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目的:构建抗呋喃它酮代谢物(AMOZ)的衍生物噬菌体单链抗体库。方法:从分泌抗AMOZ 的单克隆抗体的杂交瘤细胞系(BC3-E8)中提取总RNA,经RT-PCR 反转录成cDNA,设计通用简并引物,PCR 扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL)。经重叠延伸PCR (SOE-PCR),将VH 和VL 基因用编码(G1y4Ser)3 的linker随机拼接成单链抗体(scFv)基因,然后将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E 中,转化大肠杆菌(Escherichia coli) TG1 感受态细胞,经辅助噬菌体M13K07 超感染,建立噬菌体单链抗体库。随机挑取10 个阳性克隆,经PCR 和双酶切鉴定,并测序。登陆DNAMAN 软件对序列进行分析、比对。结果:成功扩增VH、VL 及scFv 基因,并得到库容为1.2 × 106 的噬菌体抗体库,噬菌体的滴度为2.0 × 1010PFU,PCR 鉴定及双酶切鉴定文库重组率较高,软件对序列比对结果显示,scFv 基因全长序列之间差异为8.38%,VH 序列差异为3.68%,VL 序列差异为14.34%,且序列差异多集中在CDR 抗原结合区域对应的核酸序列上。结论:已构建抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库,为进一步富集筛选并表达抗AMOZ 的衍生物的单链抗体提供参考。 相似文献
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方便面和方便米线中酞酸酯的污染现状研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:了解方便面和方便米线中酞酸酯(PAEs)的污染状况。方法:样品用无水甲醇超声提取,上清液经干燥脱水过0.45μm滤膜过滤,采用毛细管气相色谱技术分析。结果:在采集的56袋市售方便面、25袋方便米线中检测到的邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯的含量分别为:方便面调味酱料:未检出~59.38mg/kg、未检出~172.15mg/kg;方便面面饼:未检出~9.28mg/kg、未检出~1.08mg/kg;方便米线调味酱料:未检出~16.52mg/kg、未检出~44.75mg/kg。结论:方便面和方便米线食品存在不同程度的PAEs污染。 相似文献
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为研究贮藏期间α-萘乙酸甲酯(MENA)对马铃薯品质营养功能的影响及其残留动态变化,以"山东潍坊菜用马铃薯"为试材,分别用质量浓度40、80 mg/kg的MENA溶液进行喷洒处理,以清水处理作为对照,置于4 ℃条件下贮藏,定期(30 d)检测马铃薯的腐烂率、发芽率、干物质、淀粉、VC、还原糖、蛋白质、绿原酸含量及MENA残留量等品质指标。结果表明,与对照相比MENA能减低贮藏期马铃薯的腐烂率和发芽率,有利于马铃薯外观形态的保持;MENA能延缓马铃薯贮藏期间VC含量的降低(p<0.05)且使蛋白质含量升高(p<0.05),能使还原糖含量显著升高(p<0.05)并提升绿原酸水平(p<0.05);贮藏期间MENA残留未检出,提示MENA作为抑芽剂使用其残留风险较低。 相似文献
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邻苯二甲酸酯类塑化剂是一类具有生殖毒性的环境激素类物质,通过违规添加或迁移而造成食品污染问题颇为严峻,开发适合现场的塑化剂快速监测方法非常重要。本研究以邻苯二甲酸二甲酯(DMP)为对象,建立了DMP的胶体金标记免疫层析检测试纸方法。采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备了胶体金,将其标记DMP多克隆抗体,制备了金标抗体;采用棋盘法和单因素试验确定最佳包被浓度和二抗浓度分别为3000μg/mL和1600μg/mL,抗体浓度为稀释1.4倍,基于此建立了DMP免疫层析快速检测方法,其检测限为0.4μg/mL,5 min内肉眼可观察到检测结果,与其它结构功能类似物无明显交叉反应,特异性良好,白酒样品添加检测结果与GC-MS法相符。本法快速简单,稳定可靠,适用于实际样品中DMP的现场快速检测。 相似文献
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以包埋前后的桉叶精油为研究对象,采用平板打孔法和气相扩散法分别测定其对供试菌的抑菌活性和气相最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)、气相最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC),探讨桉叶精油包埋前后抑菌性能差异。并用气相色谱-质谱联用技术对比分析桉叶精油包埋前后的化学成分。结果表明:桉叶精油包埋前后对供试细菌、酵母菌和霉菌均有一定的抑制作用。对酵母菌的抑制作用最强,其次为细菌,对霉菌的抑制效果稍差。桉叶精油包埋前后对供试菌的气相MIC和MBC未有太大差异。桉叶精油包埋前后主要成分大体相同,均以萜烯类和醇类化合物为主。包埋后桉叶精油中部分萜烯类化合物的消失或相对含量的减少导致抑菌性能稍有下降,但气相MIC不变,仅对酿酒酵母和桔青霉的气相MBC稍有上升。 相似文献
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河豚毒素直接竞争ELISA检测方法的研究 总被引:10,自引:1,他引:9
本研究应用直接竞争ELISA法对河豚毒素(tetrodotoxin,ITX)进行快速检测.用过碘酸钠氧化法合成酶标记抗原HRP-OVA-TTX),用直接ELISA方法对合成的酶标记抗原进行鉴定表明其与抗TTX单克隆抗体具有特异性反应.在此基础上建立了包被单抗的直接竞争ELISA方法.该方法对TTX的检测限可达到1.1μg/L,IC50为20.4μg/L,线性范围3.3~137μg/L,批内变异系数小于6.25%,批间变异系数小于7.34%.对鲫鱼的肌肉组织添加TTX标准品,回收率为65%~93.2%,变异系数为9.41%~12.77%. 相似文献
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