,模型组LVMI〔(2.987±0.318 vs 2.350±0.468)mg/g〕、血清PⅠCP〔(16.357±3.650 vs 12.843±3.124)pg/ml〕、PⅢNP〔(64.984±17.477 vs 21.245±5.354)pg/ml〕含量及β3-AR mRNA(0.888±0.064 vs 0.743±0.086)与蛋白质(4.413±0.729vs 2.312±0.394)的表达水平明显升高(均P0.05);益气温阳活血方能够明显降低慢性心力衰竭大鼠LVMI,减少PⅠCP和PⅢNP含量,抑制β3-AR mRNA与蛋白质表达水平的升高,与正常组比较〔(2.557±0.379 vs 2.350±0.468)mg/g〕、血清PⅠCP〔(13.111±2.758 vs 12.843±3.124)pg/ml〕和PⅢNP〔(25.967±9.659 vs 21.245±5.354)pg/ml〕含量及β3-AR mRNA(0.781±0.067 vs 0.743±0.086)与蛋白质(2.484±0.642 vs 2.312±0.394),均无显著性差异(P0.05)。结论益气温阳活血方可能通过抑制β3-AR的表达减少PⅠCP和PⅢNP含量逆转心室重塑,改善心脏功能。     

兴奋β3受体对快速心房起搏家兔心房肌细胞ICa,L的影响

目的:观察兴奋β3肾上腺素能受体（β3受体）对快速心房起搏(rapid atrial pacing,RAP)家兔心房肌细胞L型钙电流（ICa,L）的影响,为探索心房颤动（AF）的发病机制及治疗提供新的思路。方法: 35只20~25 kg家兔随机分组:1.离体部分:①假手术组（Sham组,n=7）:单纯开胸、安装起搏器不予起搏,1周后分离心房肌细胞,记录ICa,L（Sham组）。②手术组(n=7):以600次/min RAP 1周后,分离心房肌细胞,记录ICa,L（RAP组）;向细胞中加入β1、β2受体阻滞剂Nadolol及β3受体激动剂BRL 37344（BRL）,记录ICa,L（RAP+BRL组）;再加入β3受体特异性阻滞剂SR 59230A（SR）,记录ICa,L（RAP+BRL+SR组）。2.在体部分:①RAP组（n=7）:单纯RAP 1周;②RAP+BRL组（n=7）:RAP后给予Nadolol及BRL 1周;③RAP+BRL+SR组（n=7）:RAP后给予Nadolol、BRL及SR 1周。测定各组心房肌一氧化氮（NO）、环-磷酸鸟苷（cGMP）的含量及cGMP依赖性蛋白激酶（PKG）蛋白的表达。结果: ①与Sham组相比,RAP组ICa,L明显减小（P<001）;②与RAP组相比,RAP+BRL组ICa,L明显减小（P<001）,NO、cGMP的含量及PKG蛋白的表达明显增加（均为P<005）。③与RAP+BRL组相比,RAP+BRL+SR组ICa,L明显增大（P<001）,NO、cGMP的含量及PKG蛋白的表达明显减少（P<001,P<001,P<005）。结论: 兴奋β3受体可激活NO cGMP PKG通路并同时减小RAP家兔心房肌细胞ICa,L。     

去甲肾上腺素与哌唑嗪对高血压大鼠动脉平滑肌细胞Na+-K+-ATPase活性及mRNA表达的影响

目的 观察去甲肾上腺素(NE)及其α1肾上腺素能受体(α1-AR)拮抗剂哌唑嗪(Prazosin)对自发性高血压大鼠(SHR)动脉血管平滑肌细胞Na -K -ATPase活性及mRNA表达的影响.方法 采用生化酶学方法和逆转录聚合酶链反应技术,观察不同浓度的NE和哌唑嗪对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Na -K -ATPase活性和mRNA表达的影响.结果 与SHR组比较,NE(10-7 mol/L)能减弱Na -K -ATPase活性(3.98±0.14 vs 7.92±0.19,P＜0.01)及Na -K -ATPase α1-亚单位mRNA的表达(0.863±0.057 vs 1.307±0.051,P＜0.01),单用哌唑嗪对Na -K -ATPase活性及mRNA的表达均无影响(P＞0.05).哌唑嗪(10-7,10-6,10-5 mol/L)呈剂量依赖性减弱和阻断NE(10-7mol/L)对Na -K -ATPase活性(4.31±0.24,6.15±0.30,7.52±0.31)及Na -K -ATPase α1-亚单位mRNA表达(0.857±0.041,1.096±0.055,1.183±0.059)的影响(P＜0.01,P＜0.05).结论 NE抑制SHR Na -K -ATPase活性和下调Na -K -ATPase α1-亚单位mRNA表达,可能是通过α1-AR途径介导基因转录的下调.肾上腺素能1型受体拮抗剂哌唑嗪可通过阻断α1-AR途径抑制NE对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Na -K -ATPase活性和Na -K -ATPase α1-亚单位mRNA表达的影响.     

益肝康抑制肝星状细胞Ⅰ型胶原合成的作用机制

目的:探讨活血化瘀中药复方“益肝康”抑制肝星状细胞Ⅰ型胶原合成的作用机制。方法:应用West-ern印记检测p38的活化程度;3H-Pro掺入法检测Ⅰ型胶原合成。结果:IL-1β有明显促大鼠HSCⅠ型胶原合成作用,IL-1β(10μg/L)作用培养的HSC24小时后,3H-Pro掺入量明显高于对照组(618.33±52.69vs388.83±49.72,P<0.01),阻断p38通路后,IL-1β的促HSCⅠ型胶原合成作用受到抑制。经不同浓度p38特异性阻断剂SB203580(10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L)预处理的各组细胞,3H-Pro掺入量分别为487.33±42.75、408.50±27.47、400.83±19.49,与对照组(未用SB203580预处理,629.67±69.88)相比,其掺入量均明显降低(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。益肝康可抑制IL-1β诱导的HSC中p38活性,与未用IL-1β处理组相比,在分别刺激HSCs5分钟、15分钟、30分钟和60分钟,HSC p38活性受到明显抑制(P<0.05,P<0.01)。经益肝康浸膏预孵育的益肝康 IL-1β组与单纯IL-1β组相比,p38活性明显受到抑制(1.550±0.410vs2.973±0.953,P<0.01)。结论:IL-1β可促进大鼠HSCⅠ型胶原合成;细胞内p38信号蛋白参与了IL-1β促HSCⅠ型胶原合成;益肝康可通过阻断p38通路,从而发挥抑制HSCⅠ型胶原合成作用。     

肝细胞生长因子/转化生长因子-β1对人心房成纤维细胞增殖的作用

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子-β_1(TGF-β_1)在体外培养的人心房成纤维细胞增殖中的作用,观察HGF对人心房成纤维细胞TGF-β_1表达的影响。方法入选福建省立医院心血管外科接受换瓣手术的风湿性心脏病(RHD)患者20例,其中窦性心律(SR)者和慢性心房颤动(CAF)者各10例,分别作为SR组和CAF组。记录患者左心房内径(LAD)。换瓣术中无菌条件下取适量右心耳组织,人心房成纤维细胞原代培养。水溶性磷酸化四唑盐-1(WST-1)比色法检测HGF和TGF-β_1在不同浓度(HGF:25,50,100,200 ng/ml;TGF-β_1:0.1,1,10,100 ng/ml)和不同时间(12,24,48,72h)对人心房成纤维细胞增殖的影响。检测HGF/TGF-β_1对人心房成纤维细胞增殖的影响。半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测心房成纤维细胞TGF-β_1 mRNA水平,分为3组:SR组、CAF组和HGF干预组(CAF组中再加入100 ng/ml HGF干预48 h)。采用SPSS 19.0软件进行数据处理。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果 CAF组患者的LAD显著高于SR组[(5.76±1.37)vs(4.43±0.77)cm]。HGF和TGF-β_1对人心房成纤维细胞的增殖分别具有抑制和促进作用,且与剂量(r_(HGF)=-0.686;r_(TGF-β_1)=0.655)和时间(r_(HGF)=0.557;r_(TGF-β_1)=0.840)显著相关(P0.05),其中:100 ng/ml HGF作用48 h抑制作用最显著;10 ng/ml TGF-β_1作用48 h促进作用最显著。HGF/TGF-β_1对人心房成纤维细胞增殖具有抑制作用。与CAF组相比(1.78±0.98),SR组(0.92±0.66)和HGF干预组(0.67±0.64)的TGF-β_1 mRNA表达水平均显著减少,差异具有统计学意义(P0.01)。结论 CAF患者LAD增大,TGF-β_1分泌增多。HGF能够抑制人心房成纤维细胞TGF-β_1的生成,部分拮抗TGF-β_1促增殖作用。     

6-姜酚对β淀粉样蛋白诱导损伤PC12细胞的保护作用

目的研究6-姜酚对β淀粉样蛋白(Aβ_(1-42))引起的PC12细胞损伤的影响及可能的作用机制。方法 PC12细胞接种于含50ng/ml神经生长因子的F12K无血清培养液中,经5d诱导分化后,将细胞分为5组:对照组、Aβ_(1-42)干扰组,分别以6-姜酚(80、120及200μmol/L)进行预处理4h后的6-姜酚低、中、高剂量预处理组,再加入10μmol/L Aβ_(1-42)继续培养48h,通过Hoechst 33258核染色观察凋亡的细胞核形态改变,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐荧光探针法检测细胞内活性氧含量,微板法测定细胞内丙二醛及NO水平。结果与Aβ_(1-42)干扰组比较,6-姜酚低、中、高剂量预处理组凋亡细胞明显减少。Aβ_(1-42)干扰组较对照组显著增加活性氧(20.87±2.65 vs 2.40±0.25)、丙二醛[(0.89±0.09)nmol/mg vs(0.55±0.04)nmol/mg]及NO[(6.23±0.35)μmol/L vs(2.58±0.53)μmol/L,P0.05]。与Aβ_(1-42)干扰组比较,6-姜酚低、中、高剂量预处理组活性氧、丙二醛和NO含量均降低,以6-姜酚中剂量预处理组降低最明显,分别为3.34±0.23,(0.69±0.07)nmol/mg和(2.95±0.28)μmol/L,差异有统计学意义(P0.05)。结论 6-姜酚能抑制Aβ_(1-42)诱导的细胞凋亡,可能与其抗氧化及抗炎症作用有关。