β3肾上腺素能受体阻断剂对扩张型心肌病大鼠心功能的影响

目的研究选择性β_3肾上腺素能受体(β_3-AR)阻断剂SR59230A对扩张型心肌病大鼠心功能的影响。方法雄性Wistar大鼠72只,随机取14只分为对照组(Nor-C)和用药组(Nor-T),每组7只。其余大鼠应用异丙基肾上腺素制备心力衰竭(简称心衰)模型后,存活大鼠随机分为心衰组(HF-C,8只)和心衰用药组(HF-T,9只)。Nor-T组与HF-T组给予2 mmol/L的SR59230A 0.3 ml尾静脉注射,Nor-C组与HF-C组给予同等剂量生理盐水。血流动力学指标测定后,留取左心室心肌组织,测定内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)mRNA、β_3-AR蛋白表达以及cGMP水平。结果Nor-T组与Nor-C组比较,大鼠左心室压力最大上升速率(dp/dt_(max))及左心室压力最大下降速率(dp/dt_(min))绝对值显著增高(P<0.05);左心室收缩末期压力(P_(ES))有上升趋势,左心室舒张末期压力(P_(ED))有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);左心室等容舒张时间常数(Tc)显著缩短(P<0.05)。HF-T组较HF-C组dp/dt_(max)、dp/dt_(min)绝对值及P_(ES)显著升高(P<0.05或<0.01);而P_(ED)、Tc则明显减低(P<0.05)。HF-C组与Nor-C组比较,eNOS mRNA及β_3-AR蛋白表达显著增加(P<0.01);而Nor-T组与Nor-C组、HF-T组与HF-C组间差异无统计学意义(P>0.05)。HF-C组较Nor-C组心肌cGMP水平显著增加(P<0.01);Nor-T组与HF-T组cGMP水平分别低于Nor-C组与HF-C组(P<0.05或<0.01)。结论①β_3-AR阻断剂SR59230A可以改善大鼠心功能,尤其以心衰大鼠为著;②心衰时β_3-AR、eNOS表达增加,心肌cGMP水平增高;③β_3-AR阻断剂改善心功能的作用机制主要是通过抑制cGMP水平实现的。     

β3肾上腺素能受体对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的:分别应用选择性β3肾上腺素受体(β3-adrenoceptor,β3-AR)阻断剂及激动剂对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)致慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)模型大鼠进行干预,观察β3-AR是否在CHF进展中介导心肌纤维化。方法:90只健康雄性Wistar大鼠随机分为4组:1正常对照组:腹腔注射0.9%氯化钠;2 CHF组:腹腔注射ISO+0.9%氯化钠;3β3-AR激动剂干预心衰组(BRL组):腹腔注射ISO+尾静脉注射BRL37344;4β3-AR抑制剂干预心衰组(SR组):腹腔注射ISO+SR59230A。干预结束后检测血流动力学指标,心肌病理学变化,胶原容积分数(CVF),心肌羟脯氨酸(Hyp)含量等。结果:1模型组大鼠在12周后心功能明显下降,出现心肌重构,CHF模型成功建立。2BRL组大鼠较CHF组LVSP、±dp/dtmax降低,LVEDP、LVW/BW升高(P0.05或P0.01),心肌出现明显变性及纤维化改变,CVF升高(P0.05),心肌Hyp含量升高(P0.05);SR组较CHF组HR、LVEDP下降(P0.05或P0.01),LVSP显著升高(P0.05)。结论:1腹腔注射ISO可成功复制CHF大鼠模型。2β3-AR激动后可促进心肌纤维化,提示β3-AR可能通过介导心肌重构参与CHF进展。     

心力衰竭大鼠心肌β_3肾上腺素受体表达及其对钙离子相关调节蛋白的作用

目的研究心力衰竭(HF)大鼠心肌β3肾上腺素受体(beta3-adrenergic receptors,β3-AR)表达情况及对钙离子相关调节蛋白的作用。方法以正常大鼠作对照组,皮下注射生理盐水;实验组大鼠皮下注射异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO),常规饲养8w。造模成功后实验组随机分为3组,激动剂组给予尾静脉注射β3-AR激动剂BRL37344,抑制剂组给予尾静脉注射β3-AR抑制剂SR59230A,HF组给予生理盐水。用药8w后行心脏彩超、RT-PCR法检测心肌组织钙调蛋白(CaM)、钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、肌内质网Ca2+-ATP酶异构体2a(SERCA2a)的mRNA表达。结果①HF组较对照组β3-ARmRNA表达水平增高,CaM、CaMKⅡ、SERCA2amRNA表达水平减低(均P0.05)。②与HF组相比较,激动剂组β3-ARmRNA水平表达增加,CaM、CaMKⅡ、SERCA2a表达进一步减少(均P0.05)。③抑制剂组β3-ARmRNA表达水平较对照组减少,CaM、CaMKⅡ、SERCA2a较对照组减低,但较HF组增加(均P0.05)。结论β3-AR激动剂减低衰竭心肌CaM、CaMKⅡ、SERCA2a的mRNA表达,导致心功恶化,β3-AR抑制剂则相反,可延缓HF进展,预示β3-AR抑制剂在药物治疗HF中的应用前景。     

老年心力衰竭大鼠心脏和肺β_3肾上腺素能受体的实验研究

目的探讨老年心力衰竭(心衰)模型大鼠心脏及肺β3肾上腺素能受体(β3-AR)变化及相互关系。方法选择雄性老年Wistar大鼠48只,应用主动脉结扎术制备心衰模型。大鼠随机分为假手术组和心衰组,每组24只,每组术后5、7、9、11周每个时间点各6只。测定2组大鼠血流动力学、病理、心肌及肺组织β3-AR mRNA表达。结果与假手术组比较,心衰组术后9、11周心率、左心室收缩末压、左心室压力最大上升速率显著降低,左心室压力最大下降速率显著增高,5、7、9、11周左心室舒张末压显著增高,差异有统计学意义(P0.01)。心衰组术后7周出现肺水肿,术后9周出现心肌核坏死。心衰组术后5、7、9、11周每个时间点肺组织β3-AR mRNA表达较2周前均明显减低(P0.05)。心衰组术后9、11周心肌组织β3-AR mRNA表达较假手术组明显升高(1.21±0.26 vs 0.98±0.22,1.26±0.23 vs 1.05±0.24,P0.01)。结论心衰时,肺组织β3-AR mRNA表达下降,心肌组织表达升高,且肺的变化先于心肌组织。     

比索洛尔对慢性心力衰竭大鼠心肌β_1肾上腺素能受体及心功能的调节作用

目的研究比索洛尔对腹主动脉结扎所致慢性心力衰竭大鼠β_1肾上腺素能受体(β_1-AR)心功能的调节作用。方法 SD 大鼠40只,随机分为4组,即腹主动脉缩窄(COA)组;COA+比索洛尔组;假手术组;假手术+比索洛尔组。采用超声心动图和心室插管法评估心功能,ELISA_法检测各组大鼠血浆去甲肾上腺素(NE)水平,RIA 法检测心肌腺苷酸环化酶(AC)活性,通过 RT-PCR 检测心肌β_1-AR、β肾上腺素能受体激酶1(β-ARK1)和 Gi 蛋白 mRNA 的表达变化,Western blot 检测β_1-AR 蛋白水平的表达变化。结果 COA 组大鼠心功能恶化,血浆 NE 水平明显升高,β_1-AR mRNA 表达减少、β-ARK1和 Gi 蛋白 mRNA 表达增加,β_1-AR 的蛋白水平表达减少,AC 活性明显下降;比索洛尔明显改善大鼠心功能[射血分数:COA+比索洛尔组:(66.7±8.4)%比 COA 组:(43.3±7.7)%,P<0.05],降低血浆 NE 水平[COA+比索洛尔组:(570.2±41.2)pg/mL 比 COA 组:(908.24±75.10)pg/mL,P<0.05],增高...     

比索洛尔对慢性心力衰竭大鼠心肌β1肾上腺素能受体及心功能的调节作用

目的 研究比索洛尔对腹主动脉结扎所致慢性心力衰竭大鼠β1肾上腺素能受体(β1-AR)心功能的调节作用.方法 SD大鼠40只,随机分为4组,即腹主动脉缩窄(COA)组;COA 比索洛尔组;假手术组;假手术 比索洛尔组.采用超声心动图和心室插管法评估心功能,ELISA法检测各组大鼠血浆去甲肾上腺素(NE)水平,RIA法检测心肌腺苷酸环化酶(AC)活性,通过RT-PCR检测心肌β1-AR、β肾上腺素能受体激酶1(β-ARaKl)和Gi蛋白mRNA的表达变化,Western blot检测β1-AR蛋白水平的表达变化.结果 COA组大鼠心功能恶化,血浆NE水平明显升高,β1-ARmRNA表达减少、β-ARKl和Gi蛋白mRNA表达增加,β1-AR的蛋白水平表达减少,AC活性明显下降;比索洛尔明显改善大鼠心功能[射血分数:COA 比索洛尔组:(66.7±8.4)%比COA组:(43.3±7.7)%,P<0.05],降低血浆NE水平[COA 比索洛尔组:(570.2±41.2)pg/mL比COA组:(908.24±75.10)pg/mL,P<0.05],增高β1-AR mRNA表达[COA 比索洛尔组:(57.5±5.4)比COA组:(44.9±4.2)P <0.05],降低β-ARKl和Gi蛋白mRNA表达[β-ARKl:COA 比索洛尔组:(38.0±3.2)比COA组:(52.4β4.1),P<0.05;Gi蛋白:COA 比索洛尔组:(72.8±5.8)%比COA组:(102.9±8.5)%,P<0.053,Western blot 检测显示比索洛尔也增加β1-AR的蛋白水平表达[COA 比索洛尔组:(59.2±4.8)%比COA组:(30.9±2.3)%,P<0.05],AC活性明显升高.结论 比索洛尔能够调节慢性心力衰竭大鼠β1-AR信号转导通路,改善心功能,延缓心力衰竭进展.     

β_3肾上腺素受体调节肝细胞核因子活性促进肝细胞载脂蛋白A-Ⅰ基因的转录

目的探讨β_3肾上腺素受体(β_3-AR)对肝细胞载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)基因转录的调控作用。方法不同浓度(10-5～10-10 mol/L)β_3-AR激动剂(BRL37344)和拮抗剂(SR59230A)分别孵育HepG2细胞,CCK8检测细胞活性。将HepG2细胞分为对照组、激动剂组(10-6 mol/L的BRL37344)和拮抗剂组(10-7 mol/L的SR59230A),孵育6h;RT-qPCR检测apoA-ⅠmRNA表达;ELISA检测细胞外基质apoA-Ⅰ分泌水平;染色质免疫共沉淀联合RT-PCR检测肝细胞核因子(HNF)-4和HNF-3及早期生长反应蛋白1(EGR-1)。结果 HepG2细胞在10-6～10-8 mol/L的BRL37344和SR59230A区间内生长增殖良好,孵育6h和24h时细胞呈现较高活性。与对照组比较,激动剂组肝细胞apoA-ⅠmRNA和细胞外基质apoA-Ⅰ分泌水平上调[2.9±0.5 vs 1.0±0.2,(590.1±54.6)μg/ml vs(395.5±23.4)μg/ml,P0.01],且HNF-4和HNF-3结合活性显著升高(90.4±13.4 vs 17.2±1.2,78.3±20.6 vs 19.7±2.5,P0.01)。3组肝细胞EGR-1结合活性比较,无统计学差异(P0.05)。结论激活β_3-AR使肝细胞HNF-4和HNF-3活性增高,可能是β_3-AR上调肝脏apoA-Ⅰ转录水平的分子机制之一。     

麝香保心丸对心力衰竭大鼠肺脏肾上腺素受体表达的影响

目的探讨麝香保心丸对心力衰竭大鼠肺脏α_(1A)-肾上腺素受体(α_(1A)-AR)和β_1、β_2肾上腺素受体(β-AR)表达水平的变化。方法选择Wistar大鼠54只,随机分为对照组(A组,10只)、假手术组(B组,10只)、心力衰竭模型对照组(C组,9只)、阳性药物对照组(D组,9只)、麝香保心丸小剂量组(E组,9只)和麝香保心丸大剂量组(F组,9只)。超声心动图检测用药前后大鼠心功能,采用Western blot测定各组大鼠肺组织α_(1A)-AR和β_1-AR、β_2-AR蛋白表达水平。结果用药前,A组与B组大鼠LVEF比较,差异无统计学意义(P>0.05);与B组比较,C、D、E、F组大鼠LVEF明显降低(P<0.01)。用药后与C组比较,F组大鼠LVEF明显改善;与B组比较,C组大鼠α_(1A)-AR、β_1-AR蛋白明显降低,β_2-AR蛋白明显升高;与C组比较,D、E、F组大鼠α_(1A)-AR、β_1-AR、β_2-AR蛋白明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论麝香保心丸能改善心肌梗死后心力衰竭大鼠的心脏功能,肾上腺素受体表达水平的变化,有利于维持心力衰竭时肺脏的通气/血流比值,进而对心力衰竭起到有益的治疗作用。     

β_2-肾上腺素受体亚型激动对于血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究β2-肾上腺素受体亚型(beta2-adrenergic receptor,β2-AR)激动对于血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的调控效应。方法应用携带重组β2-AR片段的腺病毒感染VSMC制备受体过表达模型。分别应用Zinterol(ZIN)以及异丙基肾上腺素(ISO)刺激生理状态和β2-AR过表达的平滑肌细胞后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和细胞计数法检测吸光度(A,曾称光密度OD)值和细胞数目的改变。结果ZIN刺激1天时A值开始下降(P<0.05),3天时抑制作用达高峰,抑制率为(32.00±1.62)%。细胞计数法测得ZIN激动3天时细胞数为对照组的(69.29±9.26)%。应用CGP20712A阻断β1-AR激活后,非选择性-βAR激动剂ISO刺激细胞后得到结果相似。特异性β2-AR拮抗剂ICI 118,551可逆转此抑制效应。ISO刺激过表达的β2-AR 3天时MTT检测结果相似。结论β2-AR亚型激动可抑制VSMC的增殖。     

心力衰竭大鼠肾脏α_1及β肾上腺素受体各亚型表达的改变

目的探讨大鼠心力衰竭时肾脏α_1肾上腺素受体(α_1-AR)和β肾上腺素受体(β-AR)各亚型表达水平的变化。方法选择雄性Wistar大鼠35只,随机分为对照组10只、假手术组10只,其余大鼠制作心肌梗死后心力衰竭模型,成功9只为模型组。取大鼠肾脏皮质,采用Western blot法分别测定各组大鼠α_1-AR亚型(α_(1)-AR、α_(1B)-AR、α_(1D)-AR)和β-AR亚型(β_1-AR、β_2-AR)表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠α_(1A)-AR、β_1-AR表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.01);各组大鼠α_(1B)-AR、α_(1D)-AR、β_2-AR比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论心力衰竭时肾脏α_(1A)-AR和β_1-AR明显下调,可能与交感神经系统激活有关;而β_2-AR表达水平无明显变化,可能为代偿β_1-AR下调带来的不利影响,以维持肾脏有效灌注,保护肾脏功能。     

β1肾上腺素能受体反义寡核苷酸对自发性高血压大鼠心肌间质及左室功能的影响

目的观察在自发性高血压大鼠中以阳离子脂质体载体介导的β1肾上腺素能受体反义寡核苷酸逆转其心肌纤维化及改善其左室舒缩功能的作用.方法 20只雄性19周龄SHR随机分为阳性对照组(n6),反义(AS-ODN)治疗组(n7,尾静脉β1-AS-ODN 1.0 mg/kg 20天内共3次),反向(IN-ODN)治疗组(n7,尾静脉注射β1-IN-ODN 1.0 mg/kg 20天内共3次),另选同龄雄性Wistar Kyoto(WKY)大鼠为正常对照(n6).常规方法测定尾动脉收缩压、左室血流动力学指标及左心室重量指数(LVMI),显微荧光技术观察FITC标记的寡核苷酸在心肌细胞内的摄取及分布,Van Gieson染色法检测左室胶原容积分数(CVF),RT-PCR法检测左室心肌β1肾上腺素能受体(β1-AR)mRNA表达.结果 (1)转染后3 d,寡核苷酸被心肌细胞有效摄取,均匀分布于其胞浆内;(2)与WKY组大鼠相比较,28周龄SHR存在高血压,心肌肥大、纤维化及左室功能不全;(3)与SHR组比较,β1-AS-ODN治疗组大鼠左室心肌β1肾上腺素能受体(β1-AR)mRNA表达减少,血压及LVMI、CVF降低,左室舒缩功能得到改善.结论β1-AS-ODN通过在转录水平抑制SHRβ1-AR的表达,在持久而有效降压的同时,更能有效地逆转左室肥大、纤维化及改善左室功能.     

心力衰竭患者心肌组织β1、β2和β3受体mRNA表达改变与心功能的关系

目的探讨不同程度心力衰竭(心衰)患者心肌组织β1、β2、β3受体mRNA表达的变化及其与心功能的关系.方法瓣膜性心脏病接受瓣膜置换术的心衰患者24例(男10例,女14例,年龄(46.25±12.64)岁;NYHA分级Ⅱ级6例,Ⅲ级13例,Ⅳ级5例),意外伤亡的器官捐献者5例为正常对照组.瓣膜置换术的心衰患者在手术中取黄豆大小左室乳头肌数块,意外伤亡者于死亡后立即取出心肌标本冷藏,4小时内取左室乳头肌数块.用Trizol提取心肌组织总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测心肌组织β1、β2、β3受体mRNA表达,凝胶成像系统分析处理,计算β-mRNA与β-actin的灰度比值.结果心衰时β1受体mRNA表达减少,心衰程度越重表达越少(心功能Ⅱ级组0.68±0.07,心功能Ⅲ级组0.50±0.10,心功能Ⅳ级组0.32±0.09,正常组0.84±0.06;P＜0.01);β2受体表达在不同程度心衰患者之间改变差异显著性(分别为Ⅱ级0.52±0.09,Ⅲ级0.57±0.10,Ⅳ级0.63±0.09,正常组0.53±0.06;P＞0.05);β3受体表达增多,心衰程度越重表达越多(分别为Ⅱ级0.44±0.06,Ⅲ级0.58±0.10,Ⅳ级0.77±0.09,正常组0.30±0.08;P＜0.01).结论心衰时β1受体下调,而β3受体上调,心肌组织β受体mRNA表达的变化与心功能密切相关.     

丝瓜络对慢性心力衰竭大鼠心肌钙调蛋白mRNA表达的影响

目的 研究丝瓜络(RLF)对慢性心力衰竭大鼠心肌钙调蛋白(CaM) mRNA表达的影响,初步探讨RLF改善心衰大鼠心功能的可能作用机制及与CaM的关系.方法 选择Wista大鼠,采用异丙肾上腺素法复制慢性心力衰竭模型,分别给予RLF5 g· kg-1·d-1和10 g·kg-1·d-1,灌胃,连续给药28 d.采用实时定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,以β-actin为内参,系统观察RLF对心衰大鼠心脏CaM基因表达的影响.结果 与心衰模型组比较,RLF大剂量连续用药可降低心衰大鼠心脏CaM mRNA的表达(P＜0.05).结论 RLF可通过减少慢性心衰大鼠心肌CaM mRNA的表达,从而改善心衰大鼠的心功能.     

β1肾上腺素能受体反义寡核苷酸对自发性高血压大鼠心肌间质及左室功能的影响

目的观察在自发性高血压大鼠中以阳离子脂质体载体介导的β1肾上腺素能受体反义寡核苷酸逆转其心肌纤维化及改善其左室舒缩功能的作用。方法20只雄性19周龄SHR随机分为阳性对照组(n=6),反义(AS-ODN)治疗组(n=7,尾静脉β1-AS-ODN1.0mg/kg20天内共3次),反向(IN-ODN)治疗组(n=7,尾静脉注射β1-IN-ODN1.0mg/kg20天内共3次),另选同龄雄性WistarKyoto(WKY)大鼠为正常对照(n=6)。常规方法测定尾动脉收缩压、左室血流动力学指标及左心室重量指数(LVMI),显微荧光技术观察FITC标记的寡核苷酸在心肌细胞内的摄取及分布,VanGieson染色法检测左室胶原容积分数(CVF),RT-PCR法检测左室心肌β1肾上腺素能受体(β1-AR)mRNA表达。结果(1)转染后3d,寡核苷酸被心肌细胞有效摄取,均匀分布于其胞浆内;(2)与WKY组大鼠相比较,28周龄SHR存在高血压,心肌肥大、纤维化及左室功能不全;(3)与SHR组比较,β1-AS-ODN治疗组大鼠左室心肌β1肾上腺素能受体(β1-AR)mRNA表达减少,血压及LVMI、CVF降低,左室舒缩功能得到改善。结论β1-AS-ODN通过在转录水平抑制SHRβ1-AR的表达,在持久而有效降压的同时,更能有效地逆转左室肥大、纤维化及改善左室功能。     

慢病毒转染的β3-AR基因对心肌肥厚的影响

目的:探讨β3肾上腺素能受体(β3-AR)对SD大鼠乳鼠心肌肥大的影响及其机制。方法:体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,用携带β3-AR基因的慢病毒转染细胞后,用去甲肾上腺素(NE)诱导细胞48h,建立心肌细胞肥大模型。实验分4组:空白对照组(Control组)、心肌肥厚组(NE组)、β3-AR基因转染+NE组(β3-AR组)、空病毒转染+NE组(空病毒组)。用免疫荧光法鉴定心肌细胞,倒置荧光显微镜观察病毒转染组绿色荧光蛋白(GFP)表达,免疫印迹法(Western Blot)检测β3-AR、丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)、细胞外信号调控激酶(ERK1/2)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)和ERK(p-ERK1/2)及原癌基因c-myc、c-fos蛋白水平的表达。结果:(1)慢病毒介导β3-AR基因转染心肌细胞,β3-AR表达较空白对照组明显升高。(2)用Western Blot检测各实验组细胞原癌基因c-myc、c-fos表达,其中NE组、β3-AR组、空病毒组表达均高于空白对照组,其中β3-AR组cmyc、c-fos表达明显高于NE组。(3)NE组、β3-AR组、空病毒组p38MAPK及ERK1/2的磷酸化水平较空白对照组明显上调,其中β3-AR组表达最高。结论:慢病毒介导的β3-AR基因转染使心肌细胞有效高表达β3-AR,β3-AR可能通过MAPK通路促进心肌肥厚。     

心力衰竭患者心肌组织β1、β2、β3受体mRNA表达改变与心功能的关系

目的探讨不同程度心力衰竭(心衰)患心肌组织β1、β2、β3受体mRNA表达的变化及其与心功能的关系。方法应用逆转录聚合酶链反应方法检测24例瓣膜置换术的心衰患和5例健康对照心肌组织β1、β2、β3受体mRNA表达。结果心衰时β1受体mRNA表达减少,心衰程度越重表达越少;β2受体表达在不同程度心衰患之间改变差异无统计学意义;β3受体表达增多,心衰程度越重表达越多。结论心衰时β1受体下调,而β3受体上调,心肌组织β受体mRNA的变化与心功能密切相关。     

肝纤维化过程中去甲肾上腺素各受体亚型表达的动态变化

目的 研究肝纤维化过程中去甲肾上腺素各受体亚型表达的动态变化.方法 胆总管结扎法建立大鼠肝纤维化模型,HE,Masson染色观察肝脏病理形态学变化;免疫组织化学法检测肝星状细胞活化指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况;Western blot和实时荧光定量PCR检测α-肾上腺素受体(AR)、β1-AR、β2-AR蛋白和mRNA的表达水平.对数据进行单因素方差分析,LSD检验及相关分析.结果 HE及Masson三色染色显示:随着造模时间延长肝纤维化程度逐渐加重.α-SMA免疫组织化学染色显示:随着肝纤维化的发展,大鼠肝组织中α-SMA阳性细胞明显增多,造模1、2、3,4周时分别为10.58%±1.75%,24.14%±2.02%、29.74%±2.59%,34.28%±2.01%,而假手术组为4.12%±1.51%,P＜0.01.Western blot检测结果显示,造模1～4周大鼠肝组织α-AR、β1-AR,β2-AR蛋白表达量均明显升高(P＜0.05).实时荧光定量PCR结果证实,随着肝纤维化的发展,α-AR、β1-AR、β2-AR mRNA表达水平均逐渐上升(P＜0.01).α-SMA与α-AR、β1-AR、β2-AR蛋白表达水平的相关分析显示,α-SMA与α-AR、β1-AR及β2-AR呈正相关,r值分别为0.564,0.753和0.606.结论 胆总管结扎法成功建立胆汁淤积性大鼠肝纤维化模型,在肝纤维化形成过程中肝星状细胞表达α-SMA增加.随着肝纤维化的进展,α-AR、β1-AR、β2-AR蛋白及mRNA水平明显增加,且与α-SMA呈正相关.     

益气温阳活血方对慢性心力衰竭心室重塑大鼠β3-肾上腺素能受体、血清Ⅰ型前胶原羧基端肽和Ⅲ型前胶原氨基端肽的影响

目的探讨益气温阳活血方对慢性心力衰竭心室重塑大鼠β3-肾上腺素能受体(β3-AR)、血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)的影响。方法通过异丙肾上腺素(ISO)诱导慢性心力衰竭动物模型。计算左、右心室心肌的心脏指数(LVMI、RVMI),应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清PⅠCP和PⅢNP含量,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法以及Western印迹法检测β3-AR mRNA及蛋白质表达水平。结果与正常组比较,模型组LVMI〔(2.987±0.318 vs 2.350±0.468)mg/g〕、血清PⅠCP〔(16.357±3.650 vs 12.843±3.124)pg/ml〕、PⅢNP〔(64.984±17.477 vs 21.245±5.354)pg/ml〕含量及β3-AR mRNA(0.888±0.064 vs 0.743±0.086)与蛋白质(4.413±0.729vs 2.312±0.394)的表达水平明显升高(均P0.05);益气温阳活血方能够明显降低慢性心力衰竭大鼠LVMI,减少PⅠCP和PⅢNP含量,抑制β3-AR mRNA与蛋白质表达水平的升高,与正常组比较〔(2.557±0.379 vs 2.350±0.468)mg/g〕、血清PⅠCP〔(13.111±2.758 vs 12.843±3.124)pg/ml〕和PⅢNP〔(25.967±9.659 vs 21.245±5.354)pg/ml〕含量及β3-AR mRNA(0.781±0.067 vs 0.743±0.086)与蛋白质(2.484±0.642 vs 2.312±0.394),均无显著性差异(P0.05)。结论益气温阳活血方可能通过抑制β3-AR的表达减少PⅠCP和PⅢNP含量逆转心室重塑,改善心脏功能。     

β_1肾上腺素受体激动对血管平滑肌细胞迁移的影响

目的观察β_1肾上腺素受体(β_1-AR)激动对血管平滑肌细胞(VSMC)迁移的影响。方法选择原代培养的Wistar大鼠胸主动脉VSMC并分7组:5%FBS组(对照组)、去甲肾上腺素(NE)刺激组(A组)、NE+β_1-AR阻断剂组(B组)、异丙肾上腺素(ISO)刺激组(C组)、ISO+β_1-AR阻断剂组(D组)、NE+蛋白激酶A阻断剂组(E组),NE+蛋白激酶抑制剂组(F组)。各组不同条件持续培养24 h后,以细胞划片法观察各组VSMC迁移距离的变化。另选VSMC加入10~(-4)～10~(-7)mol/L浓度NE刺激,观察其对细胞迁移效率的影响。结果与对照组比较,A组、C组VSMC迁移距离明显缩短,差异有统计学意义(P<0.01)。B组、D组迁移距离与对照组比较,差异无统计学意义。随着NE浓度增加,VSMC迁移距离逐渐缩短,NE对于VSMC迁移的抑制效应呈剂量依赖性。F组VSMC相对迁移距离与A组比较,差异无统计学意义。结论β_1-AR激动可抑制VSMC迁移,此过程不依赖蛋白激酶A的激活。     

辛伐他汀对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织纤维化的影响及分子机制

目的 探讨辛伐他汀对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)肝组织纤维化模型及肝星状细胞的作用及其分子机制.方法 ①体内实验应用高脂饮食建立NAFLD肝组织纤维化大鼠模型,并用辛伐他汀干预,RT-PCR法和Western印迹检测大鼠肝组织中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型NOS(iNOS)和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白的表达.②体外实验采用促进脂肪细胞分化的培养基诱导人肝星状细胞株LX-2细胞获得静止表型,分别用转化生长因子β1( TGF-β1)、NOS抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)、辛伐他汀、TGF-β1+辛伐他汀、L-NAME+辛伐他汀处理静止型LX-2细胞,RT-PCR法和Western印迹检测各组LX-2细胞中eNOS、iNOS、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原mRNA及蛋白的变化.结果 ①随造模时间延长,模型组大鼠肝组织eNOS mRNA和蛋白表达逐渐减少,iNOS和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达逐渐增加,与正常对照组比较差异有统计学意义(P分别＜0.05和0.01).与24周末模型组相比,辛伐他汀干预组大鼠肝组织eNOS mRNA和蛋白的表达分别增加(0.30±0.02比0.24±0.01和0.45±0.04比0.22±0.02,P值均＜0.05),iNOS mRNA和蛋白的表达分别减少,Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达分别减少(P值均＜0.05).模型组大鼠肝组织中eNOS mRNA和蛋白表达与Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达均呈负相关(P值均＜0.01);iNOS mRNA和蛋白表达与Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达均呈正相关(P值均＜0.01).②体外培养LX-2细胞中,L-NAME能抑制LX-2细胞活化,减少eNOS和iNOS的表达,增加α-SMA和Ⅰ型胶原表达,与TGF-β1作用一致;辛伐他汀能直接增加静止型及活化型LX-2细胞中eNOS的表达,减少iNOS的表达,维持其静止表型,抑制其活化.结论 辛伐他汀通过增加LX-2细胞中eNOS表达,减少iNOS表达,减少α-SMA和Ⅰ型胶原生成,抑制或逆转肝纤维化发生和发展.