传统发酵牦牛乳中2株高产胞外多糖乳酸菌在模拟消化道中耐受力的研究

从传统发酵牦牛发酵乳中分离出的2株高产胞外多糖乳酸菌,为了研究其在模拟消化道中耐受力,对2株乳酸菌(植物乳杆菌、干酪乳杆菌)分别在人工胃液、人工肠液、人工胆汁和高盐4个模拟人工胃肠道消化环境中进行培养,测其耐受力以及对Caco﹣2细胞的黏附能力。结果表明:植物乳杆菌和干酪乳杆菌在人工胃液中作用3 h的存活率随pH值的增大而增加。在pH4.5时,植物乳杆菌的存活率达到53.63%,干酪乳杆菌的存活率达到50.83%;在人工肠液中作用4h,植物乳杆菌的存活率达到了59.58%,干酪乳杆菌的存活率达到了51.42%;在胆盐环境中培养24 h后的植物乳杆菌和干酪乳杆菌活菌数随牛胆盐质量浓度的增加而降低,活菌数均保持在108cfu/m L以上;在高盐环境中培养24 h后的活菌数随盐质量浓度的增加而降低,活菌数均在108 cfu/mL以上;并且2株乳酸菌的黏附能力也很强,植物乳杆菌可以达到16.83%、干酪乳杆菌可以达到14.86%。结论:植物乳杆菌和干酪乳杆菌均能通过胃进入肠道并保持活力,而且能在肠道很好地定植,为植物乳杆菌和干酪乳杆菌作为益生菌应用在食品中提供了理论基础。     

双歧杆菌优良菌株的筛选及耐消化道逆环境性能

以改良MRS培养基作为选择性培养基,初筛得75 株严格厌氧且菌落呈蓝色的双歧杆菌疑似菌株。在pH3.0和含3.0 mg/mL胆盐的改良MRS培养基中培养20 h,得到吸光度较高的11 株,并选出耐酸耐胆盐较好的NCU712、NCU701、NCU708进行生理生化鉴定,NCU712基本符合长双歧杆菌的特征。经16S rDNA分子生物学鉴定菌株NCU712为长双歧杆菌。并在模拟人体消化道逆环境下对菌株NCU712的耐受力进行初步研究。结果表明：在pH 3.5以上的人工胃液中,NCU712活菌数随着作用时间的延长而略有上升;pH 2.5时菌株NCU712的D值为30.42 min;pH 3.0时D值为92.97 min,作用2.5 h活菌数保持在107 CFU/mL以上;人工肠液作用4.0 h后,活菌数保持在108 CFU/mL以上;3.0 mg/mL胆盐中培养24 h后,活菌数下降1（lg（CFU/mL））。说明NCU712对人体胃肠道耐受性良好。     

优良饲用乳酸菌的筛选及在模拟消化环境中的耐受性

通过MRS培养基进行初筛,耐酸耐胆盐复筛,从乳猪粪便中筛选出能够应用于饲料中的优良乳酸菌。MRS初筛得到26株乳酸菌疑似菌株,在pH2.0和3 g/L胆盐的MRS培养复筛得到7株菌,对性能较好的菌株G1和G9进行生理生化及分子生物学鉴定:G1为植物乳杆菌(NCU156)、G9为戊糖片球菌(NCU301)。进一步研究NCU156的耐酸耐胆盐性能以及模拟动物消化道耐受性能。结果表明:NCU156在p H2.5的MRS培养基中,作用4 h存活率为87.31%;在胆盐质量浓度为3 g/L的培养基中,作用6 h活菌数下降不到一个数量级;在pH3.0的人工胃液中作用4 h,NCU156的活菌数稍有增加,在3 g/L胆盐的人工肠液中作用6 h,活菌数下降约一个数量级(1.81×10~9~1.27×10~8CFU/m L),活菌数仍保持在10~8CFU/m L以上。可见NCU156对动物胃肠道有良好的耐受性,在饲料产品中有很好的应用前景。     

川西高原发酵牦牛乳中降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选与耐受性研究

以川西高原发酵牦牛乳中分离出的195株乳酸菌为研究对象,采用比色法测定其亚硝酸盐降解能力,从中筛选出亚硝酸盐降解能力极强的菌株。将这些优势菌株分别在人工胃液、人工肠液、胆盐和高盐4个模拟人工胃肠道消化环境中进行培养,测其耐受力。结果表明:这195株乳酸菌亚硝酸盐降解率范围为35.79%~96.51%,其中降解率在80%~90%的菌株占54.87%,仅有1.54%的菌株亚硝酸盐降解率在50%以下,有3株亚硝酸盐降解能力极强的菌株(降解率大于95%)。这3株菌在人工胃液中的活菌数随培养时间的延长而减少,培养3 h后,菌株5、26、150在pH5.5时的活菌数分别为3.7、3.6、4.1×108 CFU/mL;在人工肠液中培养4 h后,菌株5、26、150的活菌数分别为4.3、6.8、5.3×108 CFU/mL;在不同胆盐梯度的培养基中培养24 h后,3株菌的活菌数随胆盐浓度增大而减少,且均保持在108 CFU/mL以上;在高盐环境中培养24 h后的活菌数随盐质量浓度的增加而降低,活菌数均在108 CFU/mL以上。结论:川西高原发酵牦牛乳中分离出的195株乳酸菌降解亚硝酸盐的能力存在较大差异,其中降解亚硝酸盐能力极强的菌株对体外模拟消化环境具有较好的耐受力,为其在医药,食品和生物领域的应用提供了理论依据。     

植物乳杆菌NCU116微胶囊制备工艺的优化设计

利用乳清蛋白中的β-乳球蛋白在低pH值及胃蛋白酶存在的情况下,依然能够保持结构完整的特性,本实验以脱脂乳作为壁材的成分之一,对植物乳杆菌NCU116微胶囊的制备工艺条件进行研究。在单因素试验的基础上,应用响应面分析法优化植物乳杆菌微胶囊制备条件。以经过人工胃液处理后微胶囊中包埋的活菌数为响应值,优化后的最佳工艺条件为：海藻酸钠质量浓度2.68g/100mL,氯化钙浓度0.20mol/L,脱脂乳质量浓度4.17g/100mL。以该工艺条件制备的植物乳杆菌NCU116微胶囊粒径为1.12mm,包封率在73.49%左右。经过人工胃液处理3h后,微胶囊中的活菌数可达8.79×109CFU/g,与理论预测值(8.85×109CFU/g)较为接近。表明实验所制备的微胶囊具有较好的耐酸性。     

3株乳杆菌在模拟消化环境中存活性能的研究

在模拟胃肠道环境下，即人工胃液(pH值为1．5～4．5)、人工肠液、胆汁(质量浓度0.3-3g／L)和高盐(NaCl质量浓度50～80g／L)对3株乳杆菌的存活性能进行了研究。结果表明，3株乳杆菌在pH值为2．5-4.5的人工胃液中具有较强的生存能力，2．5h活菌数仍达10^8mL^-1左右；在人工肠液作用3h，活菌数始终在10^8mL^-1以上；在0．3％的胆汁环境作用8h，Lactobacillus plantarum ST-Ⅲ和Lactobacillus casei LC2W仍有存活；三者均能耐受NaCl浓度6．5％的高渗环境。     

植物乳杆菌NDC 75017的降胆固醇作用

植物乳杆菌NDC 75017分离自中国内蒙古传统发酵乳制品。本实验对其体外环境耐受性及其降胆固醇作用进行研究。采用活菌计数法检测植物乳杆菌NDC 75017在pH 2.0～3.0的酸性环境、胆盐质量浓度0.3g/100mL、NaCl质量浓度0～7g/100mL以及模拟人工消化液环境下的耐受情况;同时以邻苯二甲醛法测定其体外降胆固醇能力。结果表明:植物乳杆菌NDC 75017可耐受pH3.0及0.3g/100mL胆盐环境;在7g/100mL的高盐质量浓度条件活菌数仍可达108CFU/mL;可以通过胃进入肠道而保持活性,在肠道处理8h后存活率为58.73%。体外降胆固醇实验测得细菌发酵上清液、菌体洗涤液和细胞破碎液中的胆固醇脱除率分别为16.43%、26.35%和32.87%。植物乳杆菌NDC 75017环境耐受能力良好,具有体外降胆固醇作用,该菌株可以作为降胆固醇的潜在益生菌。     

鼠李糖乳杆菌耐酸及胆盐能力研究

本实验对来源于婴儿粪便鼠李糖乳杆菌进行耐酸、耐胆盐能力表征及模拟胃液和模拟肠液实验。结果获得鼠李糖乳杆菌菌株B在pH1.8条件下,维持2h,活菌数达到107CFU/ml以上;在pH值为2.2以上的培养基中生长良好,而且随着时间的延长菌株的数量增加。在胆盐浓度在0.5%以下的MRS-broth培养基中鼠李糖乳杆菌B菌株维持4h,活菌数均达到108CFU/ml以上,而且随着时间的延长活菌数均有所增加。模拟胃液和模拟肠液实验结果表明该菌株能够有效通过胃环境,并能在肠道中繁殖。结果可见,鼠李糖乳杆菌B具有较强的酸的胆盐的耐受能力,符合微生态制剂和乳酸菌发酵功能食品菌种的要求。     

干酪乳杆菌在模拟人体消化道环境及高盐环境中生长活力的研究

采用胃蛋白酶和胰蛋白酶,模拟人体消化道环境,在pH值为1.5～4.5人工胃液、人工肠液、胆汁0.3 g/L～3.5 g/L和6.0%～8.0%NaCl浓度下对两株干酪乳杆菌的生长情况进行研究.结果表明,两株干酪乳杆菌在pH为2.5～4.5人工胃液或在人工肠液中作用3h均能生长,活菌数达到1010/mL左右,在含2.5gL的胆盐浓度中或在7.5%的高盐浓度条件下亦能正常生长.这表明该菌株具有较好的适应性,可以作为益生菌用于食品工业.     

具有高抗胃肠道胁迫嗜酸乳杆菌的筛选及对肠炎小鼠的治疗作用

目的:从三株嗜酸乳杆菌中筛选出具有高抗胃肠道胁迫特性的嗜酸乳杆菌并研究其对溃疡性结肠炎小鼠的治疗效果。方法:人工模拟人体消化道胃液、肠液和胆盐环境,设置不同浓度梯度,研究三株嗜酸乳杆菌进入人体后对在消化道胃液、肠液和胆盐环境中的存活率,从而反映嗜酸乳杆菌对人体消化道胃液、肠液和胆盐环境的抵抗力。然后以筛选出的具有高抗胃肠道胁迫能力的嗜酸乳杆菌为研究对象,让处理组小鼠自由饮用3%葡聚糖硫酸钠盐(DSS)溶液7 d,以人工诱发的溃疡性结肠炎(UC)小鼠为动物模型,观察此株高性能的嗜酸乳杆菌CGMCC10436的抗溃疡性结肠炎潜力。结果表明,嗜酸乳杆菌CGMCC10436在模拟胃酸pH2.5~4.5时,其活菌数大于10~7CFU/mL,并且在3 h时没有下降的趋势;在模拟肠液中2h时,嗜酸乳杆菌CGMCC10436活菌数有所上升;并且嗜酸乳杆菌CGMCC10436在胆盐浓度为4g/kg时,3 h时其活菌数大于1×107CFU/mL。嗜酸乳杆菌CGMCC10436发挥较好的抗溃疡性结肠炎功效的剂量为3×108CFU,能够改善溃疡性结肠炎小鼠表观状况,修复溃疡性结肠炎小鼠肠粘膜损伤,增强溃疡性结肠炎小鼠的免疫调节。     

分级醇沉香菇多糖益生活性研究

目的 比较分级醇沉香菇多糖的益生活性差异。方法 本文采用20%、50%和80%乙醇对香菇多糖进行分级醇沉,并研究了分级醇沉香菇多糖对植物乳杆菌的增殖作用和体外耐受模拟胃肠液性能。结果 在发酵48 h时,以80%醇沉香菇多糖为碳源时,植物乳杆菌活菌数可达到9.62 log CFU/mL;50%醇沉（9.21 log CF U/mL）、20%醇沉（9.07 log CFU/mL）和菊粉组（8.67 log CFU/mL）无显著差异,但都显著高于葡萄糖组的活菌数（8.35 log CFU/mL,P<0.05）。发酵液pH值表明,在发酵48 h时,80%醇沉香菇多糖组的pH降低至3.23,显著低于其他组（P<0.05）。体外模拟胃肠液结果表明,以80%醇沉香菇多糖为碳源培养120 min时,植物乳杆菌在模拟胃液和肠液中的存活率分别为63.37%和96.37%,显著高于葡萄糖组和菊粉组（P<0.05）。结论 以80%醇沉香菇多糖为碳源可以促进植物乳杆菌的增殖,并提高植物乳杆菌在模拟胃肠液环境中的存活率,具有一定的益生元活性。     

具有抑制肠道致病菌和黏附Caco-2细胞作用的益生性乳酸菌的筛选及鉴定

为了筛选具有肠道益生特性的乳酸菌,进一步开发益生菌资源,本文研究采用牛津杯、人工模拟胃肠液及体外黏附Caco-2细胞等方法,以鼠李糖乳杆菌GG(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)为对照菌株,对实验室保藏15株乳酸菌的益生特性进行筛选与评估。实验结果表明:15株乳酸菌对两株沙门氏菌都具有一定抑制效果,抑菌圈直径为10.95~22.06 mm;乳酸菌C174、D24、D599、C37、D512具有较好的耐酸耐胆盐能力,在人工胃液3 h内存活率达到60%以上,人工肠液4 h内存活率达到80%以上;在黏附试验中,C174对Caco-2细胞具有较强黏附能力,黏附数量为740 CFU/100细胞,略高于对照菌株鼠李糖乳杆菌(543 CFU/100细胞);通过对具有高黏附性的菌株C174进行生理生化和16S rRNA分子测序鉴定,结果表明菌株C174为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),命名为Lactobacillus plantarum ZJ-174。Lactobacillus plantarum ZJ-174的抑菌能力强、能够耐酸耐胆盐,并具有很强的黏附能力,是一株潜在的益生菌,具有治疗或预防人和动物肠道疾病等应用价值。     

罗伊氏乳杆菌J1胃肠道耐受性评价及其对免疫相关基因调控的体外研究

以分离自传统发酵乳制品中的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri,L.reuteri)J1为研究对象,对其黏附性能、生长特性、对胃肠道环境的耐受能力以及该菌株作用于Caco-2细胞不同时间后免疫相关基因表达量的动态变化进行评价。结果显示,罗伊氏乳杆菌J1具有良好的黏附性,黏附率达87.93%,具有定植于肠道中的潜力。该菌株在4 h进入对数期,14 h进入稳定期。在肠道耐受性评价中,菌株在pH为2.0和3.0条件下处理3 h后,其存活率分别为86.77%、97.12%;在胆盐质量浓度分别为0.3、0.5和1.0 g/100 mL的培养基中处理4 h后,其存活率分别为105.00%、82.60%和82.18%;经模拟人工胃液处理3 h后转入人工肠液继续培养8 h,存活率达82.71%;该菌株在7 g/100 mL的盐溶液中处理24 h后,其存活率为80.36%。此外,108CFU/mL的罗伊氏乳杆菌J1可刺激Caco-2细胞中免疫相关因子IL-1β的表达,抑制促炎因子IL-6和趋化因子IL-8的表达。综上表明,罗伊氏乳杆菌J1具有定植于肠道上皮细胞的潜力,耐受胃肠道环境,并发挥一定的免疫调节作用。     

副干酪乳杆菌NCU622耐酸耐胆盐及其黏附性能

通过体外实验研究副干酪乳杆菌NCU622的耐酸、耐胆盐性能;采用体外细胞模型（人体结肠腺癌细胞系Caco-2细胞）测定副干酪乳杆菌NCU622的黏附性能,考察了菌体浓度、作用时间及生长阶段对其黏附性能的影响,并对该菌株进行细胞毒性检测。结果表明：副干酪乳杆菌NCU622在pH 2.5的MRS液体培养基中作用3 h,存活率为98.21%;在胆盐质量浓度为0.3、0.5 g/100 mL的MRS液体培养基中作用4 h,存活率分别为95.14%和85.07%。副干酪乳杆菌NCU622对Caco-2细胞的黏附能力较强,为（21.19±0.94）CFU/Caco-2细胞,且菌体浓度、作用时间及生长阶段对其黏附性能均有影响。副干酪乳杆菌NCU622与Caco-2单层细胞共培养24 h后,对其无裂解作用。这表明副干酪乳杆菌NCU622具有良好的耐酸耐胆盐能力及较强的黏附性能,且对Caco-2细胞无裂解作用,符合微生态制剂和乳酸菌发酵功能食品的菌种要求。     

酸汤中乳酸菌的鉴定及其耐酸、耐胆盐和抗氧化活性

采用16S rDNA基因序列对从酸汤中分离出的6株乳酸菌进行鉴定,并研究6株菌的耐酸和耐胆盐能力;同时以清除1,1-二苯基-2-苦基肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和羟基自由基为指标,探究其体外抗氧化活性。结果表明,6株菌均为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),可耐受pH2.5和0.3%质量分数的胆盐,且活菌数保持在107 CFU/mL以上,存活率大于87%;菌体浓度为108 CFU/mL时,6株菌对DPPH自由基的清除率在23%~35%之间,对羟基自由基的清除率在6%~16%之间。6株植物乳杆菌中,JMST-1兼具良好的耐酸、耐胆盐和一定的抗氧化能力,在耐酸、耐胆盐试验中存活率达到91%,对DPPH自由基和羟基自由基的清除率分别达到28.60%和15.44%。     

流式细胞术分析与评价酸奶菌种对模拟胃酸和胆汁盐的耐受力

研究传统酸奶菌种对人体胃酸和胆汁盐的耐受性,对评价酸奶的益生性具有重要意义。实验选取普通酸奶中的嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌作为研究对象,模拟胃肠环境以探讨所选两种菌株在不同pH 值和不同质量浓度脱胆盐下的耐受力,用流式细胞仪(FCM)结合羧基荧光素二醋酸酯(5-(6)-carboxyfluorescein diacetate,5(6)-cFDA)和碘化丙锭(propidium iodide,PI)两种荧光染料评价其活力。结果表明：pH2.0 时,菌体细胞活性较低,其活细胞标记率仅为41.8%,在pH3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 时,活细胞标记率越来越高,对其抑制性的影响逐渐减弱;在1g/100mL 的脱胆盐(DBS)中,活细胞标记率为48.7%,而在0.5、0.25、0.1、0.05g/100mL 的DBS 中时,活细胞的标记率越来越高;同时比较FCM 与平板菌落计数法检测菌体细胞的耐受水平。实验证实酸奶菌种能耐受pH 值为5.0～7.0 的胃酸和0.05～0.5g/100mL 的DBS;FCM 检测的菌体细胞的状况更能恰当地反映发酵酸奶品质的优劣。     

产ACE抑制肽菌株的筛选及其在模拟消化道环境中的活性分析

为了筛选出对血管紧张素转换酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制活性较高并且具有较强的耐酸耐胆盐和耐盐的乳酸菌,对实验室保存的27株乳酸菌进行了产酸能力、蛋白水解活力、ACE抑制活性、模拟胃肠道消化及酸、胆盐和盐耐受性的测定。结果显示,菌株M3的ACE抑制率可达71.94%±1.39%,具有较好的蛋白水解活力和产酸能力,蛋白水解活力为（86.66±3.51）μg/mL亮氨酸,滴定酸度为（71.67±2.86）°T。菌株M3经人工胃肠液分别处理3 h后,ACE抑制率为74.96%±1.73%;在pH3的环境中3 h,耐受性为14.34%±1.21%,活菌数能达到7 lg CFU mL?1以上;在含有0.3%胆盐的培养基中3 h,耐受性为37.50%±2.47%;在含有4% NaCl的培养基中24 h,耐受性为37.32%±1.84%。该菌经16S rDNA鉴定为Lactobacillus (Lb.) paracasei subsp. paracasei M3。因此,菌株Lb. paracasei subsp. paracasei M3可用作发酵牛乳富产ACE抑制肽且能耐受消化道环境具有益生菌潜力的菌株。