儿童急性B淋巴细胞白血病APRIL及其受体mRNA水平的定量测定

目的:采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)技术分析儿童急性B淋巴细胞白血病患儿外周血APRIL及其受体mRNA准确含量,并以靶基因和内参β2MmRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。方法:在APRIL及其受体基因的高保守区设计相应引物和荧光探针,实时检测PCR产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,由软件自动计算出待测样本中靶基因中APRIL和BCMA的水平。结果:18例急性B淋巴细胞白血病样本的APRIL及其受体BCMA和TACImRNA水平的表达水平均显著高于正常儿童(P<0.05)。结论:发现APRIL在儿童急性B淋巴细胞白血病的发病过程中可能起了重要作用,并通过受体BCMA和TACI发挥作用。     

实时荧光定量测定人B细胞激活因子受体-BCMA基因表达水平

目的:研究建立实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)检测人B细胞激活因子受体-BCMA含量的方法,及探讨其外周血单个核细胞(PBM C)中BCMA mRNA表达的检测价值。方法:在BCMA基因高保守区设计特异性引物和荧光探针,用逆转录-PCR扩增目的片段实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中BCMA mRNA含量,并以BCMA mRNA和2βM mRNA含量的比值进行BCMA表达水平评价。结果:RFQ-PCR检测BCMA含量的线性范围为109pg/m l~101pg/m l,低浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为13.5%和11.2%,高浓度样本批内和批间CV分别为8.9%和9.7%。30例健康献血员样本的PBM C中,90%(27例)检出有BCMA mRNA表达,范围为0.10~0.98。结论:RFQ-PCR检测BCMA mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性。     

结直肠癌变过程中增殖诱导配体及其受体表达水平分析

目的分析结直肠癌发生各阶段组织中增殖诱导配体(APRIL)及其受体mRNA的表达水平。方法在APRIL及其受体基因的高保守区设计相应引物和荧光探针,实时检测PCR产物的荧光强度,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA的准确含量,并以靶基因和内参β2微球蛋白(β2M)mRNA含量比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果批内和批间重复性测定的变异系数(cv)分别为6.52%~12.02%和8.76%~14.16%。APRIL在中、重度异型增生肠组织中的表达水平显著高于正常肠粘膜(P<0.05),在原位癌、浸润癌组织中的表达水平又显著高于正常肠粘膜(P<0.05),而其受体B细胞成熟抗原(BCMA)和穿膜蛋白活化物(TACI)在各种胃粘膜病变之间表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论APRIL在结直肠癌病变演进过程中呈现累积和渐进趋势,可能在结直肠癌发生、发展过程中起重要作用。     

人乳腺癌组织中增殖诱导配体及受体mRNA水平定量测定

目的:分析乳腺癌组织中增殖诱导配体(APR IL)及其受体mRNA的表达水平。方法:采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)技术检测临床样本中靶基因mRNA准确含量,并以靶基因和内参β2M mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果:RFQ-PCR检测靶基因mRNA含量的线性范围为109~101pg/m l,批内和批间重复性测定的变异系数v分别为3.87%~10.12%和6.86%~12.29%。乳腺癌25例组织样本的检测结果显示乳腺癌及癌旁组织中APR IL的水平均显著高于远端正常组织(P<0.05),而β细胞成熟抗原和穿膜蛋白活化物的表达水平在3组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功建立RFQ-PCR检测APR IL及其受体mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性;发现APR IL在乳腺癌组织中高表达,提示APR IL在乳腺癌发生、发展过程中可能起了重要作用。     

人肝癌组织中APRIL及其受体mRNA水平的定量测定

[摘要]目的：采用实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ—PCR）技术分析肝癌组织中增殖诱导配体（APRIL）及其受体mRNA的表达水平。方法：在APRIL及其受体基因的高保守区设计相应引物和荧光探针，实时检测PCR产物的荧光强度。根据标准品建立的标准曲线。由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA准确含量，并以靶基因和内参B2MmRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。     

增殖诱导配体及其受体mRNA水平的定量测定在儿童淋巴瘤诊断中的价值

目的 探讨增殖诱导配体(APRIL)及其受体mRNA水平的定量测定在儿童淋巴瘤早期诊断中的价值.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应技术定量测定87例儿童外周血APRIL及其受体的表达,其中霍奇金病10例、非霍奇金淋巴瘤37例、健康对照40例.并分析APRIL及其受体mRNA表达水平与恶性淋巴瘤不同分期的相关性,以靶基因mRNA和p2微球蛋白(p2M)mRNA含量的比值作为评价APRIL及其受体表达水平的指标.结果 47例儿童淋巴瘤样本APRIL(1.13±0.09)及其受体[B细胞成熟抗原(BCMA):1.22±0.11、跨膜激活物和CAML结合物(TACI):0.89±0.12]mRNA的水平均显著高于健康儿童(0.41±0.09、0.43±0.10、0.35±0.08,均P＜0.05);APRIL及其受体mRNA的水平在霍奇金病组和非霍奇金淋巴瘤组间差异均无统计学意义(均P＞0.05);APRIL在非霍奇金淋巴瘤Ⅰ期(0.88±0.06)和Ⅱ期(0.90±0.08)中表达水平显著低于Ⅲ期(1.21±0.09)和Ⅳ期(1.23±0.09,P＜0.05),而其受体在各分期之间表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 APRIL表达水平与恶性淋巴瘤的病理分期有相关性,并在恶性淋巴瘤病变演进过程中呈现累积和渐进趋势,外周血APRIL及其受体测定有可能成为恶性淋巴瘤早期重要的预后因素.     

胃癌组织中增殖诱导配体及其受体蛋白的表达

目的:观察人胃癌组织中增殖诱导配体(APRIL)及其受体B细胞成熟抗原(BCMA)和穿膜蛋白活化物(TACI)蛋白的表达,探讨其临床意义.方法:采用H-E染色及间接免疫荧光法检测30例人胃癌组织及相应10例癌旁正常组织APRIL及其受体蛋白的表达,分析不同临床病理特征下相关蛋白的表达水平.结果:胃癌组织中APRIL阳性率为86.7%,癌旁正常组织未见表达(P<0.05);而其受体BCMA和TACI蛋白表达水平在两者间无统计学差异.胃癌组织不同临床病理指标下(肿瘤大小、分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移和TNM临床分期),APRIL及其受体蛋白表达无统计学差异.结论:胃癌组织中APRIL蛋白高表达,检测其表达水平可能有助于胃癌的早期诊断.     

实时荧光定量测定人B细胞激活因子受体基因表达水平

目的：建立实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ-PCR）检测人B细胞激活因子受体（BAFF-R）含量的方法，及探讨其在外周血单个核细胞（PBMC）中BAFF-RmRNA表达的检测价值。方法：在BAFF-R基因高保守区设计特异性引物和荧光探针，用逆转录（RT-PCR）扩增目的片段实时检测产物的荧光强度，根据标准品建立标准曲线，由软件自动计算出待测样本中BAFF-RmRNA含量，并以BAFF-RmRNA和132MmRNA含量的比值进行BAFF-R表达水平评价。结果：RFQ-PCR检测BAFF-R含量的线性范围为10^∧9～10^∧1pg／ml，低浓度样本批内和批间变异系数（CV）分别为12．5％和11．9％，高浓度样本批内和批间CV分别为8．3％和9．3％。30名健康献血员样本的PBMC中，83％（25／30）有BAFF-RmRNA表达，范围为0．14-1．03。结论：RFQ-PCR检测BAFF-mRNA含量的方法，具有较好的检测灵敏度和重复性。     

B细胞激活因子受体家族基因表达与原发性胆汁性肝硬化相关性研究

目的探讨B细胞激活因子（BAFF）受体家族基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化（PBC）的相关性。方法以18SrRNA为内参基因,通过靶基因与内参基因循环阈值之差,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应（FQ—RT-PCR）相对定量方法,检测30例正常人和30例PBC患者外周血单个核细胞B细胞成熟抗原（BCMA）,穿膜蛋白活化物（TACI）及B细胞激活因子受体（BAFF—R）基因的相对表达量,并分析其与免疫球蛋白IgM、碱性磷酸酶（AIJP）及γ-谷氨酰转肽酶（GGT）的相关性。结果PBC患者外周血单个核细胞BCMA mRNA是正常对照组的8．6倍,差异有统计学意义（P〈0．05）;TACI mRNA显著低于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;而BAFF—R mRNA比正常对照组稍降低,差异无统计学意义（P〉0．05）。BCMA的△Ct值与IgM、GGT和ALP有相关性（P〈0．01）;TACI的△ct值与IgM有相关性（P〈0．05）,与GGT、ALP无相关性（均P〉0．05）;BAFF—R与IgM、GGT和ALP均无相关性（均P〉0．05）。结论PBC患者外周血单个核细胞BCMA mRNA表达水平显著升高,TACI基因表达明显降低,提示PBC发病机制与体液免疫增强、免疫耐受打破有关,且BCMA可能与PBC的疾病进程有关。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血APRIL/BLyS系统及其受体的表达

目的探讨APRIL(TNFSF13)/BLyS系统及其受体BCMA、TACI(TNFRSF13B)、BAFFR mRNA在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血中的表达水平和临床意义。方法设计特异性引物和荧光探针,实时检测PCR产物的荧光强度,检测42例正常健康者和56例PBC患者外周血中APRIL/BLyS系统及其受体mRNA表达水平,采用全自动酶标仪测定PBC患者血清中细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和TNF-α的水平。结果与健康者相比,PBC患者外周血中APRIL(TN-FSF13)、BLyS及其受体BCMA的mRNA表达均升高(P<0.01),APRIL、BLySmRNA表达与BCMAmRNA表达有显著相关性(分别为r=0.607和r=0.559,P均<0.01);APRILmRNA的表达与血清IL-2水平正相关(r=0.462,P<0.05),BLySmRNA的表达与血清IL-2、TNF-α水平正相关(r=0.740,P<0.01;r=0.381,P<0.05)。结论 APRIL/BLyS系统及其受体可能参与PBC的疾病进程,为监控PBC的病情和有效治疗提供了新的途径。     

原发性肝癌APRIL表达与临床病理生理特点

目的探讨增殖诱导配体（a proliferation-inducing ligand,APRIL）在原发性肝癌组织中的表达及其与临床病理生理特点的关系。方法采用实时荧光定量PCR检测原发性肝癌患者癌组织、癌旁组织和远端相对正常组织APRIL mRNA的表达,并研究其与肝癌的病理生理特点的关系。结果原发性肝癌癌组织APRIL mRNA的表达水平为0.58±0.10。远高于癌旁组织的0.22±0.09（P〈0.01）,多个肿瘤病灶的肝癌组织APRIL mRNA的水平为0.64±0.09,高于单个肿瘤病灶的肝癌组织APRIL mRNA的水平0.53±0.11（P〈0.05）。结论APRIL在原发性肝癌的进展过程中可能起到一定程度的促进作用,对抗APRIL功能在抗癌治疗中可能具有潜在的作用。     

胃癌组织中增殖诱导配体及受体mRNAs表达的病理意义

目的:研究增殖诱导配体(APRIL)及其受体B细胞成熟抗原(BCMA)和穿膜蛋白活化物(TACI)mRNA在胃癌组织中的表达,探讨其临床病理意义。方法:收集30例胃癌及相应癌旁正常胃组织,应用RT-PCR检测APRIL及其受体mRNA在胃癌及癌旁胃组织中的表达。结果:胃癌组织APRILmRNA阳性率(26/30,86.7%)明显高于癌旁胃正常组织(12/30,40.0%)(P<0.01),在肠型胃癌中的表达高于弥漫型(P<0.05),与年龄、性别、病灶大小、临床病理分期、分化程度、浸润深度、淋巴结转移等因素无关。而APRIL受体mRNA在胃癌和癌旁胃组织中表达无差异,且与年龄、性别、病灶大小、临床病理分型和分期、分化程度、浸润深度、淋巴结转移等因素无关。结论:APRILmRNA异常表达与肠型胃癌的发生有关,检测其表达水平有助于胃癌的早期诊断。     

Measurement of the expression levels of BLyS and its receptors mRNA in patients with systemic lupus erythematosus

INTRODUCTION Systemiclupuserythematosus(SLE)isanautoimmunerheumaticdiseaseserologicallycharacterizedbyin tensepolyclonalactivatedBlymphocyteandavarietyof autoantibodiesagainstselfantigens(Ags).ArecentlyidentifiedmemberoftheTNFsuperfamily,B lymphocytestimulator(BLyS)[1],alsocalledBcell activatingfactor(BAFF)[2],atumornecrosisfactor(TNF)homologuethatactivatesapoptosis,nuclearfac torκB(NFκB),andc JunNH2terminalkinase(THANK)[3],TNFandapoptosisligand relatedleuko cyte expressedl…     

紫草素对肝癌细胞增殖的影响

目的研究紫草素对肝癌细胞株HepG2增殖和表达增殖诱导配体（A proliferation-inducing ligand，APRIL）水平的影响，并与化疗药顺铂进行对比。方法MTT法检测紫草素对HepG2细胞增殖的抑制作用，采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法证实肝癌细胞株HepG2上APRIL的表达，实时荧光定量PCR法检测加入不同终浓度的紫草素和顺铂后24h、48h和72h HepG2细胞表达APRIL mRNA的水平。结果紫草素对HepG2细胞有明显的增殖抑制作用，呈时间和剂量依赖性，HepG2细胞上有APRIL的表达，加入不同浓度的紫草素和顺铂后，HepG2细胞A-PRIL mRNA的水平均逐渐升高，至72h表达最高并与空白对照相比均有显著差异（P〈0．05）。结论紫草素可抑制肝癌细胞的增殖，但与顺铂一样，残存癌细胞有因APRIL表达升高而增殖能力增强的潜在趋势。     

增殖诱导配体在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义

目的定量分析多发性骨髓瘤患者化疗前后外周血单个核细胞和血浆中增殖诱导配体(APRIL)mRNA及蛋白的表达水平。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)及实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)技术测定靶基因及靶蛋白的准确含量。结果 MM患者化疗前APRIL mRNA及蛋白表达水平均显著高于正常对照(P<0.05);化疗前Ⅲ期APRIL mRNA及蛋白表达水平显著高于Ⅰ期及Ⅱ期(P<0.05);化疗后PD组显著高于CR及PR组(P<0.05)。结论 APRIL可能参与MM的发生与发展并与肿瘤负荷量及疗效密切相关,其mRNA与蛋白表达水平相一致,且可能成为有效治疗MM的新靶点。     

增殖诱导配体在喉鳞状细胞癌中的表达

目的观察增殖诱导配体（APRIL）在喉鳞癌（LSCC）中的表达。方法采用免疫组织化学SABC法检测150例喉鳞癌患者中癌旁喉黏膜组织、癌组织中是否有APRIL的表达及APRIL的表达量与临床指标之间的关系。结果APRIL在癌旁喉黏膜组织及癌组织中的阳性表达率分别为6．7％（10／150）、89．3％（134／150）,在喉鳞癌不同的TNM分期中随着分期的增进APRIL的表达量逐渐增加且差异有统计学意义（P〈0．05）,APRIL的表达量与TNM分期相关（P〈0．05）。结论APRIL蛋白在喉鳞癌中高表达,且在不同TNM分期之间差异有统计学意义。     

醋酸棉酚对人腺样囊性癌ACC-M细胞P16基因甲基化及mRNA表达的影响及其意义

目的 研究醋酸棉酚（gossypol acetic acid,GAA）对体外培养的人腺样囊性癌ACC-M细胞P16基因甲基化及mRNA表达的影响,初步探讨醋酸棉酚的抗肿瘤作用机制.方法 （1）应用甲基化特异性PCR （MSP）检测ACC-M细胞在GAA作用48、72 h后P16基因甲基化状态的改变情况; （2）应用实时荧光定量法（RFQ-PCR）检测ACC-M细胞在GAA作用48、72 h后P16基因mRNA的表达变化.结果 （1） MSP检测结果显示：分别以19、10 μmol/L的GAA作用ACC-M细胞48、72 h后,P16甲基化条带的平均灰度值低于对照组（P＜0.05）; （2） RFQ-PCR检测显示：分别以19、10 μmol/L的GAA作用ACC-M细胞48、72 h后细胞中P16mRNA的表达水平高于对照组（P＜0.05）.结论 GAA可降低P16基因的甲基化水平,且能增强P16基因mRNA表达,这可能是GAA抗肿瘤作用的机制之一.     

基质金属蛋白酶-2和PTEN在贲门癌中表达及临床意义

目的分析基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及PTEN在贲门癌中的表达及与临床参数之间的关系。方法选择贲门癌手术切除标本86例,癌旁非肿瘤胃组织(离癌灶边缘>5cm)40例,二步法免疫组化检测MMP-2及PTEN表达,并分析2者与各临床参数之间的关系。结果MMP-2在贲门癌和癌旁组织阳性表达率分别为60.5%和40.0%(P<0.05),其表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、临床分期呈正相关(P<0.01)。PTEN在癌旁组织和贲门癌组织中的阳性表达率分别为97.5%、55.8%(P<0.05),PTEN在贲门癌中的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及临床分期呈负相关(P<0.05,P<0.01)。结论PTEN缺失及MMP-2表达增加在贲门癌侵袭、转移中发挥重要作用。联合检测PTEN与MMP-2,有助于了解贲门癌的发展和评估贲门癌患者的预后。