化瘀祛痰方调节AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路抑制炎症小体活化改善AS小鼠肝脏脂质沉积的机制研究

目的?探讨化瘀祛痰方调节腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节因子1/过氧化酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α（AMPK/SIRT1/PGC-1α）信号通路调控炎症小体活化对动脉粥样硬化ApoE-/-小鼠肝脏脂质沉积的影响及作用机制。方法?将24只ApoE-/-小鼠按随机数字表法分为模型组、辛伐他汀组、化瘀祛痰方组，8只C57BL/6J小鼠作为正常组对照。造模结束次日各组开始灌胃，正常组和模型组采用等容积生理盐水，辛伐他汀组采用辛伐他汀混悬液2.275 mg/（kg·d），化瘀祛痰方组采用化瘀祛痰方，生药量为20 g/（kg·d），每日1次，连续给药8周。采用全自动生化分析仪检测血清血脂水平；HE染色和油红O染色观察肝脏组织病理和脂质沉积情况；Western Blot法检测肝脏腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）、沉默信息调节因子1（SIRT1）、过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1α（PGC-1α）、线粒体转录因子A（Tfam）、含pyrin结构域NOD样受体家族3（NLRP3）蛋白表达；实时荧光定量PCR法检测肝脏线粒体DNA（mtDNA）水平；ELISA法检测血清IL-1β、IL-18水平。结果?与正常组比较，模型组甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白总胆固醇（LDL-C）水平显著升高（P<0.01）；肝脏细胞肿胀，排列紊乱，出现大量脂肪空泡，脂质沉积明显；p-AMPK、SIRT1、PGC-1α、Tfam蛋白表达降低，NLRP3蛋白表达升高（P<0.05）； mtDNA相对表达量减少（P<0.01）；IL-1β、IL-18水平升高（P<0.01）。与模型组比较，辛伐他汀组和化瘀祛痰方组TG、TC、LDL-C水平降低（P<0.01）；肝细胞结构有所恢复，少见脂肪空泡，脂质沉积现象改善明显；两组p-AMPK、SIRT1、PGC-1α、Tfam蛋白表达升高，NLRP3蛋白表达减少（P<0.05，P<0.01）；mtDNA相对表达量增加（P<0.01）；两组血清IL-1β、IL-18水平降低（P<0.01）。4组血清高密度脂蛋白总胆固醇（HDL-C）水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论?化瘀祛痰方可通过AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路调节线粒体功能，抑制炎症小体激活和炎性反应，改善肝脏脂质沉积。     

丹酚酸B-葛根素联用对氧糖剥夺/复氧损伤的SH-SY5Y神经细胞焦亡的影响

目的 基于细胞焦亡探讨丹酚酸B和葛根素联用对氧糖剥夺/复氧（OGD/R）损伤的SH-SY5Y神经细胞的保护作用及机制。方法 利用SH-SY5Y细胞构建OGD/R损伤模型，设立空白组、OGD/R组、10 μmol·L^-1丹酚酸B组、100 μmol·L^-1葛根素组、10 μmol·L^-1丹酚酸B和100 μmol·L^-1葛根素联用组及10 μmol·L^-1NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体抑制剂MCC950组。除空白组外，其余各组细胞在OGD/R 6 h后迅速复糖复氧12 h进行OGD/R造模。采噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率，光学显微镜下观测细胞形态，分光光度计法检测培养上清中乳酸脱氢酶（LDH）释放率，Hoechst/碘化丙啶（PI）染色检测细胞膜损伤情况，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测NLRP3、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、消皮素D（GSDMD）、凋亡斑点样蛋白（ASC）和白细胞介素-1β（IL-1β） mRNA表达水平，免疫荧光检测NLRP3和Caspase-1蛋白表达的变化，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测IL-1β、ASC、NLRP3、Caspase-1和剪切胱天蛋白酶-1（cleaved Caspase-1）蛋白表达的变化。结果 与空白组比较，OGD/R组SH-SY5Y细胞存活率显著降低（P<0.01），细胞形态受损，培养上清中LDH渗漏率显著提高（P<0.01），细胞膜破损，细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC和IL-1β mRNA表达水平显著提高（P<0.01），IL-1β、ASC、NLRP3、Caspase-1和cleaved Caspase-1蛋白的表达水平显著提高（P<0.01）。与OGD/R组比较，丹酚酸B、葛根素与丹酚酸B和葛根素联用均能显著提高OGD/R损伤后SH-SY5Y细胞的存活率（P<0.01）；与单用组比较，联用组具有更好的效果（P<0.01）。与OGD/R组比较，丹酚酸B和葛根素联用及MCC950均能改善细胞形态，降低细胞上清液LDH的渗漏（P<0.01），减轻细胞膜损伤水平，降低SH-SY5Y细胞NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC和IL-1β的mRNA表达水平（P<0.05，P<0.01），降低IL-1β、ASC、NLRP3、Caspase-1和cleaved Caspase-1蛋白的表达水平（P<0.05，P<0.01）。结论 结果表明，丹酚酸B和葛根素联用能减轻OGD/R对SH-SY5Y细胞造成的损伤，这可能与其能够抑制细胞焦亡相关。     

丹酚酸B-黄连素复合物对糖尿病小鼠肾损伤及SIRT1/PGC-1α信号通路的影响

目的 通过观察沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)的表达,探讨丹酚酸B和黄连素的复合物对糖尿病小鼠肾损伤的影响。方法 雄性C57BL/6J小鼠经高脂饮食诱导2型糖尿病,将糖尿病小鼠随机分为模型组、丹酚酸B+黄连素组、黄连素组、丹酚酸B组。黄连素、丹酚酸B及其复合物灌胃8周后,观察各组小鼠肾脏组织病理学改变;比较各组小鼠血清肌酐（Scr）、血清尿素（Urea）、空腹血糖水平（FBG）的变化,以及各组小鼠肾脏组织SIRT1、PGC-1α的蛋白表达。结果 与正常组小鼠相比,模型组肾脏病理可见肾小球肥大,系膜区增宽增厚等。丹酚酸B、黄连素及其复合物均可减轻糖尿病引起的肾脏微结构的改变,其中丹酚酸B和黄连素的复合物效果最为显著。不同药物治疗后,丹酚酸B+黄连素组Scr、Urea水平显着降低（P<0.05）;丹酚酸B+黄连素组、黄连素组及丹酚酸B组肾脏组织SIRT1/PGC-1α的蛋白表达均有所上升（P <0.05）,其中丹酚酸B+黄连素组效果最为显著。结论 丹酚酸B和黄连素的复合物可显著改善糖尿病小鼠的肾损伤,该作用与其...     

基于 Akt/mTOR 自噬通路介导 NLRP3 炎症小体失活探讨冲和膏促进糖尿病大鼠溃疡创面愈合的作用机制

目的 探讨冲和膏通过蛋白激酶 B （Akt） /哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 （mTOR） 自噬通路介导核苷酸结合寡 聚酸结构域样受体蛋白 3 （NLRP3） 炎症小体失活对糖尿病大鼠溃疡创面愈合的作用机制。方法 采用高糖高脂 饲料喂养、腹腔注射链脲佐菌素 （Streptozocin,STZ） 联合皮肤缺损方法构建糖尿病溃疡 SD 大鼠创面模型 36 只,将大鼠随机分为模型组、冲和膏组和生长因子组,每组 12 只。另取 12 只 SD 大鼠构建普通创面模型作 为空白组。空白组和模型组不进行药物干预,冲和膏组和生长因子组分别外敷冲和膏、生长因子凝胶,观察记 录各组大鼠创面愈合情况。给药第 7 天和第 14 天分别取材,HE 染色观察创面组织病理学改变,并进行成纤 维细胞计数;ELISA 法检测血清中白细胞介素 （IL） -1β、IL-18、肿瘤坏死因子 （TNF） -α 水平;免疫组化检测 创面肉芽组织自噬相关蛋白 Beclin-1、LC3-Ⅱ表达水平;Western Blot 法检测创面肉芽组织炎症小体相关蛋白 NLRP3、含 Caspase 募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白 （ASC） 、Caspase-1、Pro-Caspase-1 及 Akt/mTOR 自噬通 路相关蛋白 Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR 的表达情况。结果 与空白组比较,模型组在第 7 天和第 14 天创 面病理损伤修复延缓,单位面积成纤维细胞数量较少 （P＜0.01） ,炎症因子 IL-1β、IL-18、TNF-α 水平升高 （P＜0.01） ,创面组织中 ASC、Pro-Caspase-1、Caspase-1、NLRP3 表达水平升高 （P＜0.01） ,Beclin-1、LC3-Ⅱ 以及 mTOR、p-mTOR、Akt、p-Akt 表达水平降低 （P＜0.01） ;与模型组比,第 7 天和第 14 天冲和膏组和生长 因子组病理损伤明显改善,单位面积成纤维细胞数量明显增加 （P＜0.01） ,炎症因子 IL-1β、IL-18、TNF-α 水 平明显降低 （P＜0.01） ,创面组织中ASC、Pro-Caspase-1、Caspase-1、NLRP3表达水平降低 （P＜0.01） ,Beclin-1、 LC3-Ⅱ以及 mTOR、p-mTOR、Akt、p-Akt 表达水平升高 （P＜0.01,P＜0.05） 。结论 冲和膏可降低炎症反 应,促进成纤维细胞生成,调控 Akt/mTOR 通路介导 NLRP3 炎症小体失活,改善创面自噬水平,从而促进糖 尿病大鼠溃疡创面愈合。     

电针“足三里”对慢性疲劳综合征大鼠骨骼肌腺苷酸活化蛋白激酶/过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子α信号通路基因表达的影响

目的:基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子α(PGC-1α)信号通路,观察针刺"足三里"对慢性疲劳综合征(CFS)大鼠骨骼肌细胞线粒体氧化应激的影响,阐释针刺"足三里"防治CFS的部分作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、足三里组、非经非穴组,每组10只。采用多因素造模法复制CFS模型。足三里组电针双侧"足三里",非经非穴组电针双侧非经非穴,每日1次,每次20min,持续10d。检测造模前后、治疗后大鼠抓力变化;Western blot法检测大鼠骨骼肌三磷酸腺苷(ATP)合酶、AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(SIRT 1)以及PGC-1α蛋白的表达;荧光定量PCR技术检测大鼠骨骼肌ATP合酶、SIRT 1以及PGC-1αmRNA的表达。结果:造模后,模型组、足三里组、非经非穴组大鼠抓力较正常对照组明显下降(P0.05),治疗后足三里组大鼠抓力较模型组明显升高(P0.05)。与正常对照组比较,模型组大鼠骨骼肌ATP合酶蛋白表达、ATP合酶mRNA表达明显下调(P0.05,P0.01),p-AMPK/AMPK差异无统计学意义(P0.05),SIRT 1蛋白表达明显升高(P0.01),PGC-1α蛋白及mRNA的表达明显降低(P0.01)。与模型组相比,足三里组大鼠骨骼肌ATP合酶mRNA表达明显上调(P0.01),p-AMPK/AMPK上调(P0.05),SIRT 1蛋白及mRNA、PGC-1α蛋白及mRNA的表达明显上调(P0.01)。结论:针刺"足三里"可使CFS大鼠骨骼肌AMPK表达明显增加,提高SIRT 1的表达,进一步直接或间接激活PGC-1α,提高线粒体的ATP合成,改善机体线粒体氧化应激反应,维持机体能量代谢,从而起到对CFS的治疗作用。     

毛蕊异黄酮苷调控SIRT1 信号通路缓解海马神经元细胞损伤的研究

目的探讨毛蕊异黄酮苷（CG）通过调控沉默信息调节因子1（SIRT1）信号通路对氧糖剥夺再灌注（OGD/R） 海马神经元细胞损伤的保护作用。方法将海马神经元细胞在无糖培养基中缺氧8 h 后,在完全培养基中复氧 6 h 建立OGD/R 模型。将细胞分为4 组：正常对照组、氧糖剥夺再灌注组（OGD/R 组,模型组）、SIRT1 特异性 抑制剂组（EX527 组）、EX527+毛蕊异黄酮苷组（EX527+CG 组）。细胞处理结束后,采用CCK-8 法测定细胞存 活率;分光光度法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量;荧光 法检测细胞中活性氧（ROS）含量、细胞凋亡率;Western Blot 及ELISA 法检测SIRT1 信号通路中相关蛋白的表 达水平。结果与OGD/R 组比较,EX527 组的细胞活力、SOD 含量及SIRT1、叉头转录因子1（FOXO1）、B 淋 巴细胞瘤-2（Bcl-2）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ 共激活因子-1α（PGC-1α）蛋白表达水平均明显降低（P＜ 0.05）,LDH 及MDA 含量、细胞凋亡率、Bax 蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。与EX527 组比较,EX527+CG 组的细胞活力及FOXO1、Bcl-2 和PGC-1α 蛋白表达水平均有升高,SOD 含量及SIRT1 蛋白表达水平明显升高 （P＜0.05）;MDA 含量有降低,LDH 含量、细胞凋亡率及Bax 蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）。结论毛蕊 异黄酮苷缓解海马神经元OGD/R 损伤的机制与调控SIRT1 信号通路有关。     

当归芍药散对AD大鼠线粒体稳态及AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路的影响

目的：探讨当归芍药散对阿尔茨海默病(AD)大鼠线粒体形态和功能的影响及作用机制。方法：采用双侧侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)构建AD模型大鼠。40只大鼠随机分为假手术组、模型组、当归芍药散低、中、高剂量(12、24、36 g·kg^-1)组,连续灌胃14 d后透射电镜观察大鼠海马区线粒体形态变化,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况,免疫荧光检测活性氧(ROS)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体融合蛋白2(MFN2)、细胞色素C氧化酶亚基Ⅳ(COXⅣ)、PGC-1α mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、沉默信息调节因子1(SIRT1)、PGC-1α蛋白的表达。结果：与假手术组比较,模型组大鼠海马区线粒体损伤明显,ROS产生和细胞凋亡率显著增高(P<0.01),MFN2、COXⅣ、PGC-1α mRNA表达显著下调,Drp...     

丹七片对缺血性心脏病大鼠模型能量代谢的调节作用

目的：探讨丹七片对缺血性心脏病大鼠模型能量代谢的调节作用。方法：通过结扎左前降支冠状动脉建立缺血性心脏大鼠模型,将48只大鼠分为假手术组、模型组、丹七片组和曲美他嗪组,每组12只。丹七片组大鼠以5000 mg/kg的剂量灌胃丹七片溶液,曲美他嗪组大鼠以60 mg/kg的剂量灌胃曲美他嗪溶液,其他组大鼠灌胃生理盐水。治疗1个月后评价各组大鼠的心脏功能、心肌组织和细胞病理改变、心肌ATP水平及AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路及其下游分子表达水平。结果：超声心动图显示,与模型组比较,丹七片组大鼠的LVIDs和LVIDd分别减少了2635%和2073%,而EF和FS分别增加了3161%和4282%,差异有统计学意义（P<005）。HE染色结果显示,丹七片组的心肌细胞排列较为整齐,细胞水肿减轻,细胞间隙减小,炎性细胞减少。与模型组比较,丹七片组大鼠的心肌ATP水平显著增加（P<005）。免疫组织化学染色结果显示,与模型组比较,丹七片组大鼠PGC-1α的阳性染色评分显著升高（P<005）。Western Blotting结果显示,与模型组比较,丹七片组大鼠的AMPK、SIRT1、PGC-1α、MFN1、MFN2和SOD2蛋白表达均显著升高（P<005）。结论：丹七片可以在缺血性心脏病大鼠模型中发挥心脏保护功能,并上调ATP的产生。丹七片可激活AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路及其下游分子,改善能量代谢并还调节线粒体的生物合成,从而改善大鼠心脏功能并防止心肌损伤。     

白术水提物对肥胖小鼠血管稳态失衡的影响

目的 探讨白术Atractylodes macrocephala水提物对肥胖小鼠血管稳态失衡的改善作用和潜在机制。方法 选取40只ICR小鼠,随机分为正常组、模型组、依折麦布片（1 mg/kg）组和白术水提物（4、2 g/kg）组,每组8只,除正常组给予普通饲料外,其余各组每天给予高糖高脂饲料喂养,造模的同时分别ig相应药物,正常组及模型组ig蒸馏水,1次/d,连续11周。给药期间检测小鼠体质量及面温、舌色等中医证候指标;末次给药后,检测血清中一氧化氮（nitric oxide,NO）、内皮素-1（endothelin-1,ET-1）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）及总胆固醇（total cholesterol,TC）水平;取主动脉观察其组织形态学变化,并检测主动脉中白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）、TNF-α、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（phosphorylated adenylate-activated protein kinase,p-AMPK）、沉默信息调节因子1（silent information regulator,SIRT1）、过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子-1α（peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator-1α,PGC-1α）的蛋白表达。结果 白术水提物可显著提高肥胖小鼠旷场水平移动总距离和水平移动速度、排便量、排尿量及面温（P＜0.01）,增加尾部微循环血流量（P＜0.05、0.01）,显著降低尿液吸光度、足温（P＜0.01）,并改善舌色变化（P＜0.01）,显著降低TC、LDL-C、TNF-α和ET-1水平（P＜0.01）,升高NO含量（P＜0.01）,改善主动脉组织结构异常,降低主动脉IL-6、TNF-α、TLR4蛋白表达（P＜0.05、0.01）,提高p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表达（P＜0.05、0.01）。结论 白术水提物能够有效缓解倦怠乏力、排便无力、四肢烦热等证候表现,并能改善肥胖引起的主动脉损伤、血管内皮紊乱等血管稳态失衡,其作用机制可能和激活AMPK/SIRT1/PGC-1α通路有关。     

木犀草素对抗2型糖尿病大鼠心肌纤维化的机制研究

目的 探究木犀草素(LUT)是否通过调控腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)-沉默信息调节因子3(SIRT3)信号对抗2型糖尿病(T2D)大鼠心肌纤维化。方法 体内构建T2D模型。Masson染色观察病理学特征并测定心肌胶原容积分数(CVF);Western blot检测纤维连接蛋白(fibronectin)、胶原蛋白I(collagen I)、α-平滑肌动蛋白(α-SMA)和磷酸化AMPK(p-AMPK)、AMPK和SIRT3表达。体外培养心肌细胞H9C2,流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot分析各蛋白表达。结果 在体内,T2D模型大鼠心肌间质胶原纤维增加,CVF增大,fibronectin、collagen I和α-SMA水平增高,p-AMPK/AMPK和SIRT3水平降低(P<0.05);LUT干预后可明显改善以上情况(P<0.05)。在体外,高糖诱导后H9C2细胞凋亡水平升高,fibronectin、collagen I和α-SMA水平增高,p-AMPK/AMPK和SIRT3蛋白水平降低(P<0.05);LUT干预可改善HG对H9C2细胞的...     

活血通脉方对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化和心肌细胞能量代谢的影响研究

目的：探讨活血通脉方对慢性心力衰竭 （CHF） 大鼠心肌纤维化 （MF） 和心肌细胞能量代谢的影响。方法：将60 只 SD 大鼠随机选择 10 只作为假手术组,其余大鼠用腹主动脉缩窄法建立 CHF 模型。模型制备成功的 50 只大鼠随机分为模型组、阳性对照组及活血通脉方高、中、低剂量组（高、中、低剂量组）,每组 10 只。阳性对照组按 1.5 mg/kg 的剂量灌胃赖诺普利;高、中、低剂量组按 16.0、8.0、4.0 g/kg 的剂量灌胃活血通脉方;假手术组与模型组大鼠灌胃等容积的生理盐水。每天1 次,持续 4 周。计算各组大鼠心质量指数,检测左室射血分数（LVEF）、左心室短轴收缩率（LVFS）及心肌组织转化生长因子-β1 （TGF-β1）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）水平、5''-单磷酸腺苷（AMP）依赖的蛋白激酶（AMPK）、过氧化物酶体增殖剂激活受体 γ （PPARγ）、辅助激活因子-1α （PGC-1α） 蛋白及 mRNA 表达水平。结果：与假手术组比较,模型组 LVEF、LVFS、AMPK、PGC-1α 蛋白及 mRNA 相对表达下降 （P＜0.05）,心质量指数及 TGF-β1、MMP-9 水平升高 （P＜0.05）。与模型组比较,活血通脉方高、中、低剂量组和阳性对照组 LVEF、LVFS 及 AMPK、PGC-1α 蛋白与 mRNA 相对表达升高（P＜0.05）,心质 量指数及 TGF-β1、MMP-9 水平降低（P＜0.05）。与阳性对照组比较,活血通脉方中、低剂量组LVEF、LVFS、AMPK、PGC-1α蛋白及 mRNA 相对表达较低 （P＜0.05）,心质量指数及 TGF-β1、MMP-9 水平较高 （P＜0.05）。结论：活血通脉方能显著提高CHF 大鼠心功能,改善大鼠心肌纤维化,提高心肌细胞能量代谢,其机制可能与上调 AMPK、PGC-1α 表达,下调 TGF-β1、MMP-9 水平有关。     

青藤碱调节GSK3β/Nrf2/HO-1 及NF-κB 信号通路对帕金森病小鼠的神经保护作用

目的 基于GSK3β/Nrf2/HO-1 及NF-κB 信号通路探讨青藤碱（Sinomenine,SIN）对帕金森病（Parkinson’s disease,PD）小鼠的干预作用及机制。方法 将C57BL/6 小鼠,随机分为6 组：正常组、模型组、阳性药组 （左旋多巴,75 mg·kg-1）及青藤碱低、中、高剂量组（20、40、80 mg·kg-1）,每组8 只。腹腔注射20 mg·kg-1 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）,每天1 次,共造模5 d。在注射MPTP 后1 h 进行灌胃给药,每 天1 次,共12 d。在给药第11 天对小鼠进行爬杆实验,第12 天进行转棒实验,测试小鼠行为学变化。采用 ELISA 法检测血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6 含量;RT-qPCR 法检测脑组织中 TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA 表达水平;Western Blot 法检测脑组织中TH、Nrf2、HO-1、p-GSK3β、GSK3β、 p-IκB、IκB、p-NF-κB、NF-κB 蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠的自动转身潜伏期（T-turn） 明显延长（P＜0.05）,掉落次数显著增多（P＜0.001）;脑组织中TH 蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）,IL-1β、 TNF-α、IL-6 mRNA 表达水平显著升高（P＜0.001）;血清TNF-α、IL-1β、IL-6 水平明显升高（P＜0.05,P＜ 0.01）;脑组织中p-GSK3β/GSK3β、Nrf2、HO-1 蛋白表达水平显著降低（P＜0.05,P＜0.001）,p-IκB/IκB、 p-NF-κB/NF-κB 蛋白表达比值显著升高（P＜0.001）。与模型组比较,青藤碱中、高剂量组小鼠的T-turn 明显 缩短（P＜0.05,P＜0.001）,掉落潜伏期明显延长（P＜0.05,P＜0.01）,掉落次数显著减少（P＜0.001）,脑组织 中TH 蛋白表达水平显著升高（P＜0.01,P＜0.001）,血清TNF-α 水平明显降低（P＜0.05）;各给药组小鼠脑组 织中IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA 表达水平均显著降低（P＜0.001）,血清IL-1β、IL-6 水平显著降低（P＜ 0.01,P＜0.001）,脑组织中p-GSK3β/GSK3β、Nrf2、HO-1 蛋白表达水平显著升高（P＜0.05,P＜0.01,P＜ 0.001）,p-IκB/IκB、p-NF-κB/NF-κB 蛋白表达比值显著降低（P＜0.001）。结论 青藤碱可通过调节帕金森病 小鼠脑内GSK3β /Nrf2/HO-1 和NF-κB 通路,增强抗氧化应激能力和抑制神经炎症,从而发挥神经保护作用。     

益心泰颗粒对慢性心衰（心气虚兼血瘀水停证）大鼠AMPK、PGC-1α的影响

目的 观察益心泰颗粒对慢性心力衰竭（CHF）（心气虚兼血瘀水停证）大鼠AMPK、PGC-1α的影响。方法 采用丙硫氧嘧啶灌胃及阿霉素腹腔注射复制CHF（心气虚兼血瘀水停证）模型大鼠,将造模成功大鼠分为模型组与益心泰低、中、高剂量组和曲美他嗪组;另设正常对照组。灌胃4周后观察心肌组织病理结构,检测LVEF、血清NT-proBNP及心肌组织FFA、ATP/AMP、LAC、p AMPK、AMPK、PGC-1α水平。结果 与模型组比较,益心泰颗粒低、中、高剂量组及曲美他嗪组LVEF、心肌组织ATP/AMP值、心肌组织p-AMPK、AMPK、PGC-1α相对灰度值均明显升高（P <0.05或P <0.01）,血清NT-proBNP及心肌组织FFA、LAC明显降低（P <0.05或P <0.01）。结论 益心泰颗粒能促进慢性心力衰竭（心气虚兼血瘀水停证）大鼠AMPK、PGC-1α表达,改善心肌能量代谢。     

黄芩素调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的焦亡减轻小鼠急性肺损伤作用

目的 探究黄芩素对急性肺损伤（acute lung injure,ALI）小鼠的治疗作用以及对NOD样受体热蛋白结构域3（NOD-like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（cystein-asparate protease-1,Caspase-1）/消皮素D（gasdermin D,GSDMD）焦亡通路的调控作用。方法 60只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、Caspase-1抑制剂VX-765（30 mg/kg）组和黄芩素低、中、高剂量（10、20、40 mg/kg）组,每组10只。除对照组外,其余各组ip脂多糖（lipopolysaccharide,LPS,15 mg/kg）,分别于造模前24 h和造模0.5 h后给予黄芩素或VX-765（30 mg/kg）干预。造模24 h后,检测小鼠肺湿干质量比以评价肺肿胀;苏木素-伊红（HE）染色法检测肺组织病理变化;透射电子显微镜观察肺组织中巨噬细胞损伤情况;ELISA法检测小鼠血清和肺泡灌洗液中白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、IL-6、IL-18、IL-1α和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平;采用Western blotting检测肺组织NLRP3、凋亡相关的斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC）、cleaved Caspase-1、pro Caspase-1、GSDMD-N以及GSDMD蛋白表达。人源单核细胞白血病THP-1细胞加入100 nmol/L佛波酯诱导24 h,贴壁后随机分为对照组、模型组、VX-765（500 nmol/L）组和黄芩素低、中、高剂量（3、10、30 μmol/L）组,除对照组外,采用1 μg/mL LPS联合5 mmol/L三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）刺激THP-1细胞建立细胞炎症模型,给予黄芩素或VX-765干预,采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测上清液中IL-1β、IL-18和IL-1α水平;LDH试剂盒检测上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活力;免疫荧光评估NLRP3炎症小体组装情况;采用膜联蛋白-V-PE（Annexin-V-PE）/7-氨基放线菌素（7-aminoactinomycin,7-AAD）试剂盒评价细胞焦亡情况;Western blotting检测细胞NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路相关蛋白表达。结果 在ALI小鼠模型中,与模型组比较,VX-765组和黄芩素组小鼠肺肿胀程度明显减轻（P<0.01）,肺组织损伤评分显著降低（P<0.01）,肺组织中巨噬细胞炎性病变得到缓解,血清及肺泡灌洗液中IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-18、IL-1α水平明显降低（P<0.05、0.01）,肺组织NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1、pro Caspase-1、GSDMD-N以及GSDMD蛋白表达水平均显著降低（P<0.05、0.01）。在细胞炎症模型中,与模型组比较,VX-765组和黄芩素组THP-1细胞IL-1β、IL-18、IL-1α分泌量显著降低（P<0.01）,NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路相关蛋白表达水平明显降低（P<0.05、0.01）,NLRP3炎症小体组装明显被抑制（P<0.05、0.01）,LDH释放量及细胞焦亡率显著降低（P<0.01）。结论 黄芩素通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的细胞焦亡,从而改善LPS诱导的小鼠ALI。     

培土生金法对COPD小鼠骨骼肌线粒体能量代谢保护作用机制研究

[目的] 探讨培土生金法对慢性阻塞性肺疾病（COPD）小鼠骨骼肌线粒体能量代谢的保护作用及机制。[方法] 将50只小鼠随机分为5组,分别为对照组、模型组、参苓白术散高、中、低剂量组。采用烟熏方法（持续8周）复制COPD小鼠模型,熏烟4周后给予参苓白术散灌胃,实验结束后取腓肠肌组织并检测三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）及一磷酸腺苷（AMP）含量;Western blot法半定量分析腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、p-AMPK、过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子-1α（PGC-1α）、线粒体融合蛋白2（Mfn2）表达变化。[结果] 与对照组相比,模型组ATP/AMP显著降低（P<0.05）;与模型组相比,参苓白术散高剂量组ATP/AMP比值升高（P<0.05）。与对照组相比,模型组p-AMPK/AMPK比值降低,PGC-1α及Mfn2蛋白表达减少（P<0.05）,与模型组相比,高、中剂量组p-AMPK/AMPK比值升高,高剂量组PGC-1α及Mfn2蛋白表达增加（P<0.05）。[结论] 培土生金法可通过提高p-AMPK、PGC-1α及Mfn2的表达以保护COPD小鼠线粒体能量代谢,从而维持COPD小鼠骨骼肌正常功能。     

白藜芦醇对低氧内皮细胞活性的影响及机制研究

目的探讨白藜芦醇(RSV)对低氧内皮细胞炎症反应的影响及机制。方法 HUVECs分为常氧、低氧、低氧+DMSO、低氧+RSV(低、中、高剂量)组。分别采用CCK8法检测细胞活力,qRT-PCR及Western blot法检测SIRT1、IL-6和ICAM-1 mRNA及SIRT1、PGC-1α和NF-κB p65蛋白的表达,流式细胞术检测活性氧(ROS)含量。结果低氧能抑制HUVECs细胞活力,下调SIRT1、PGC-1α蛋白表达(P0.05);上调IL-6、ICAM-1 mRNA及磷酸化NF-κB p65蛋白表达(P0.05);促进ROS生成(P0.05)。RSV能促进低氧HUVECs细胞活力,上调SIRT1、PGC-1α表达(P0.05);下调IL-6、ICAM-1及磷酸化NF-κB p65蛋白的表达(P0.05);抑制ROS生成(P0.05)。结论 RSV可促进低氧HUVECs细胞活力,其机制可能与RSV抑制低氧HUVECs炎症反应有关。     

白术黄芪汤乙酸乙酯提取物对巨噬细胞NLRP3炎症小体的作用研究

摘 要：目的：观察白术黄芪汤乙酸乙酯提取物对巨噬细胞NOD样受体-3（NLRP3）炎症小体的影响。方法：用佛波酯（PMA）（10 ng?mL-1）刺激U937细胞48 h,诱导其成为巨噬细胞,观察不同剂量白术黄芪汤乙酸乙酯提取物（0,3.125,6.25,12.5,25,50,100 μg?mL-1）对细胞活力的作用,并选择合适的浓度。采用实时荧光定量（RT-PCR）和免疫印迹法（Western blot）测定细胞中NLRP3,半胱天冬酶-1（caspase-1）的含量,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素（IL）-1β 的含量。结果：细胞计数试剂盒（CCK-8）实验表明,当药物浓度低于25 μg?mL-1时,对细胞活力没有影响,当药物浓度高于50 μg?mL-1时,对细胞活力有抑制作用（P＜0.05）,选择25 μg?mL-1浓度进行后续实验。与空白组相比,LPS组细胞中NLRP3,caspase-1表达明显增加（P＜0.01）,细胞培养上清中的IL-1β浓度也明显增高（P＜0.01）。白术黄芪汤乙酸乙酯提取物作用后,NLRP3,caspase-1,IL-1β表达均明显下降（P＜0.05）。结论：白术黄芪汤乙酸乙酯提取物对LPS刺激的巨噬细胞NLRP3炎症小体有抑制作用。     

四君子汤调控AMPK-SIRT1 蛋白改善运动性疲劳小鼠学习记忆的机制研究

目的：观察四君子汤对运动性疲劳（EF） 小鼠AMPK/SIRT1信号通路的影响,并探讨其改善EF认 知损伤和学习记忆能力的机制。方法：将60只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、四君子汤高剂量组、 四君子汤中剂量组、四君子汤低剂量组。除空白组外,其他各组小鼠构建脾气虚证EF小鼠模型。四君子汤高、 中、低剂量组小鼠分别给予不同浓度的四君子汤灌胃,空白组和模型组以等体积蒸馏水灌胃,各组连续灌胃 4周。采用Morris水迷宫实验评估小鼠的认知功能,采用ELISA法检测小鼠血清中乳酸、血糖、肝糖原、肌糖 原的水平,Western Blot法检测小鼠脑组织中AMPK和SIRT1的蛋白表达量。结果：实验后,模型组小鼠体质 量、摄食量、血糖、肝糖原含量、肌糖原含量、目标象限游泳时间、穿越平台次数、AMPK 蛋白表达量、 SIRT1蛋白表达量低于空白组,血清乳酸水平高于空白组（P＜0.05）。给药干预后,四君子汤高、中、低剂量 组小鼠体质量、摄食量、力竭游泳时间、肝糖原含量、肌糖原含量、目标象限游泳时间、穿越平台次数高于模 型组,血清乳酸水平低于模型组（P＜0.05）。四君子汤高剂量小鼠游泳力竭时间高于低剂量组,乳酸水平低于 低剂量组（P＜0.05）。四君子汤高、中剂量组肝糖原、肌糖原含量高于低剂量组（P＜0.05）。与模型组比较, 四君子汤高、中剂量组AMPK及SIRT1蛋白表达量增多（P＜0.05）,四君子汤低剂量组SIRT1蛋白表达量增 多（P＜0.05）。与四君子汤低剂量组比较,四君子汤高、中剂量组AMPK及SIRT1蛋白表达量增多（P＜0.05）。 结论：四君子汤可在一定程度调控AMPK/SIRT1的活性,进而改善EF小鼠脾虚症状。     

抵挡汤在高糖、高糖波动环境下对人脐静脉血管内皮细胞能量代谢相关因子表达的影响

[目的] 通过观察抵挡汤在高糖、高糖波动环境下对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）共激活因子1α（PGC-1α）、内皮细胞型一氧化氮合酶（eNOS）、半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）表达的影响,探讨抵挡汤对血管内皮细胞保护作用。[方法] 模拟高糖、高糖波动环境培养HUVECs并分别进行抵挡汤、辛伐他汀、二甲双胍干预,各组培养48 h后,蛋白免疫印迹（Western Blot）检测p-AMPK、PGC-1α、eNOS蛋白表达,逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测caspase-3基因含量,流式细胞仪检测细胞凋亡率。[结果] 高糖组、高糖波动组p-AMPK、PGC-1α、eNOS表达均显著下降,且以高糖波动组最低。抵挡汤干预后p-AMPK、PGC-1α、eNOS表达均显著上调,与二甲双胍干预无差异。高糖组、高糖波动组caspase-3 mRNA表达均明显升高,抵挡汤干预后均明显降低,且与二甲双胍干预组无差异。[结论] 抵挡汤在高糖、高糖波动环境下均可磷酸化AMPK,上调PGC-1α、eNOS蛋白表达、下调caspase-3基因表达,影响能量代谢和线粒体合成,减少内皮细胞凋亡,从而保护血管内皮。     

基于AMPK/SIRT1/PGC-1α通路探讨泽泻汤改善高脂饮食诱导小鼠认知障碍的作用机制

目的：探讨泽泻汤对高脂饮食小鼠认知功能及AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路的调控作用。方法：普通饮食C57BL/6J小鼠作为对照组,高脂模型小鼠随机分为模型组、泽泻汤组和辛伐他汀组,每组8只。对照组及模型组给予蒸馏水灌胃,给药组分别给予泽泻汤和辛伐他汀灌胃。干预后,通过葡萄糖耐量试验、胰岛素耐受试验以及血脂4项（TG、TC、LDL-c、HDL-c）评估各组小鼠血糖及血脂的变化情况;Morris水迷宫及新物体识别实验评估各组小鼠学习记忆能力;Nissl染色观察海马神经元情况;免疫荧光及RT-qPCR分别检测IBA1蛋白及促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS、COX2 mRNA相对表达水平;硫磺素S观察脑内淀粉样蛋白沉淀情况;Western Blot检测海马组织细胞凋亡、Aβ转运以及AMPK/SIRT1/PGC-1α通路相关蛋白表达水平。结果：与模型组比较,泽泻汤能改善高脂模型小鼠的葡萄糖耐受性和胰岛素敏感性（P<0.01,P<0.05）,泽泻汤组小鼠体质量和血清中TG及LDL-c水平显著降低（P<0.01,P<0.05）,血清中HDL-c水平...