重组O-GLcNAc糖基转移酶在昆虫细胞中的表达和纯化

蛋白质的 O- Glc NAc糖基化修饰是一种细胞核蛋白与细胞浆蛋白的蛋白质翻译后修饰。不同于膜蛋白和分泌蛋白的糖基化修饰 ,与蛋白质磷酸化修饰相似。催化蛋白质 O- Glc NAc糖基转移酶 ( OGT)已被克隆。用Hi5昆虫细胞系统表达并纯化了具有活性的重组 OGT。在 Hi5昆虫细胞中表达的鼠肝 OGT带有一 His 6标记片段。经镍离子螯合柱纯化后 ,其比活性达到 0 .88nmol· min- 1·m g- 1 OGT。因此本研究为进一步研究蛋白 O- Glc NAc糖基化修饰提供重要资源     

安定对大鼠局灶性脑梗死半影区神经细胞死亡的保护作用

目的　研究安定对光化学诱发脑梗死后细胞死亡的保护作用 .方法　使用光化学诱发的大鼠局灶性脑缺血模型 .采用原位末端标记技术 (TU NEL)检测凋亡细胞 .大鼠脑梗死术后存活 3,6 ,12 ,2 4 ,4 8和 72 h,分别观察梗死灶坏死中心面积和凋亡细胞数目 .术前 2 4 h开始腹腔注射安定 (10mg·kg- 1· 8h- 1 ) ,直到处死动物 .结果　TUNEL 阳性细胞位于坏死中心与正常皮层之间的半影区 .TUNEL 阳性细胞的均数随着梗死后时间的延长逐渐增多 ,2 4 h达到高峰 .在2 4 h时间点 ,安定治疗组梗死坏死中心的平均最大面积和TUNEL阳性细胞均数与对照组相比 ,明显减少 (P<0 .0 0 1) .结论　安定可明显减少成年大鼠局灶性脑梗死后的细胞坏死和凋亡 .该结果可为临床使用安定治疗缺血性脑血管病提供理论依据     

结肠造口结肠癌原位移植模型的建立

Objective To establish a colorectal cancer colostomy orthotopic transplantation mice model. Methods A colostomy was preformed in BALB/C nu-nu nude mice. After two weeks, when the stoma healed, tumor tissues developed from Lovo cells were implanted into the submucosa of the stoma. When tumor grew up to 5 nun, fluorouracil(5-FU, 20 mg/kg) was administrated by intraperitoneal injection. Tumor developed at the colostomy was observed and its biological characteristics and behaviour were evaluated. Results Colostomy was performed in 10 mice and stoma healed at two weeks. Ten colostomies developed detectable tumor in two to three weeks. Three to five weeks later, the tumors grew up to 5 mm. Survival time of mice injected with 5-FU was (15.2±3.7) weeks (ranged: 11-21 weeks), and the survival time of the no-treantment group was (12.3±2.8)weeks (ranged:9-19 weeks). The difference was statistically significant (P=0.001). The rate of mesenteric metastasis was 1/5 and 2/5 in the treatment and no-treatment group respectively. Conclusion Colostomy orthotopic transplantation mice model is an ideal mice model with the advantages of having high success rate, visualization of implanted tumor in living animal, long survival time and significant tumor response to common chemotherapeutic agent.     

小鼠低温游泳脑缺血模型的建立及在注射液量效关系上的应用

目的:建立一种新的脑缺血小鼠模型,用标准的注射液验证模型的可靠性。方法:小鼠分成3组:生理盐水组,尼莫地平组(1.0 mg/kg)和三七总皂苷组(120 mg/kg)。静脉注射25m in后,动物负重5%体重,在10~10.5℃的水中游泳5m in,取出,断头,记录断头的喘气持续时间。小鼠分别注射尼莫地平0.3、0.7、1.0、1.5 mg/kg或三七总皂苷60、80、120、160 mg/kg,同上法操作,探讨两种药物的量效关系。结果:和生理盐水组比较,两个药物能显著延长小鼠断头的喘气持续时间(P<0.01)。尼莫地平的量效关系方程式为:y=27.74919x 18.79446;三七总皂苷的量效关系方程式为:y=0.13347x 20.51017,二者的量效关系均显著(P<0.05,P<0.01)。结论:新的方法能够用于评价药物的抗脑缺血作用。     

O-GlcNAc糖基转移酶在原核和真核细胞中的表达和提纯

目的 :本文为进一步研究蛋白 O- Glc NAc糖基化修饰提供重要资源。方法 :为了探索制备纯化具有生物学活性的重组 OGT的有效方法 ,本文用大肠杆菌和 Hi5昆虫细胞表达并纯化具有活性的重组 OGT。携带人 OGTc DNA的 PET32 a质粒在大肠杆菌中表达出带有 1个 S- Tag的重组人 OGT融合蛋白 ,然后用与 S-蛋白质偶联的琼脂糖凝胶颗粒从细菌裂解液中亲和纯化 OGT融合蛋白。结果 :其纯化的 OGT在电泳中显现单一条带并具有生物活性 ,但其活性在洗脱后丧失。在 Hi5昆虫细胞中表达的鼠肝 OGT带有一 His6 tag,经镍离子螯合柱纯化后 ,其比活性达到 0 .88nmol· min- 1 · mg- 1 OGT。结论 :在这两个表达系统中制备重组 OGT各有利弊。     

通过分析常见细菌的检出和耐药现状探讨医院感染的防控

了解临床常见细菌的检出及耐药状况,指导临床医生准确、合理的选择用药,探讨临床在防止医院感染及耐药株传播中应引起注意的问题.     

尿路致病性大肠杆菌溶血素A基因的序列分析

目的分离尿路致病性大肠杆菌(UPEC)临床流行株,并进行序列分析。了解其基因变异情况。方法自临床尿路感染标本中分离溶血性大肠杆菌10株。按GenBank中的溶血素A(hlya)基因保守序列设计合成引物。以获得的UPEC基因组DNA为模板,用PCR方法扩增其hlya基因片段。对扩增的片段测序并进行同源性分析。结果扩增的hlya目的基因大小744bp。经PCR鉴定表明获得正确的片段。测序结果显示,10个分离株DNA序列同源性高于99.7%,其与GenBank中的hlya基因序列的同源性为99%以上。10个序列中共发生13处碱基的替代,但均属于同义突变,没有碱基的插入与缺失。结论UPEChlya基因高度保守。本研究在国内首次成功地扩增了UP-EC基因。为进一步研究hlya的结构、阐明UPEC的致病机制、探讨hlya作为特异性诊断靶点及保护性疫苗的研究奠定了基础。     

顺铂联合足叶乙甙治疗原发灶未明转移癌的临床观察

目的　观察顺铂 (DDP)联合足叶乙甙 (VP -16 )治疗原发灶未明转移癌 (MUO)的疗效。方法　 10例MUO患者均采用EP方案 :DDP 30mg m2 第 1～ 3天 ,足叶乙甙 (VP -16 ) 6 0mg m2 第 1～ 5天 ,2 8天为一周期。结果　 10例中 4例达到完全缓解(CR)为 40 %,3例部分缓解 (PR)为 30 %,2例稳定 (SD)为 2 0 %,1例进展 (PD)为 10 %。结论　顺铂联合足叶乙甙对原发灶未明转移癌有较好的疗效 ,且毒副反应可以耐受。     

关节镜下可吸收交叉钉固定腘绳肌腱重建前十字韧带

目的介绍在关节镜下腘绳肌腱移植重建前十字韧带并利用可吸收交叉钉固定的方法，探讨其临床效果。方法2005年3月至2006年3月，共治疗31例前十字韧带断裂患者。男18例，女13例；年龄19-51岁，平均34岁。致伤原因：交通伤15例，日常生活及运动损伤16例。病程为5d～36个月。合并半月板损伤12例，合并内侧副韧带Ⅰ、Ⅱ度损伤6例，Ⅲ度损伤3例，均为新鲜损伤。合并后十字韧带断裂6例。术后随访12-24个月，平均16．8个月，观察此固定方法的可靠性和疗效。以Lyscholm评分和KT-2000评价手术前后膝关节功能及稳定性。结果26例患者获得随访，所有患者均无伸膝受限，膝关节屈曲活动度均〉120°。屈膝90°时前抽屉试验均阴性；Lachman试验强阳性1例，阳性4例，阴性21例；膝关节功能Lyscholm评分为（94．6±4．2）分。KT-2000检查结果：25例双膝差距为0-4．0mm，平均2．4mm，1例患者关节不稳定，双膝差距5．5mm。结论可吸收交叉钉固定可为关节镜下腘绳肌腱移植重建前十字韧带提供早期的初始稳定性和后期的生物稳定性，是一种可靠的固定方法。     

粘液水肿性苔藓死亡1例

粘液水肿性苔藓死亡１例黄利军１刘飞２周毅成２马淑文３戚基萍４患者女，４５岁，农民。１９９０年４月初诊。患者１年前无诱因，前臂出现数个米粒大丘疹，相继于颜面、四肢、躯干等皮肤变硬厚黑，其上多数米粒大丘疹，全身胀满感，面部重，不发热，食欲正常，既往健康。...