胶体金免疫层析法定量检测烟叶中霜霉威残留

【背景和目的】利用胶体金免疫层析技术研制霜霉威定量检测试纸条,并探究其在烟叶样品中的应用。【方法】将霜霉威单克隆抗体标记在胶体金颗粒上制备金标抗体,优化试纸条反应材料,构建霜霉威免疫层析定量试纸条,验证该试纸条的检出限、定量限、准确性和特异性。【结果】（1）所研制的霜霉威定量试纸条的检测范围为1.25～20 mg/kg,检出限和定量限分别为1.187 mg/kg和3.147 mg/kg;加标回收率84.7%～116.7%,相对标准偏差5.3%～10.9%。（2）可特异性识别霜霉威,对烟草中常用杀菌剂无交叉反应。（3）试纸条检测结果与高效液相色谱-串联质谱法检测结果的相对误差在4.3%～20.1%,R2=0.9898。【结论】该试纸条具有操作方便、检测时间短、准确性高、特异性强的优点,可作为霜霉威残留现场检测的有效手段。     

胶体金试纸与气相色谱法检测毒死蜱结果相符率比较

目的通过研究胶体金法与气相色谱法在检测毒死蜱中的应用,证实胶体金试纸条在检测蔬菜中毒死蜱残留的可靠性。方法对比胶体金试纸半定量法和气相色谱定量法检测毒死蜱的结果。结果胶体金试纸条检测阴性样品得出的结果与气相色谱的结果符合率为100%,添加的阳性样品符合率也达到100%。添加的界限值样品的回收率达到96%。结论与气相色谱法相比较,胶体金试纸检测毒死蜱操作简便、观察直观、快速、省时,其特异性、敏感性较高,可作为蔬菜采摘前毒死蜱农药残留自我检测的手段。并可以此为基础建立一个不同于以前的毒死蜱监管模式。     

胶体金免疫层析法半定量检测鸡肉中磺胺嘧啶残留

本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记磺胺嘧啶单克隆抗体,磺胺嘧啶竞争物包被于硝酸纤维素膜,制成免疫层析快速检测试纸条。该试纸条可以在15min内完成对磺胺嘧啶残留的半定量检测,灵敏度为5ng/ml,与其它磺胺类药物无交叉反应,在鸡肉中的回收率为71%～95%;用试纸条与高效液相法对来自动物试验的56份鸡肉样品进行对比检测。以我国磺胺嘧啶残留限量标准(100ng/g)为标准,二者符合率为100%。该方法灵敏度高,简便快速,无需特殊仪器设备,有良好的开发应用前景。     

烟叶中多菌灵胶体金定量试纸条的研制及应用

为了建立烟叶中残留的多菌灵的快速定量检测方法,利用胶体金免疫层析技术并配套胶体金读数仪,确定更适用于现场检测的多菌灵试纸条的产品形式,明确温度对胶体金试纸条定量结果的影响,用恒温孵育器控制检测温度,基于胶体金读数仪绘制标准曲线。结果表明:①研制的定量胶体金试纸条检测限为0.017 mg/kg,检测范围为0.020~2.0 mg/kg,定量范围为0.020~0.50 mg/kg,加标回收率为95.6%~128.9%,批内变异系数为6.2%~11.2%;②与高效液相色谱-串联质谱法的检测结果相比,阴性样品检测结果准确率大于95%,阳性样品的检测结果在定量范围0.020~0.50 mg/kg内线性关系良好;③对于与多菌灵结构相似的药物,试纸条与其无交叉反应,可特异性定量检测烟叶中残留的多菌灵。本研究中研制的多菌灵定量试纸条具有操作简便、检测速度快、准确性高、稳定性好等优点,适用于基层实验室的大批量样品检测及现场快速检测。      

原料乳中玉米赤霉烯酮胶体金免疫试纸条检测方法的建立

采用柠檬酸三钠法合成胶体金,与抗玉米赤霉烯酮单抗(ZEA-m Ab)制成抗体-胶体金标记物,包被于胶体金结合垫上。玉米赤霉烯酮半抗原和蛋白的偶联物(ZEA-BSA)和羊抗鼠Ig G分别喷涂于硝酸纤维素膜作为检测线(T线)和质控线(C线),建立原料乳中玉米赤霉烯酮(ZEA)的胶体金免疫试纸条检测法。结果显示,试纸条的灵敏度为30n g/m L,与其他毒素无交叉反应,10 min内即可肉眼观察结果。检测添加有玉米赤霉烯酮的原料乳样品,该试纸条的检测限为50 ng/m L。方法可用于原料乳中玉米赤霉烯酮的快速检测。     

高效液相色谱法测定豆芽中6-苄基腺嘌呤含量的方法优化

目的建立高效液相色谱法测定豆芽中6-苄基腺嘌呤(6-benzylaminopurine,6-BA)含量的方法,验证6-BA快速检测试纸条(胶体金法)的检测结果。方法以6-BA含量为指标,研究样品的浸泡超声时间,离心转速,旋蒸温度,流动相比例等测定条件对豆芽中6-BA测定结果的影响。以绿豆芽为试样,对比高效液相色谱法和6-BA快速检测试纸条(胶体金法)的检测结果。结果 6-苄基腺嘌呤在0.04～1.0μg/mL的浓度范围内线性关系良好,定量限为0.02 mg/kg,回收率为92.0%～106.2%,相对标准偏差为1.06%～2.31%。实际样品的检测结果与快速检测试纸条(胶体金法)的结果与一致。结论优化后的高效液相色谱法结果准确,回收率较好,适合用于豆芽中6-BA的测定。也可用于6-BA快检设备盲样的定量和稳定性验证,为快速有效测定豆芽中6-BA含量提供理论支撑。     

T-2毒素快速定量检测试纸条的研究

为研制一种快速定量检测玉米中T-2毒素含量的胶体金试纸条,对T-2毒素单克隆抗体进行标记并对胶体金试纸条性能进行研究。用胶体金标记T-2毒素单克隆抗体,通过测定加入不同量碳酸钾后吸光度值的变化,确定标记的最佳pH值,通过与抗原进行正交试验确定最佳组合条件,应用胶体金定量读数仪通过检测线和对照线的对比,检测试纸条的性能。结果表明,单克隆抗体标记的最佳pH值为8.5,最佳标记浓度为20μg/mL,抗原的包被浓度为0.5mg/mL,羊抗鼠IgG的包被浓度为1.0mg/mL,试纸条检测T-2毒素标准品的检测限为5μg/kg。T-2毒素胶体金快速定量检测试纸条检测方法可得出具体数据,与常见真菌毒素无交叉反应,回收率在77%~117.6%之间,批内和批间重复性检测变异系数小于10%,玉米中T-2毒素的检测结果与高效液相法检测结果一致。T-2毒素胶体金快速定量检测试纸条可用于玉米中T-2毒素含量的快速定量检测。     

猪尿液中盐酸克伦特罗(瘦肉精)检测方法比较试验

本文运用竞争酶标免疫法(ELISA)与快速检测试纸条法分别对73份生猪尿样本进行测试。再利用固相萃取-气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)证实。测试结果:ELISA方法与GC-MS分析法符合率100%,而快速检测试纸条法与GC-MS分析法符合率为96.8%。     

番茄酱中6种交链孢霉毒素的液相色谱-串联质谱检测方法

目的 研究利用固相萃取-液相色谱-串联质谱法测定番茄酱中6种交链孢霉毒素。方法 番茄酱样品经提取液提取,固相萃取柱净化后,采用液相色谱-串联质谱进行测定,外标法定量。 结果 番茄酱样品中交链孢霉毒素添加浓度在2.0μg/kg~200μg/kg 时,回收率在66.5%~113.5%之间。结论 该方法简单快速,灵敏度高,定量准确,是实现番茄酱中6种交链孢霉毒素快速定量检测的可靠方法。     

谷物中玉米赤霉烯酮残留的胶体金免疫层析法测定

建立一种快速、简便、针对谷物中玉米赤霉烯酮残留的检测方法。应用竞争抑制免疫层析原理,研制出玉米赤霉烯酮胶体金试纸条,并对其性能进行了鉴定。结果表明,该试纸条对谷物中玉米赤霉烯酮的检测限为100μg/kg,灵敏度为99%,特异性为94%,假阴性率为1%,假阳性率为6%,检测时间为10 min。该方法操作简便、灵敏度高、特异性强,适用于现场快速检测谷物中的玉米赤霉烯酮。     

玉米油中玉米赤霉烯酮胶体金快速检测条法和高效液相色谱检测法的比较

目的 建立胶体金快速检测条法测定玉米油中玉米赤霉烯酮含量的分析方法, 并与高效液相色谱法作比对。方法 分别运用胶体金快速检测条法和免疫亲和层析净化高效液相色谱检测法对14个玉米油中玉米赤霉烯酮的含量进行检测。结果 对实验结果进行成对样本t-检验, 发现2种实验方法所得出的结果在95%的置信水平上无显著差异。同时运用胶体金快速检测条法对每个样品进行6次重复实验, 分析其变异系数范围在2.9%~6.3%, 说明此种方法的重复性较好。结论 胶体金检测条法可以作为玉米油中玉米赤霉烯酮的快速检测方法。     

盐酸克伦特罗快速检测胶体金试纸的研制

为建立快速检测猪尿等样品中盐酸克伦特罗（CL）的胶体金免疫层析方法,用柠檬酸三钠还原氯金酸制备了胶体金,将其标记抗CL单克隆抗体,制备了金标抗体;以CL-人血清白蛋白（HSA）为包被抗原、羊抗鼠IgG为质控线二抗,制成胶体金试纸。优化了胶体金颗粒粒径、标记抗体用量和pH值等各项参数,最终确定胶体金粒径为15 nm、每毫升胶体金溶液中添加20 ?g抗体、胶体金溶液pH值为7.4、金标抗体稀释液为添加0.1 %牛血清白蛋白（BSA）的0.05 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）、金标抗体喷涂量为50 ?L/cm2、CL-HSA和羊抗鼠IgG的包被浓度分别0.5 mg/mL和2 mg/mL。研制的CL胶体金试纸检测限为3 ng/mL,与莱克多巴胺、沙丁胺醇等六种?-兴奋剂类药物无交叉反应。对42份猪尿样品的检测结果与市售酶联免疫（ELISA）试剂盒的符合率为100 %。试纸无需仪器辅助,操作简便,可在5 min内完成,适用于对CL残留进行现场检测。     

3种快速检测沙门氏菌方法的比较分析

目的 比较PCR法、胶体金法和VITEK-2 Compact法检测沙门氏菌的检测效果。方法 使用PCR法、胶体金法和VITEK-2 Compact法和国标法分别对待测样品进行检测, 并将3种快速检测方法的检测结果与国标法检测结果进行对比分析。结果 3种快速检测法的检测结果和国标法检测结果符合率分别为100%、92.9%和100%, PCR法和VITEK-2 Compact法符合率略高于胶体金法, 但3种快速检测方法总检出率与国标法比较差异均无统计学意义(P>0.05), PCR法、胶体金法和VITEK-2 Compact法对35个沙门氏菌阳性样本的检出率分别为100%、85.7%和100%。针对阳性样品, PCR法和VITEK-2 Compact法高于胶体金法, 且差异有统计学意义(P<0.05)。PCR法和VITEK-2 Compact法对沙门氏菌的最低检出限为1×101 CFU/mL, 而胶体金法为1×102 CFU/mL。结论 3种快速检测方法均可作为沙门氏菌国标检测方法的有效补充。     

蔬菜水果中腐霉利快速检测方法的优化

通过选购市场上常见的腐霉利胶体金免疫层析产品,优化主流腐霉利快检产品的前处理步骤,确定检测方法的性能指标,考察每种胶体金快检产品在果蔬基质样品检测中的灵敏度、特异性、假阳性率、假阴性率和交叉反应,建立一种蔬菜水果中腐霉利的胶体金免疫层析快速检测方法。结果表明,最优提取条件为提取液为Tris-盐酸-10%甲醇缓冲液,提取液pH值为9.0,提取液采用过滤的处理方式,该方法检出限为0.2 mg/kg,灵敏度为100%、特异性为100%、假阳性率为0、假阴性率为0,与10种农药无交叉反应,该方法与参比方法的阳性确证比率在95%的置信区间内无显著性差异,真实阳性样本两种方法检测结果均为阳性。该方法灵敏、快速、准确,可用于蔬菜水果中腐霉利残留的现场快速检测。     

Determination of residues of propamocarb in wine by liquid chromatography-electrospray mass spectrometry with direct injection.

A simple, sensitive and reliable liquid chromatography-mass spectrometry method with direct injection of diluted samples is reported for the determination of propamocarb residues in wine. Red and white wines were diluted 40- and 20-fold, respectively, using water. Liquid chromatography was performed with a mobile-phase gradient and detection was by electrospray mass spectrometry in a positive ionization mode. Propamocarb was detected as the protonated molecular species at m/z 189. Using matrix-matched calibrant solutions, a calibrated range equivalent to 0.05-2.0 mg kg(-1) in red and white wines and limits of detection of 0.025 mg kg(-1) for white wine and of 0.05 mg kg(-1) for red wine (0.00125 microg ml(-1) of sample solution injected) were readily achievable. Recovery of propamocarb hydrochloride from wine spiked before dilution was in the range 91-115%. The chromatograms were free of isobaric interferences. In a small wine survey (72 samples), no residues of propamocarb were detected above 0.1 mg kg(-1).     

蔬菜水果中菊酯类农药残留快速检测的方法研究

为研究一种蔬菜水果中菊酯类农药残留快速检测方法,通过选购市场上常见的胶体金免疫层析产品及菊酯类农药,对蔬菜水果中菊酯农残的快速检测进行前处理步骤的优化,并考察每种胶体金免疫层析产品在果蔬基质样品检测中的灵敏度、特异性、假阳性率、假阴性率和准确度,以实现胶体金免疫层析产品的整体性评价。结果表明,直接稀释法检测大白菜、韭菜和柑橘时,检测限较高,无法满足检测要求;直接提取法适用于大白菜、韭菜和柑橘的快速检测,检测限为2 mg/kg。方法学验证结果表明：以大白菜、韭菜和柑橘作为空白基质的检测限为2 mg/kg,灵敏度均为100%,特异性为100%,假阳性率为0,假阴性率为0。该方法快速准确、灵敏度高,可适用于蔬菜水果中菊酯类农药残留的快速检测。     

胶体金试纸条快速检测食品中磺胺二甲基嘧啶残留

目的：旨在建立一种快速、简便的针对磺胺二甲基嘧啶残留的检测方法。方法：应用竞争抑制免疫层析原理,研制磺胺二甲基嘧啶胶体金试纸条。结果：该试纸条检测限为10ng/mL、检测时间5min,与其他磺胺类药物交叉反应小,可用于多种食品样本的检测,且样本检测限为100μg/kg。结论：该方法操作简便、灵敏度高且特异性强,可实现对食品样品中磺胺二甲基嘧啶残留的快速检测。     

Colloidal gold-based immunochromatographic test strip for rapid detection of abrin in food samples

In the present study, we developed a convenient, rapid, and sensitive immunochromatographic (IC) test strip to detect abrin in assay buffer and spiked abrin in test food samples. The abrin IC test strip was based on a sandwich format consisting of a monoclonal antibody and a polyclonal antibody. The anti-abrin A chain monoclonal antibody from mice was immobilized on a porous nitrocellulose membrane as a capture antibody, while the anti-abrin polyclonal antibody from rabbits was conjugated to colloidal gold particles, serving as a detection antibody. Both visual observation and quantitative analysis indicated that the lower detection of the strip was about 3 ng/ml when abrin was directly spiked into milk, orange juice, and drinking water at a concentration of 3 to 60 ng/ml; the analytical recovery rate was 92.2 to 128%. With this method, abrin spiked into food could be detected in less than 10 min. Moreover, the IC test strip showed no cross-reaction with the closely related phytotoxin ricin. Therefore, our test strip is an ideal candidate for the development of a kit for rapid and quantitative detection of abrin in food samples.