E1A激活基因阻遏子蛋白过表达可抑制人血管平滑肌细胞的迁移

背景:成熟动脉中膜血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)分化稳态的丧失是血管老化的一个重要原因.目的:观察E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)抑制人血管平滑肌细胞迁移的分子机制.方法:应用已建立的稳定转染CREG过表达细胞hVSMCs-CREG和CREG表达沉默的hVSMCs-siCREG细胞株通过刮伤实验和Transwell小室细胞移行实验检测细胞迁移能力,通过Western blot检测转染前后细胞中CREG蛋白、基质金属蛋白酶和JNK表达及活化情况,应用JNK和基质金属蛋白酶9抑制剂阻断研究分析上述信号分子表达变化在细胞迁移中的作用.结果与结论:Western blot结果证实,CREG蛋白表达在hVSMCs-CREG组中增加(P < 0.05),而在hVSMCs-siCREG组中减少(P < 0.05).刮伤实验和Transwell实验分析结果证实hVSMCs-CREG组细胞较正常对照组细胞迁移能力受抑.相反,hVSMCs-siCREG组细胞迁移能力显著增加(P < 0.05).Western blot和明胶酶谱分析证实hVSMCs-siCREG组细胞中MMP9活性明显增加(P < 0.05),同时JNK蛋白活化.进一步应用JNK抑制剂阻断研究证实,CREG蛋白表达抑制引起的血管平滑肌细胞迁移能力增加与细胞中基质金属蛋白酶9活性均受到剂量依赖性抑制.结果证实,CREG蛋白表达可抑制JNK-基质金属蛋白酶9信号通路的活化,以此抑制体外培养的人血管平滑肌细胞迁移.     

下调胰岛素样生长因子抑制miR-767-5p的表达对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间充质转化的影响

目的 研究抑制miR-767-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间充质转化（EMT）的影响。方法 体外培养乳腺癌细胞，将miR-767-5p inhibitor和inhibitor-NC转染到乳腺癌细胞中。细胞分为3组：空白对照组（Control组），miR-767-5p inhibitor组和inhibitor-NC组，采用CCK-8法、Transwell法、划痕实验检测miR-767-5p抑制剂对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。Western blot检测迁移相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-767-5p和胰岛素样生长因子-1(IGF1)的靶向结合作用。RT-qPCR和Western blot实验检测IGF1 mRNA和蛋白的表达水平。采用Western blot检测EMT相关蛋白的表达水平。结果 CCK-8实验结果显示，与Control组和inhibitorNC组相比，miR-767-5p inhibitor组显著抑制MCF-7细胞的增殖（P <0.05）。Transwell实验结果表明，与Contr...     

YB-1对卵巢癌细胞EMT标志蛋白表达及黏附能力的影响研究

目的研究Y-box结合蛋白(YB-1)对卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)标志蛋白表达及细胞黏附能力的影响。方法在卵巢癌细胞中转染p Genesil-1.1/YB-1 shRNA和p Genesil-1.1/shRNA control,筛选稳定转染的细胞记为YB-1 shRNA组和shRNA-NC组,把没有转染的细胞作为对照组。以Realtime PCR和Western blot方法检测细胞中YB-1表达水平。用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)方法分别检测细胞增殖和黏附能力,用Western blot检测EMT标志蛋白上皮钙黏附素(E-cadherin)、神经型钙粘素(N-cadherin)和迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移情况。结果 YB-1 shRNA组细胞中的YB-1表达水平明显低于对照组和shRNA-NC组(P0.05)。YB-1 shRNA组细胞增殖率和黏附率低于对照组和shRNA-NC组(P0.05)。YB-1 shRNA组细胞中E-cadherin蛋白水平高于对照组和shRNA-NC组,N-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白水平低于对照组和shRNA-NC组,差异具有统计学意义(P0.05)。YB-1 shRNA组细胞侵袭和迁移数目低于对照组和shRNA-NC组(P0.05)。结论下调YB-1促进卵巢癌细胞E-cadherin表达,抑制N-cadherin表达,抑制细胞EMT,降低细胞黏附、侵袭、迁移能力。     

动脉内皮细胞中TIE2启动CREG真核表达质粒pTIE2-CREG-EGFP-N1的表达

背景：血管内皮发生的分子机制是细胞及基因替代治疗的首要前提。目的：构建一种通过血管内皮细胞特异蛋白TIE2启动子来启动表达的E1A激活基因阻遏子（cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG）和增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescence protein,EGFP）融合的真核表达质粒。方法：根据GenBank中公布的TIE2基因的启动子序列,人工合成TIE2启动子DNA序列,经AseⅠ和NheⅠ双酶切后,亚克隆入表达质粒pEGFP-N1中构建pTIE2-EGFP-N1。同时,用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pcDNA3.1myc-His/hCREG质粒得到CREG基因,亚克隆入质粒pTIE2-EGFP-N1中构建pTIE2-CREG-EGFP-N1,酶切鉴定。应用脂质体法将该质粒转染至体外培养的小鼠动脉内皮细胞,荧光显微镜下观察EGFP的表达;Western blot检测CREG蛋白的表达。结果与结论：经酶切鉴定证实实验构建的pTIE2-CREG-EGFP-N1质粒正确;体外转染48h,荧光显微镜下可见EGFP的表达,Western blot检测到CREG蛋白的表达。说明实验成功构建了pTIE2-CREG-EGFP-N1重组质粒,其可携带目的基因在小鼠动脉内皮细胞中有效表达。     

大鼠血管平滑肌细胞迁移与西洛他唑的干预效应

目的:探讨西洛他唑对原代培养大鼠血管平滑肌细胞迁移能力的影响及其可能的调控作用。方法:实验于2003-03/12在解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所完成。使用胶原酶消化法处理健康雄性SD大鼠,获得原代培养的鼠血管平滑肌细胞,加入终浓度为0.5μmol/L西洛他唑培养72h为西洛他唑组,对照组为加入等量的Dulbecco改良的Eagle培养液培养的血管平滑肌细胞。应用细胞刮伤实验和基质金属蛋白酶活性测定分析西洛他唑对原代培养血管平滑肌细胞迁移能力的影响。应用蛋白质印记杂交方法分析给药前后血管平滑肌细胞内基质金属蛋白酶2,9和细胞外信号调节激酶蛋白的表达情况。结果:①细胞刮伤实验显示,与对照组比较,西洛他唑组血管平滑肌细胞迁移能力明显受抑,迁移距离明显缩短。明胶酶活性分析发现,西洛他唑组细胞基质金属蛋白酶活性明显低于对照组。②蛋白质印迹杂交分析发现,西洛他唑可引起原代培养血管平滑肌细胞迁移能力下降。西洛他唑组细胞内基质金属蛋白酶2,9蛋白表达明显低于对照组(14.34±0.70,12.65±0.98;93.67±1.90,83.67±1.05,t=67.86,85.65,P<0.05)。③蛋白质印迹杂交分析检测显示,西洛他唑组与对照组血管平滑肌细胞内信号调节激酶1,2蛋白表达无明显差异(P>0.05);细胞内磷酸化信号调节激酶蛋白表     

动脉内皮细胞中TIE2启动CREG真核表达质粒pTIE2-CREG-EGFP-N1的表达

背景:血管内皮发生的分子机制是细胞及基因替代治疗的首要前提.目的:构建一种通过血管内皮细胞特异蛋白TIE2 启动子来启动表达的E1A 激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG) 和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP) 融合的真核表达质粒.方法:根据GenBank 中公布的TIE2 基因的启动子序列,人工合成TIE2 启动子DNA 序列,经AseⅠ和NheⅠ双酶切后,亚克隆入表达质粒pEGFP-N1 中构建pTIE2-EGFP-N1.同时,用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pcDNA3.1 myc-His/hCREG质粒得到CREG 基因,亚克隆入质粒pTIE2-EGFP-N1 中构建pTIE2-CREG-EGFP-N1,酶切鉴定.应用脂质体法将该质粒转染至体外培养的小鼠动脉内皮细胞,荧光显微镜下观察EGFP的表达;Western blot 检测CREG 蛋白的表达.结果与结论:经酶切鉴定证实实验构建的pTIE2-CREG-EGFP-N1 质粒正确;体外转染48 h,荧光显微镜下可见EGFP的表达,Western blot 检测到CREG 蛋白的表达.说明实验成功构建了pTIE2-CREG-EGFP-N1 重组质粒,其可携带目的基因在小鼠动脉内皮细胞中有效表达.     

RECK基因与基质金属蛋白酶-2相关性在早孕滋养细胞侵袭调控中的作用

目的：探讨RECK基因与基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）相关性在早孕滋养细胞浸润调控中的作用。方法：分别采用免疫组化、Western blot法、明胶酶谱法检测52例正常妊娠（早孕组27例、足月妊娠组25例）胎盘组织中RECK表达定位、蛋白含量及MMP-2的活化比例。结果：免疫组化提示早孕、足月妊娠均有RECK蛋白表达，其主要表达在细胞滋养细胞、合体滋养细胞的胞膜和胞质。RECK表达随孕周增加而增强．早孕组RECK表达明显低于足月妊娠组（P〈0．05），且在具有侵袭力的早孕锚定绒毛的细胞柱上RECK表达呈弱阳性；Western blot检测亦显示早期妊娠RECK蛋白质含量显著低于足月妊娠（P〈0．05））；明胶酶谱示MMP．2的活化比例则相反，早孕组MMP-2活化比例明显高于足月妊娠组（P〈0．05）。结论：MMP-2活性的表达变化与滋养细胞浸润活性呈正相关，而肿瘤抑制基因RECK的表达变化与之呈负相关．MMP-2与RECK基因相互作用在滋养细胞浸润活性调控中可能起重要作用。     

人骨髓间充质干细胞培养上清与肝星状细胞相关酶的分泌

背景：研究证实骨髓间充质干细胞移植治疗能改善甚至逆转肝纤维化,但其具体机制尚不清楚。目的：检测人骨髓问充质干细胞培养上清对肝星状细胞中基质金属蛋白酶2及组织抑制基质金属蛋白酶1表达的影响。方法;采用密度梯度离心法分离人骨髓间充质干细胞,收集原代培养7d的骨髓问充质千细胞培养上清,加入肝星状细胞中培养作为实验组,并设置单独肝星状细胞组、单独骨髓间充质干细胞组为对照。培养24,48h后,检测各组细胞上清中基质金属蛋白酶2蛋白与组织抑制基质金属蛋白酶1蛋白的表达。结果与结论：与单独肝星状细胞组、单独骨髓问充质于细胞组比较,实验组培养24,48h后肝星状细胞基质金属蛋白酶2及组织抑制基质金属蛋白酶1表达减少（P〈0．05或P〈0．01）。表明骨髓间充质干细胞培养上清抑制肝星状细胞中基质金属蛋白酶2、组织抑制基质会属蛋白酶1的表达。     

MTDH基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨异黏蛋白(MTDH)基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭能力的影响。方法在B淋巴瘤细胞Raji中转染MTDH siRNA和siRNA对照,分别命名为MTDH siRNA组和siRNA对照组,将没有转染的细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blot方法检测细胞中MTDH表达水平,MTT方法检测细胞增殖和黏附能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白水平。结果MTDH siRNA细胞中MTDH mRNA和蛋白水平均明显低于对照组和siRNA对照组(P<0.05)。与对照组和siRNA对照组比较,MTDH siRNA细胞增殖和黏附能力降低,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力也降低,细胞中Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTDH基因沉默下调B淋巴瘤细胞增殖能力,抑制B淋巴瘤细胞侵袭和迁移。     

人附睾蛋白4通过上调MMP9及VEGF降低顺铂对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨人附睾蛋白4(HE4)对顺铂作用后卵巢癌细胞增殖和迁移的影响及潜在机制。方法 构建HE4质粒,脂质体Lipofectamine 2000转染人卵巢癌细胞系HO8910PM,通过Western blot验证稳定转染细胞株构建成功。通过CCK8实验检测HE4过表达对顺铂作用后细胞增殖的影响;通过Transwell实验检测HE4过表达对顺铂作用后细胞迁移的影响;同时通过Western blot实验检测促迁移相关蛋白基质金属蛋白酶9(MMP9)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果 过表达HE4人卵巢癌细胞系HO8910PM构建成功;相比于转染空载体的HO8910PM细胞,HE4可明显降低顺铂对细胞增殖的抑制作用,促进HO8910细胞的增殖;同时,HE4过表达细胞中MMP9及VEGF蛋白表达水平也相应提高。结论 HE4可能通过上调MMP9及VEGF表达降低顺铂对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响。     

RhoC-siRNA联合Rapamycin对肝癌细胞Bel7402侵袭和迁移的影响

目的探索RhoC-siRNA联合Rapamycin(Rapa)对肝癌细胞Bel7402侵袭和迁移的影响。方法以人肝癌细胞Bel7402为对象,设空白对照组、阴性质粒组、RhoC-siRNA组、RhoC-siRNA联合Rapa组、阴性质粒联合Rapa组、Rapa组、溶媒组,分别采用RhoC基因沉默、Rapa或RhoC基因沉默联合Rapa处理,半定量RT-PCR法比较细胞周期蛋白相关基因CDK2、P16mRNA和侵袭相关基因MMP-2、MMP-9、VEGFmRNA的表达,Transwell小室检测细胞迁移。结果RhoC基因沉默及Rapa可明显抑制肝癌细胞侵袭及迁移,二者联合应用上述效果更加明显。RhoC-siRNA组及Rapa组MMP2、MMP9、VEGF、CDK2基因表达降低,P16基因表达升高(P<0.05)。RhoC-siRNA联合Rapa组MMP2、MMP9、VEGF、CDK2基因表达水平显著下降,P16基因的表达水平显著升高(P<0.05)。RhoC-siR-NA联合Rapa显著抑制肝癌细胞迁移(P<0.01)。结论RhoC-siRNA质粒转染及Rapa可明显抑制肝癌细胞Bel7402的侵袭及迁移;二者联合应用可进一步加强上述效应。     

顺铂抑制IL-8诱导人卵巢癌SKOV-3细胞的迁移作用及相关机制的研究

目的 观察外源性人白细胞介素-8 （IL-8）对人卵巢癌SKOV-3细胞迁移的影响,及顺铂对它的干预作用,初步探讨顺铂抑制细胞迁移的机制.方法 顺铂处理SKOV-3细胞,MTT法确定顺铂使用的最佳作用浓度;Transwell法观察顺铂对IL-8诱导SKOV-3细胞迁移的干预作用;ELISA法检测顺铂分泌IL-8情况;Western blot法检测NF-κB蛋白表达水平.结果 MTT结果显示：与对照组相比,顺铂浓度为100μg/ml对细胞增殖有显著抑制作用（P＜0.05）.浓度区间在200～400μg/ml的顺铂对细胞的增殖也有抑制作用,该范围内对细胞的生长抑制率无统计学差异（P＞0.05）.浓度为100μg/ml的顺铂,分别作用于SKOV-3细胞24 h、48 h、72 h,各时间组比较无统计学差异（P＞0.05）.IL-8（100 ng/L）处理细胞后,SKOV-3细胞的迁移能力增强,顺铂（100 μg/ml）具有抑制IL-8诱导的SKOV-3细胞迁移的作用,随着浓度的增高,迁移的细胞数由241.67减少到155.99,差异有统计学意义（P＜0.05）.顺铂刺激细胞后,与空白对照组相比,NF-κB蛋白表达水平降低（64.04±4.6）.结论 IL-8具有促进人卵巢癌SKOV-3细胞迁移的作用,顺铂可能是通过NF-κB细胞信号通路对卵巢癌细胞的迁移起抑制作用.     

apelin-13下调caveolae可促进血管平滑肌细胞增殖

背景：结合课题组以往研究成果,提出caveolae可能参与apelin-13促血管平滑肌细胞增殖的假设。目的：实验观察细胞膜特殊凹陷结构caveolae参与G蛋白偶联受体APJ的内源性配体apelin-13促进大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用。方法：采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,用MTT方法观察血管平滑肌细胞增殖,Western Blotting方法观察信号蛋白表达,免疫共沉淀技术检测信号分子复合物的形成。结果与结论：①caveolae结构破坏剂β-环糊精（5mmol/L,25h）可明显增强apelin-13诱导的血管平滑肌细胞增殖。②apelin-13（0,1,2,4,8μmol/L）刺激血管平滑肌细胞,caveolin-1的表达下调,在1μmol/L时下调明显。③β-环糊精（5mmol/L）破坏caveolae后,可使apelin-13下调caveolin-1表达的作用增强。④对照组（体积分数为0.1%胎牛血清孵育）及处理组（apelin-13刺激）caveolin-1与PI3K及ERK1/2均有复合物形成,在apelin-13刺激的情况caveolin-1-PI3K复合物减少、caveolin-1-ERK1/2复合物减少,即apelin-13可能促进caveolin-1与PI3K及ERK1/2解离。结果提示细胞膜特殊凹陷结构caveolae参与apelin-13促血管平滑肌细胞增殖作用。     

siRNA 干扰的 DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的影响及机制研究

目的：探讨DKK1 siRNA干扰的DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移能力的影响及作用机制。方法瞬时转染DKK1 siRNA至培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞;应用实时定量PCR和蛋白免疫印迹方法分别检测转染前后细胞中DKK1的mRNA和蛋白表达;应用Transwell实验检测癌细胞侵袭、迁移能力。应用荧光显微镜观察转染前后Wnt/β-catenin信号通路中活性β-catenin、MMP14表达情况。结果转染DKK1 siRNA至Ishikawa细胞使细胞中DKK1基因表达水平降低21.00%（t＝3.05,P＜0.05）, DKK1蛋白表达降低39.35%（t＝40.97,P＜0.01）。侵袭实验中DKK1 RNAi组的细胞均数140.8±4.733,高于空白对照组的细胞均数123.7±6.700,癌细胞的侵袭能力增强13.82%。迁移实验中DKK1 RNAi组细胞均数（152.0±3.528）高于空白对照组（130.6±4.061）,癌细胞的迁移能力增强16.39%。DKK1 siRNA处理后,细胞中活性β-catenin、MMP14荧光增强,提示表达水平上升。结论 DKK1具有抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的作用。Wnt/β-catenin信号通路参与了DKK1这一作用过程。DKK1不失为抑制子宫内膜癌转移的有效治疗靶点。     

hTERT表达水平对乳腺癌干细胞体外生物学行为的影响

目的观察人端粒酶反转录酶反义寡核苷酸(h TERT ASODN)对乳腺癌干细胞生物学行为的影响。方法合成针对人端粒酶反转录酶(h TERT)的反义寡核苷酸,以脂质体转染的方法将其转染入乳腺癌干细胞,设为ASODN组,以正义序列转染作为阴性对照组,并设未处理对照组。RT-PCR和Western blot分别检测各组h TERT基因和蛋白表达。应用CCK8法检测转染对乳腺癌干细胞增殖的影响,Transwell小室法检测干细胞侵袭、迁移能力。结果 RT-PCR和Western blot检测结果显示,ASODN组h TERT基因相对表达量为0.40±0.03,低于阴性对照组(0.81±0.05)和未处理对照组(0.79±0.04),F=137.33,P<0.001;h TERT基因蛋白相对表达量为0.39±0.06,低于阴性对照组(0.87±0.04)和未处理对照组(0.90±0.02),F=59.29,P<0.001。CCK8结果显示,乳腺癌干细胞培养12、24、36、48和60 h,ASODN组细胞增殖能力明显低于阴性对照组和未处理对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell侵袭实验,ASODN组穿越Transwell小室的细胞数为8.40±0.36,低于阴性对照组(15.64±0.13)和未处理对照组(14.31±1.12),F=94.56,P<0.001。Transwell迁移实验,ASODN组穿越Transwell小室的细胞数为30.6±8.03,低于阴性对照组(51.40±5.66)和未处理对照组(53.11±6.34),F=20.11,P=0.002。结论 h TERT ASODN可显著抑制乳腺癌干细胞体外增殖、侵袭和迁移能力。     

MMP-9、E-cadherin基因蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达及临床意义

目的：探讨MM P-9和E-cadherin的表达与卵巢浆液性肿瘤侵袭和转移的关系。方法：应用流式细胞免疫法定量检测MM P-9和E-cadherin在45例卵巢浆液性肿瘤中的表达。结果：MM P-9在卵巢浆液性癌中的表达明显高于卵巢浆液性瘤（P〈0.05）,而E-cadherin在卵巢浆液性癌中的表达明显低于卵巢浆液性瘤（P〈0.05）。MM P-9和E-cadherin均与卵巢浆液性癌组织分级和临床分期密切相关（P〈0.05）。且二者在卵巢浆液性癌中的表达密切相关（P〈0.05）。结论：MM P-9的高表达和E-cadherin的低表达导致了卵巢浆液性癌的侵袭和转移,二者的表达有相关性。提示MM P-9和E-cadherin可作为诊断和判断预后的指标。     

胰岛素联合顺铂对人宫颈癌细胞株HeLa生长的影响

目的：观察胰岛素（INS）联合顺铂（DDP）对人宫颈癌 HeLa 细胞生长及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法体外培养的人宫颈癌细胞株（HeLa）经INS、DDP单独或联合作用后,MTT检测细胞增殖抑制情况;Annexin V-FITC双染流式细胞术分析细胞凋亡;流式细胞仪检测不同加药处理组的细胞周期时相变化情况;Western blot 印迹方法检测细胞中 JNK2、p-JNK2及caspase-3蛋白的表达情况。结果 MTT结果显示：INS无抑制细胞增殖作用,DDP单药组与联合用药组均能抑制细胞的增殖,两药联合时细胞增殖抑制率明显高于DDP单药组,差异有统计学意义（P=0.000）,细胞凋亡结果显示：INS无促细胞凋亡的作用,联合用药组的细胞凋亡率明显高于DDP单药组（P〈0.01）。细胞周期结果显示：DDP、INS单药均能促进细胞由G1期向S期转变;联合用药组HeLa细胞S期比例增加更加明显,与DDP组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。Western blot 结果显示：实验组与对照组比较,JNK2蛋白水平无明显变化, p-JNK2、caspase-3于DDP组及 DDP＋INS 组中表达增加,联合用药时增加更为明显,与DDP组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）,而在INS组中三种蛋白表达变化均不明显。结论 INS 可增强DDP对宫颈癌HeLa细胞的毒性作用,其机制可能与协同DDP促进细胞由G0期步入S期,上调p-JNK2及 caspase-3蛋白表达有关。     

miR-190通过调控细胞因子信号转导抑制因子5促进肝细胞癌发生的机制

目的 探讨微RNA-190（miR-190）通过调控细胞因子信号转导抑制因子5（SOCS5）介导肝细胞癌（HCC）发生的机制。方法 选取84例HCC患者的肝癌组织及癌旁组织,通过实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测miR-190表达水平,并分析其与患者临床特征和预后的相关性。将miR-190模拟物/抑制物或SOCS5 siRNA（siSOCS5）转染至SNU398和HepG2细胞中,CCK-8检测细胞的增殖,Transwell对细胞的侵袭与迁移进行检测,RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测SOCS5基因和蛋白的表达水平,双荧光素酶测定验证miR-190与SOCS5的靶向关系。通过异种移植肿瘤验证SOCS5体内抑癌作用。结果 HCC中miR-190水平上调,且miR-190高表达与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期、预后不良有关（P均 < 0.05）。CCK-8和Transwell结果表明,过度表达的miR-190可促进细胞增殖、侵袭及迁移。RT-PCR、蛋白免疫印迹法和双荧光素酶测定结果证实了SOCS5是miR-190的真正靶点。此外,SOCS5在体内外均有促进HCC发展的作用。结论 miR-190可通过靶向SOCS5促进HCC的发生发展,抑制miR-190在恢复HCC中SOCS5水平方面有潜在治疗用途。     

Biglycan及血管内皮生长因子对结肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响及机制

目的:观察biglycan及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对结肠癌细胞系HCT116迁移、侵袭能力的影响并探讨其可能的机制。方法:在稳定转染biglycan的结肠癌细胞系HCT116中转染VEGF siRNA,实验设置未转染对照组(mock组)、空载质粒和非特异性干扰片段转染对照组(vector+siRNA-NC组)、biglycan cDNA和非特异性干扰片段转染组(biglycan+siRNA-NC组)以及biglycan cDNA和VEGF siRNA共转染组(biglycan+siRNA-VEGF组)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测biglycan和VEGF的mRNA表达;采用划痕实验检测细胞的迁移能力;采用Transwell法检测细胞的侵袭能力;采用蛋白质印迹(Western blotting)法检测SNAIL、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达;采用明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性。结果:与mock组及vector+siRNA-NC组比较,biglycan+siRNA-NC组细胞的迁移、侵袭能力均显著提高(P0.05),vimentin、MMP-2、MMP-9、SNAIL蛋白的表达水平显著提高,E-cadherin蛋白的表达水平则显著下降(P0.05),MMP-2和MMP-9的活性显著提高(P0.05)。与biglycan+siRNA-NC组比较,biglycan+siRNA-VEGF组细胞的迁移、侵袭能力均显著降低(P0.05),SNAIL、vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平均显著下降,E-cadherin蛋白的表达水平显著提高(P0.05),MMP-2、MMP-9的活性显著下降(P0.05)。结论:biglycan通过促进VEGF的表达来促进结肠癌细胞系HCT116的迁移和侵袭,下调结肠癌细胞中VEGF的表达可逆转biglycan对HCT116迁移和侵袭的促进作用。     

腺病毒介导hRAMP1基因转染血管平滑肌细胞的增殖和凋亡

背景：外源性受体活性修饰蛋白1基因转染可能对血管平滑肌细胞增殖调控具有重要的作用。目的：探讨腺病毒载体介导人受体活性修饰蛋白1基因对体外培养的兔血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法：分离培养获得兔主动脉血管平滑肌细胞,分别以携带人受体活性修饰蛋白1基因的腺病毒和空腺病毒转染后,分成人受体活性修饰蛋白1组、空病毒组和对照组。结果与结论：腺病毒转染细胞后随时间延长,报告基因绿色荧光蛋白表达逐渐增加,72h表达最强,感染率达80%,96h时仍有绿色荧光蛋白表达。人受体活性修饰蛋白1组的受体活性修饰蛋白1蛋白表达增加,血管平滑肌细胞凋亡率增加,细胞增殖明显抑制,与空病毒组和对照组比较差异有显著性意义（P〈0.05）。提示人受体活性修饰蛋白1基因感染血管平滑肌细胞后明显抑制血管平滑肌细胞增殖,促进细胞凋亡。