支气管哮喘和慢性阻塞性肺疾病患者诱导痰中基质金属蛋白酶及其抑制剂与气道炎症及气流受限

目的探讨支气管哮喘（简称哮喘）和慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者诱导痰中基质金属蛋白酶9（MMP-9）和基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）的水平及其与炎性细胞数、肺功能的关系。方法分别选择14例缓解期哮喘患者（哮喘组）、12例稳定期COPD患者（COPD组）和10名健康对照者（健康对照组）进行肺功能测定和用诱导痰检查方法对痰炎性细胞进行分类计数，并用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定诱导痰上清液中自细胞介素4（IL-4）、MMP-9和TIMP-1浓度。结果哮喘组患者诱导痰中嗜酸粒细胞、中性粒细胞分别为0．181±0．067、0．30±0．07，健康对照组为0．007±0．005、0．26±0．06，COPD组为0．042±0．017、0．50±0．10，3组细胞间比较差异有统计学意义（F值分别为4．32、4．13，P均〈0．05）。哮喘组、COPD组、健康对照组间诱导痰中IL-4浓度分别为（19±7）×10^-3／L、（14±6）×10^-3g／L、（11±4）×10^-3g／L，3组诱导痰中IL-4浓度比较差异无统计学意义（F=1．56，P均〉0．05），且分别与嗜酸粒细胞、中性粒细胞和第一秒用力呼气容积占预计值百分比（FEV1占预计值％）无相关（r分别为0．33、0．11、0．19、0．25、0．39、0．40、0．21、0．35、0．17，P均〉0．05）。哮喘组和COPD组诱导痰中MMP-9、TIMP-1浓度分别为（15．9±6．0）g／L、（13．4±5．1）g／L、（19．8±8．5）g／L、（16．7±7．6）g／L，健康对照组分别为（1．8±1．1）g／L、（1．3±0．9）g／L，两组MMP-9、TIMP-1浓度比较差异有统计学意义（F值分别为2．99、4．22，P均〈0．05）。哮喘组MMP-9浓度与嗜酸粒细胞呈正相关（r=0．71，P〈0．05）；COPD组MMP-9浓度与中性粒细胞呈正相关（r=0．59，P〈0．05），但与FEV。占预计值％和第一秒用力呼气容秽用力肺活量（FEV1／FVC）无相关（r分别为0．22、0．16、0．25、0．30，P均〉0．05）。哮喘组和COPD组TIMP．1浓度均与嗜酸粒细胞和中性粒细胞无相关（r分别为0．27、0．31、0．20、0．35，P均〉0．05），但与FEV。占预计值％呈负相关（r分别为-0．58、-0．62，P均〈0．05）。哮喘组和COPD组诱导痰中MMP-9／TIMP-1比值分别为0．8±0．7、0．8±0．6，两组比较差异无统计学意义（F=1．78，P〉0．05），但与健康对照组（1．5±0．6）比较差异有统计学意义（F=3．70，P〈0．05），且与FEV1占预计值％呈正相关（r分别为0．56、0．61，P均〈0．05）。结论哮喘组和COPD组患者诱导痰中MMP-9／TIMP-1比值的失衡与气道炎症和气流受限有关，这种失衡在哮喘和COPD细胞外基质的重塑和气流受限的发病机制中发挥重要作用。     

基质金属蛋白酶2和组织型基质金属蛋白酶抑制物2在兔颈动脉粥样硬化斑块中的表达

目的观察基质金属蛋白酶2（MMP-2）和组织型基质金属蛋白酶抑制物-2（TIMP-2）在兔颈动脉粥样硬化斑块中表达的动态变化，探讨二者对斑块稳定性的影响。方法用气体干燥术建立兔颈动脉内膜损伤模型。将36只兔分为正常对照组（18只）和实验组（高脂饲料加颈动脉内膜损伤，18只），实验组又分为术后1、2、3个月组（各6只）。将获得的各组兔颈动脉做连续切片，用免疫组化法检测并分层分析兔颈动脉斑块处的MMP-2和TIMP-2表达情况。结果MMP-2和TIMP-2在对照组兔颈动脉组织中低水平表达，在实验组兔颈动脉组织中表达的水平升高。MMP-2免疫沉淀物积分吸光度（M）值为3个月组（184±14）〉2个月组（147±15）〉1个月组（125±16），P〈0．05；TIMP-2IA值为1个月组（159±13）〉2个月组（149±10）〉3个月组（147±17），P〈0．05。MMP-2在斑块肩部和表面的表达密度为2个月〉3个月组〉1个月组，P〈0．05；TIMP-2在斑块肩部和表面的表达密度为1个月组〉3个月组〉2个月组，P〈0．05。结论MMP-2和TIMP-2共同调节细胞外基质的降解与合成，在斑块生长过程中，二者表达的不平衡使同一斑块不同部位的稳定性可能发生变化。     

硫化氢在大鼠急性支气管哮喘模型中的变化及意义

目的观察卵白蛋白（OVA）诱导的大鼠急性支气管哮喘（简称哮喘）模型，内源性硫化氢（H2S）生成的变化以及应用外源性硫氢化钠（NaHS，H2S供体）处理对哮喘大鼠的影响，探讨气体信号分子H2S在哮喘发病中的作用。方法24只健康SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、哮喘组和NaHS干预组，每组8只。致敏后28d测定所有大鼠肺功能并观察大鼠支气管周围炎性细胞浸润程度并进行评分；采用敏感硫电极测定血浆及肺组织H2S的生成量；采用酶促反应法测定大鼠肺组织匀浆中胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）活性；用Western blot法测定大鼠肺组织中CSE蛋白含量（每组3只）。结果哮喘组大鼠呼气峰流量（PEF）、血浆及肺组织中H2S分别为（2．90±0．70）L／s、（10±3）、（4．9±1．3）μmoL／L，对照组分别为（6．50±0．10）L／s、（54±10）、（24．1±8．0）μmoL／L，NaHS干预组大鼠分别为（5．70±0．50）L／s、（17±4）、（15．3±4．0）μmol／L，3组间比较差异有统计学意义（F值分别为112．13、110．10、27．34，P均〈0．01）；哮喘组大鼠肺组织匀浆每毫克蛋白中CSE活性和肺组织匀浆中CSE蛋白含量[用相对吸光度（A）值表示]分别为（1．00±0．10）nmol·min^-1·mg^-1、0．20±0．10，正常对照组分别为（1．80±0．10）nmo]·min^-1·mg^-1、0．90±0．30，NaHS干预组大鼠分别为（1．60±0．20）nmo]·min^-1·mg^-1、1．10±0．20，3组间比较差异有统计学意义（F值分别为79．39、12．28，P均〈0．05）；光镜下支气管周围炎性细胞浸润程度评分[用中位数（四分位数）]表示，正常对照组为1（0～1）分，哮喘组为3（2～4）分，NaHS干预组为1（1～2）分，3组间比较差异有统计学意义（H=16．93，P〈0．01）；哮喘组肺组织H2S含量与PEF呈正相关（r=0．74，P〈0．01）；与光镜下支气管周围炎性细胞浸润程度评分呈负相关（r=-0．64，P〈0．01）。结论内源性H2S参与了大鼠急性哮喘发病过程，外源性NaHS可以减轻哮喘气道炎症，对哮喘急性发病起到保护作用。     

坎地沙坦加氢氯噻嗪对轻中度高血压的疗效和安全性

目的评价坎地沙坦加氢氯噻嗪（复方坎地沙坦酯片）对原发性高血压的降压疗效和安全性。方法对原发性高血压患者经过2周清洗期后，进入坎地沙坦酯片8mg单药治疗期，对4周后血压未达标者（达标血压为〈140／90mmHg），以随机、双盲双模拟、平行对照、多中心试验方法，分别服复方坎地沙坦酯片（坎地沙坦酯16．0mg／氢氯噻嗪12．5mg）或坎地沙坦酯片16mg单药治疗8周。结果经过2周清洗期，共有392例进入单药治疗期，坎地沙坦酯8mg单药治疗（n=353）2周后，血压下降值（10．2±0．6）／（6．5±5．7）mmHg；4周的下降值为（10．8±10．9）／（6．6±6．1）mmHg，4周血压达标率为15．3％（54／353例），组内比较，差异有非常显著意义（P〈0．01）。在以后8周随机双盲对照期，复方坎地沙坦酯组（134例）与坎地沙坦酯单药组（142例）4周时的血压分别下降为（9．3±11．7）／（8．7±6．2）和（5．4±10．8）／（5．4±6．1）mmHg；8周时为（11．1±11．2）／（10．7±6．6）和（7．8±11．1）／（7．8±6．3）mmHg（组内及组间比较P〈O．01）。随机期4周时联合治疗组血压达标率分别为64．9％（87／134），单药组为39．4％（56／142），8周时分别为79．9％（107／134）和51．4％（73／142）（组间比较P〈0．01）。不良反应事件，在单药治疗期为6．2％（22／353），复方坎地沙坦组为2．9％（4／134），坎地沙坦酯组2．8％（4／142），组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论复方坎地沙坦酯片较之单用坎地沙坦对原发性高血压患者有较好的降压效果和耐受性。     

高碳酸血症对急性肺损伤保护作用及机制探讨的实验研究

目的探讨高碳酸血症对急性肺损伤模型的保护作用及可能的机制。方法24只新西兰兔按随机数字表法分为对照组、治疗组、预防组，每组8只。采用脂多糖静脉注射复制肺损伤模型，观察3组兔血流动力学、血气指标的变化；检测肺组织湿／干重（W／D）比、光镜、肺损伤组织学定量评价指标（IQA）来评估肺脏的损伤程度。通过对肺组织中髓过氧化物酶（MPO）、丙二醛（MDA）及血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）浓度及中性粒细胞凋亡率的测定，阐明高碳酸血症对肺损伤保护的可能机制。结果（1）治疗组、预防组在模型形成后平均动脉压、心率、动脉血二氧化碳分压（PaCO2）、动脉血氧分压／吸入气氧浓度（PaO2／FiO2）分别为（79±6）mm Hg（1mmHg=0．133kPa）、（180±10）次／min、（99±13）mmHg、250±26，（80±9）mmHg、（181±12）次／min、（95±11）mmHg、241±56，与对照组[（66±10）mmHg、（139±13）次／min、（31±4）mmHg、182±35]比较差异有统计学意义（t值分别为4．05、26．32、5．36、28．15、12．54、11．07、16．13、12．36。P均分别〈0．05、0．01）；（2）治疗组、预防组W／D、NPO、MDA分别为1．98±0．28、1．87±0．30、（6．1±1．6）U／g、（5．8±1．5）U／g、（20±5）mg／L、（19±4）mg／L，与对照组[2．43±0．26、（9．0±1．3）U／g、（36±8）mg／L]比较差异有统计学意义（t值分别为11．07、24．46、2．35、9．63，12．34、25．32，P分别〈0．05、0．01）；（3）治疗组、预防组血清和BALF中IL-8、TNF—α、中性粒细胞凋亡率分别为（50±8）ng／ml、（103±49）ng／ml、（94±16）ng／ml、（44±9）ng／ml、（38±9）％、（56±5）％、（49±7）ng／ml、（96±50）ng／ml、（91±14）ng／ml、（39±6）ng／ml、（39±10）％、（55±10）％，与对照组[（91±43）ng／ml、（177±60）ng／ml、（162±15）ng／ml、（67±7）ng／ml、（19±7）％、（43±7）％]比较差异有统计学意义（t值分别为7．12、5．55、7．30、3．93、13．08、8．00，P分别〈0．05、0．01）；（4）各组血清及BALF中IL-8、TNF—α与中性粒细胞凋亡率呈负相关（r值分别为-0．73、-0．72、-0．52、-0．64、-0．73、-0．56、-0．57、-0．78、-0．69、-0．75、-0．82、-0．84，P均〈0．05）。结论高碳酸血症对急性肺损伤具有保护作用，对血流动力学无明显影响。     

血缘与非血缘供者异基因造血干细胞移植治疗白血病的比较研究

目的探讨血缘供者（RD）与非血缘供者（URD）造血干细胞移植（HSCT）治疗白血病的差异。方法115例白血病患者接受HLA血清学全相合异基因造血干细胞移植。流式细胞仪测定移植后1年内不同时间点患者的T细胞与B细胞重建情况。结果接受骨髓移植的RD-HSCT和URD—HSCT组WBC〉1．0×10^9／L分别为移植后（13．1±2．4）d、（16．3±3．0）d;PLT〉20×10^9／L分别为移植后（14．9±6．6）d、（20．2±7．3）d,两组WBC和PLT重建时间差异均有统计学意义（P值分别为0．003、0．042）;接受外周造血干细胞移植患者RD-HSCT和URD．HSCT组WBC〉1．0×10^9／L分别为（12．5±2．9）d、（13．1±4．1）d（P=0．488）,PLT〉20×10^9／L分另Ⅱ为（12．2±4．2）d、（15．7±7．1）d（P=0．020）。移植后1、3、6、9、12个月CD;CD;,1个月CD45RA^＋CD4^＋,3个月CD;CD;重建两组差异均有统计学意义。两组Ⅱ～Ⅳ度急、慢性移植物抗宿主病（GVHD）的发生率分别为45．5％、52．3％;45．3％、63．2％;GVHD的病死率分别为6．1％、15．9％,差异均无统计学意义。两组移植后复发率分别为18．2％、11．4％（P=0．424）。两组移植后早期感染率分别为42．4％、47．7％（P=0．696）。3年总生存率分别为（67．8±6．9）％、（61．6±7．7）％（P=0．133）,无病生存率分别为（62．3±6．9）％、（56．8±7．9）％（P=0．177）。结论URD-HSCT治疗白血病具有和RD-HSCT近似的疗效。     

支气管哮喘患者诱导痰中血管内皮生长因子水平的变化及意义

选择哮喘患者63例（其中哮喘急性发作期组33例，哮喘缓解期组30例）及健康对照组22例。测定三组肺功能，对诱导痰进行炎症细胞分类计数，测定诱导痰上清液中血管内皮生长因子（VEGF）水平，并分析VEGF与嗜酸粒细胞、肺功能之间的相关性。结果哮喘急性发作期组诱导痰中嗜酸粒细胞数、VEGF水平为1．8（0．7-2．9）×10^9／L、（4．8±1．1）μg／L，哮喘缓解期组为0．8（0．3—1．3）×10^9／L、（2．1±40．6）μg/L，健康对照组为0．0（0．0—0．1）×10^9／L、（0．9±0．2）μg/L。三组诱导痰中嗜酸粒细胞数、VEGF水平比较差异有统计学意义（P均〈0．05）；哮喘患者诱导痰中VEGF水平与痰中嗜酸粒细胞数呈正相关（r=0．52，P〈0．01），与FEV。占预计值百分比、FEV1／FVC呈负相关（r=-0．41、-0．56，P均〈0．01）。认为哮喘患者肺组织中VEGF表达上调可能参与了哮喘发生、发展的过程。     

慢性间断性缺氧对小鼠肾组织结构、基质金属蛋白酶及其组织抑制因子表达的影响

目的 观察慢性间断性缺氧（chronic intermittent hypoxia，CIH）对小鼠肾脏结构，基质金属蛋白酶-1、9（matrixmetallo-proteinase-1、9，MMP-1、9）及其组织抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）表达变化的影响，探讨其在睡眠呼吸暂停综合征（sAs）肾损害中的作用。方法 将30只ICR小鼠随机分为4组，空气模拟对照组（10只）、CIH2周组（5只）、CIH4周组（5只）、CIH8周组（10只）。采用光镜下病理检查和免疫组织化学方法观察实验小鼠肾组织结构变化和MMP-1、MMP-9及TIMP-1在肾脏的表达。结果 ①CIH各组见肾小管上皮细胞肿胀、空泡、颗粒变性，随缺氧时间延长，变性范围扩大，主要表现为近曲小管的病理改变，其中8周组可见部分肾小管坏死。②MMP-1、MMP-9及TIMP-1主要表达于肾小管上皮细胞。③与对照组比较，CIH各组MMP-1表达均明显减少（P均d0．01），2周时降至最低，随后MMP-1表达略有回升；CIH组间两两比较差异无显著性（P〉0．05）。MMP-9在2周组的表达水平与对照组相比均显著升高（P〈0．01），而在4、8周两组则显著降低（P均d0．01）。CIH各组TIMP-1均呈高表达（P均〈0．01），其中高峰表达在2周缺氧组。CIH各组MMP-1／TIMP-1均显著降低（P均〈0．05），其中2周组达最低（P〈0．01），CIH各组间两两比较差异无显著性（P〉0．05）。MMP-9／TIMP-1随间断缺氧时间的延长呈下降趋势，CIH4周、8周两组均低于对照组（P〈0．05），最低表达在8周组（P〈0．01）。④随间断缺氧时间延长，TIMP-1与MMP-1之间存在负相关关系（r=-0．769，Pd0．01）；TIMP-1与MMP-9之间存在正相关关系（r=0．392，PdO．05）。结论 CIH可引起实验小鼠肾小管变性、坏死等病理变化；同时肾小管上皮细胞MMP-1、MMP-9、TIMP-1表达异常；MMP-1／TIMP-1与MMP-9／TIMP-1下降，这可能参与了SAS肾损害的发生发展过程。     

不同水平呼气末正压通气对肺内外源性急性呼吸窘迫综合征患者的影响

目的 观察不同水平呼气末正压（PEEP）通气对肺内、外源性急性呼吸窘迫综合征（ARDS）患者的影响。方法 以16例早期肺内源性ARDS（A组）和12例早期肺外源性ARDS（B组）患者为研究对象，调整PEEP水平，分别监测在PEEP通气前和PEEP为5、10、15cmH2O通气后30min时的氧合、呼吸力学和血流动力学的变化。结果 PEEP5cmH2O时与PEEP通气前比较，A、B两组患者的动脉血氧分压（PaO2）／吸入气氧浓度（FiO2）、气道峰压（Ppeak）、气道平台压（Pplat）、平均动脉压（MAP）以及B组患者的呼吸系统顺应性（Crs）差异均无统计学意义（P均〉0．05）；A组患者的Crs[PEEP5cmH2O时、PEEP通气前分别为（0．027±0．004）、（0．022±0．005）L／cmH2O]差异有统计学意义（P〈0．05）。PEEP10cmH2O时与PEEP通气前比较，A、B两组患者的PaO2／Fioz[PEEP10cmH2O时、PEEP通气前A组分别为（130．Off=30．6）、（81．6±26．7），B组分别为（137．3±28．9）、（73．6±30．8）]、Crs[PEEP10cmH2O时、PEEP通气前A组分别为（0．032±0．005）、（0．022±0．005）L／cmH2O，B组分别为（0．033±0．005）、（0．022±0．004）L／cmH2O]、MAP[PEEP10cmH2O时、PEEP通气前A组分别为（68．9±8．4）、（79．3±9．2）mEHg，B组分别为（69．0±6．2）、（77．5±8．7）mEHg]以及A组患者的Ppeak[PEEP10cmH2O时、PEEP通气前分别为（33．0±6．O）、（25．0±5．8）mEHg]和PplatFPEEP10cmH20时、PEEP通气前分别为（30．5±5．6）、（22．1±4．8）mEHg]差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01），其中B组患者PaO2／FiO2升高幅度、Crs增大幅度均较A组患者更显著（P均G0．05）。PEEP15cmHzO时与PEEP通气前比较，A、B两组患者的PaO2／FiO2[EEP15cmH2O时、PEEP通气前A组分别为（139．8±34．8）、（81．6±26．7），B组分别为（178．7±35．4）、（73．6±30．8）]、Crs[PEEP15cmH2O时、PEEP通气前A组分别为（0．030±0．005）、（0．022±0．005）L／cmH20，B组分别为（0．036±0．007）、（0．022±0．004）L／cmH201、MAP[PEEP15cmH2O时、PEEP通气前A组分别为（66．9±9．1）、（79．3±9．2）mEHg，B组分别为（66．3±5．2）、（77．5±8．7）mEHg]、Ppeak[PEEP15cmH2O时、PEEP通气前A组分别为（40．3±6．7）、（25．0±5．8）cmH2O，B组分别为（35．7±8．5）、（22．2±7．8）cmH2O]和Pplat[PEEP15cmH2O时、PEEP通气前A组分别为（36．9±5．6）、（22．1±4．8）cmH2O，B组分别为（29．2±6．8）、（18．7±5．6）cmH2O]差异均有统计学意义（P均〈0．01），其中B组患者PaO2／FiO2升高幅度、Crs增大幅度均较A组患者更显著（P均〈0．01），A组患者Pplat增高幅度较B组患者更显著（P〈0．01）。A、B两组患者MAP下降幅度比较差异无统计学意义（P〉0．05）。机械通气24h后A组2例出现轻度纵隔气肿。结论 PEEP通气能改善部分ARDS患者的氧合和呼吸系统顺应性，而且对肺外源性ARDS患者的改善可能要优于肺内源性ARDS患者。但高PEEP可能使Ppeak和Pplat显著增高，而且肺内源性ARDS患者Pplat的增高幅度可能要更显著于肺外源性ARDS患者。     

甘舒霖强化治疗初诊2型糖尿病37例研究

75例初诊T2DM患者，按单、双日随机分为两组，对照组瑞格列奈1～3mg及二甲双胍0．25～0．5，每日各三次口服；强化组给予甘舒霖R（三餐前30分钟），甘舒霖N（睡前）皮下注射。4周后观察治疗前后空腹血糖（FBG）、餐后2小时血糖（2HBG）、糖化血红蛋白A1c（HbA1c）、胰岛β细胞功能指数（HOMA—β）、胰岛素抵抗指数（HOMA—IR）、血糖达标时间等。结果：两组病人治疗后，上述指标均有明显下降，强化组下降更明显分别为（15．8±3．2）mmol／Lvs（5．9±0．5）mmol／L，（20．2±3．8）mmol／L（7．5±0．5）mmool／L，（10．4±1．36）％vs（6．96±0．74）％。均P〈0．01，（3．49±0．82）vs（5．32±2．20），（2．20±0．81）vs（1．02±0．41），均P〈0．05。结论：甘舒霖强化治疗初诊T2DM，能明显增强胰岛β细胞的功能，减轻胰岛素抵抗，使患者血糖良好控制。     

一氧化氮对哮喘大鼠基质金属蛋白酶的表达调控

目的　观察一氧化氮 (NO)对哮喘大鼠基质金属蛋白酶 (MMP)及金属蛋白酶组织抑制物表达的影响 ,探讨其在哮喘气道结构重建中的作用。方法　 30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、哮喘组和左旋精氨酸组 (L Arg组 ) ,每组 1 0只。肺组织作病理切片并HE染色 ,通过病理图像分析系统测定支气管基底膜周径 (Pbm)、总管壁面积 (WAt)、内壁面积 (WAi) ,平滑肌面积 (WAm)等形态学参数。用NO与一氧化氮合酶 (NOS)试剂盒测定肺组织中亚硝酸盐 /硝酸盐 (NO- 2 /NO- 3)水平与NOS活性。半定量逆转录聚合酶链反应技术 (RT PCR)分析肺组织中MMP 2与TIMP 1mRNA的表达。结果(1 )WAt/Pbm、WAi/Pbm及WAm/Pbm哮喘组 [分别为 (2 5 3± 2 1 ) μm2 / μm、(2 0 4± 2 3) μm2 / μm、(4 2±2 0 ) μm2 / μm]和L Arg组 [分别为 (35 1± 2 6) μm2 / μm、(2 5 3± 2 0 ) μm2 / μm、(8 7± 1 5) μm2 / μm]与对照组 [分别为 (2 0 8± 1 3) μm2 / μm、(1 5 3± 2 1 ) μm2 / μm、(3 1± 1 1 ) μm2 / μm]比较 ,差异有显著性(P <0 0 1 ) ;L Arg组与哮喘组比较差异亦有显著性 (P <0 0 5)。 (2 )肺组织中NO- 2 /NO- 3水平哮喘组[(7 2± 2 1 )nmol/mg]和L Arg组 [(1 1 8± 1 7)nmol/mg]与对照组 [(3 1± 1 2 )n     

环孢素A对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾脏基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的 观察免疫抑制剂环孢素A(CsA)对糖尿病大鼠肾脏基质金属蛋白酶(MMP)表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠74只,平均体重250 g,采用数字表法随机分为正常对照组(n=10)、单纯糖尿病组(n=8)、胰岛素治疗组(n=9)、造模前低剂量CsA治疗组(n=9;造模前1周皮下注射1μg·g-1·d-1 CsA)、造模前中剂量CsA治疗组(n=8;造模前1周皮下注射4μg·g-1·d-1CsA)、造模前高剂量CsA治疗组(n=8;造模前1周皮下注射8μg·g-1·d-1CsA)、造模后低剂量CsA治疗组(n=8;造模后1周皮下注射1μg·g-1·d-1CsA)、造模后中剂量CsA治疗组(n=7;造模后1周皮下注射4μg·g-1·d-1 CsA)和造模后高剂量CsA治疗组(n=7;造模后1周皮下注射8μg·g-1·d-1 CsA).8周后处死动物,采用免疫组织化学法、逆转录-聚合酶链反应和Western blot检测肾脏MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平.采用单因素方差分析和直线相关分析进行统计学分析.结果 8周时,单纯糖尿病组24 h尿微量蛋白显著高于正常对照组[分别为(5.80±3.23)、(1.24±0.21)mg/24 h,F=4.229,P＜0.01];各CsA治疗组24 h尿微量蛋白不同程度降低,与正常对照组比较差异无统计学意义.单纯糖尿病组肾小管上皮细胞和肾小球系膜基质MMP-2、MMP-9mRNA(分别为2.22±0.08、2.55±1.10)和蛋白表达(分别为3.1±1.5、2.8±1.0)显著高于正常对照组(MMP-2 mRNA:0.70±0.26,F=6.031;MMP-9 mRNA:0.37±0.24,F=5.193;MMP-2蛋白:1.0±0.0,F=7.532;MMP-9蛋白:1.0±0.0,F=6.100;均P＜0.01).胰岛素治疗对其表达无影响,但CsA干预可下调MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白的异常表达.MMP-2 mRNA与蛋白表达呈显著正相关(r=0.618,P＜0.01),而MMP-9 mRNA与蛋白表达未见相关性(r=0.420,P＞0.05).结论 CsA可减少糖尿病大鼠肾脏MMP-2和MMP-9基因转录和蛋白表达,改善细胞外基质代谢紊乱,可能具有延缓糖尿病肾病发生的作用.     

The antidepressant-like effect of the melatonin receptor ligand luzindole in mice during forced swimming requires expression of MT2 but not MT1 melatonin receptors

We previously reported an antidepressant-like effect in C3H/HeN mice during the forced swimming test (FST) following treatment with the MT1/MT2 melatonin receptor ligand, luzindole. This study investigated the role melatonin receptors (MT1 and/or MT2) may play in the effect of luzindole in the FST using C3H/HeN mice with a genetic deletion of either MT1 (MT1KO) or MT2 (MT2KO) melatonin receptors. In the light phase (ZT 9-11), luzindole (30 mg/kg, i.p.) significantly decreased immobility during swimming in both wild type (WT) (135.6 +/- 25.3 s, n = 7) and MT(1)KO (132.6 +/- 13.3 s, n = 8) as compared with vehicle-treated mice (WT: 207.1 +/- 6.0 s, n = 7; MT1KO: 209.5 +/- 6.2 s, n = 8) (P < 0.001). In the dark phase (ZT 20-22), luzindole also decreased time of immobility in both WT (89.5 +/- 13.9 s, n = 8) and MT1KO (66.5 +/- 6.4 s, n = 8) mice as compared with the vehicle treated (WT: 193.8 +/- 3.5, n = 6; MT1KO: 176.6 +/- 6.2 s, n = 8) (P < 0.001). Genetic disruption of the MT1 gene did not alter the diurnal rhythm of serum melatonin in MT1KO mice (ZT 9-11: 1.3 +/- 0.6 pg/mL, n = 7; ZT 20-22: 10.3 +/- 1.1 pg/mL, n = 8) as compared with WT (ZT 9-11: 1.4 +/- 0.7 pg/mL; ZT 20-22: 10.6 pg/mL). Swimming did not alter the serum melatonin diurnal rhythm in WT and MT1KO mice. Decreases in immobility of WT and MT1KO mice by luzindole treatment were not affected by gender or age (3 months versus 8 months). In contrast, luzindole did not decrease immobility during the FST in MT2KO mice. We conclude that the antidepressant-like effect of luzindole may be mediated through blockade of MT2 rather than MT1 melatonin receptors.     

大鼠哮喘模型Clara细胞及其分泌蛋白的表达

目的　观察大鼠哮喘模型Clara细胞及其分泌蛋白 (CCSP)的表达。方法　SD大鼠 2 4只 ,分为哮喘模型组和健康对照组。哮喘模型组大鼠用卵白蛋白 (OVA)致敏激发建立大鼠哮喘模型。用逆转录 聚合酶链反应、斑点免疫印迹、免疫组化及图像分析方法检测 2组大鼠肺组织CCSPmRNA表达、支气管肺泡灌洗液(BALF)中CCSP蛋白水平、细小支气管Clara细胞比率及气道形态学参数。结果　哮喘模型组大鼠OVA激发2周的支气管总管壁面积、内壁面积及平滑肌面积均较健康对照组和哮喘模型组OVA激发 1周时的增加 (P <0 0 1) ,并与CCSP及其mRNA呈负相关 (r分别为 - 0 5 9、- 0 72、- 0 6 5、- 0 6 3、- 0 78及 - 0 73,P <0 0 1)。哮喘模型组大鼠细支气管、终末细支气管及呼吸性细支气管Clara细胞数量减少 (P <0 0 1或 0 0 5 )。哮喘模型组大鼠肺组织CCSPmRNA表达较健康对照组降低 ,BALF中CCSP蛋白含量降低。结论　CCSPmRNA表达降低 ,Clara细胞数量减少。     

Effects of hypoxia, hyperoxia on the regulation of expression and activity of matrix metalloproteinase-2 in hepatic stellate cells

AIM To study the effects of hypoxia,hyperoxia on theregulation of expression and activity of matrixmetalloproteinase-2 (MMP-2) in hepatic stellate cells(HSC).METHODS The expressions of MMP-2,tissue inhibitor ofmatrix metalloproteinass-2 (TIMP-2) and membrane typematrix matalloproteinass-1 (MT1-MMP) in cultured rat HSCwere detected by immunocytochemistry (ICC) and in situhybridization (ISH).The contents of MMP-2 and TIMP-2 inculture supernatant were detected with ELISA and theactivity of MMP-2 in supernatant was revealed byzymography.RESULTS In the situation of hypoxia for 12h,theexpression of MMP-2 protein was enhanced (hypoxiagroup positive indexes:5.7±2.0,n=10;control:3.2±1.0,n=7;P<0.05),while TIMP-2 protein was decreasedin HSC (hypoxla group positive indexes:2.5±0.7,n=10;control:3.6±1.0,n=7;P<0.05),and the activity(total A) of MMP-2 in suparnatant declined obviously(hypoxla group:7.334±1.922,n=9;control:17.277±7.424,n=11;P<0.01).Compared the varied duration ofhypoxia,the changes of expressions Including mRNA andprotein level as well as activity of MMP-2 were mostnotable in 6 h group.The highest value (Ahypoxla~-Acontrol) ofthe protein and the most intense signal of mRNA were inthe period of hypoxia for 6 h,along with the lowestactivity of MMP-2.In the situation of hyparoxia for 12 h,the contents (A_(450)) of MMP-2 and TIMP-2 in supernatantwere both higher than those in the control,especially theTIMP-2 (hyperoxla group:0.0499±0.0144,n=16;control:0.0219±0.0098,n=14;P<0.01),and so wasthe activity of MMP-2 (hyperoxia group:5.252±0.771,n=14;control:4.304±1.083,n=12;P<0.05),and the expression of MT1-MMP was increased.CONCLUSION HSC is sensitive to the oxygen,hypoxiaenhances the expression of MMP-2 and the effect is moremarked at the early stage;hyperoxia mainly raises theactivity of MMP-2.     

Extracellular matrix structure after heart transplantation

Following heart transplantation remodeling of the donor heart causes changes in the extracellular myocardial matrix. We investigated 20 right ventricular endomyocardial biopsies taken 17+/-4 days (group I, n=9) and 63+/-13 days (group II, n=11) after heart transplantation from 16 patients transplanted for end-stage cardiomyopathy (15 dilated/1 ischemic). Immunohistochemical staining for collagen I, collagen III, collagen IV, and fibronectin was used. Evaluation was performed at a magnification of 400x using a computer-assisted image analyzing system measuring the relative area stained by the immunoperoxidase method, the number of cells in the given area, and the total area. Collagen I per cell was 13.9+/-5.9 microm2 in group I and increased significantly 66+/-13 days after heart transplantation in the perimysium around the myocardial cells as well as in the endocardium to 49.9+/-15.1 microm2 (P<0.05). No quantitative change in collagen III was noted (75.7+/-12.4 versus 75.5+/-16.0 microm2 n.s.). Collagen IV was found in the perimysial, in the capillary bed and in the vascular network. Significant quantitative change in the amount of collagen IV was not found (64.1+/-12.6 versus 61.0+/-8.9 microm2). Fibronectin was found in the entire perimysial extracellular matrix and in the endocardium in relationship with collagen I and III. An increased amount of fibronectin from 87.09+/-9.9 microm2 (group I) to 140.8+/-17.9 microm2 (group II, P<0.05) was found. The cell area and cell diameters were not significantly different (group I; cell area 772+/-227 microm2, diameter 31.3 microm; group II; cell area 776+/-224 microm2, diameter 31.4 microm). It is concluded that remodeling of the donor heart after transplantation is characterized by a specific increase in collagen I and fibronectin, whereas a change in other collagen subtypes was not observed.     

基质金属蛋白酶及抑制剂在心肌梗死后心室重构中的作用

目的　研究大鼠心肌梗死后外源性基质金属蛋白酶抑制剂 (多西环素 ,Doxycycline)在心室重构中的作用。方法　 70只SD大鼠随机分为对照组 (10只 )、手术对照组 (9只 )、心肌梗死后 1天组 (10只 )、心肌梗死后 1周组 (10只 )、心肌梗死后 2周组 (8只 )、心肌梗死后 4周组 (7只 )、治疗 2周组 (8只 )和治疗 4周组 (8只 ) ,采用免疫组织化学、酶谱法、免疫印迹 (WesternBlotting)、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和AcusonSequoia 5 12超声心动图仪分别测定胶原含量 ,Ⅰ Ⅲ胶原比例、基质金属蛋白酶 2 ,9(MMP 2 ,9)蛋白和mRNA的变化规律及心功能。结果　多西环素治疗后 ,胶原含量明显减少 ,Ⅰ Ⅲ胶原比例下降得以改善 (P <0 .0 5 ) ,MMP 2 ,9蛋白和mRNA在心肌梗死后活性减少 ,基质金属蛋白酶组织抑制剂 1蛋白含量和mRNA转录无明显变化 ,治疗组心功能在术后 4周得以改善。结论　多西环素治疗后MMP 2 ,9的mRNA转录减少 ,MMP 2 ,9活性降低 ,胶原含量减少 ,Ⅰ Ⅲ胶原比例恢复 ,这些影响可能是其改善心肌梗死后心室重构的机制之一。     

慢性阻塞性肺疾病患者环氧合酶2和基质金属蛋白酶2的表达及其与气流阻塞的关系

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者诱导痰中环氧合酶2(COX-2)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达及其与气流阻塞的关系。方法COPD组55例(COPD稳定期患者,其中0级12例、Ⅰ级10例、ⅡA级12例、ⅡB级11例和Ⅲ级10例)和正常对照组10名行痰诱导,对痰悬液进行细胞分类计数,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测诱导痰上清液中前列腺素E2(PGE2)和MMP2浓度,Westernblot法测定诱导痰细胞中COX-2蛋白表达。结果(1)COPD组诱导痰中细胞总数、肺泡巨噬细胞(AM)数和中性粒细胞(Neu)数较正常对照组显著增高(P<0.05或P<0.01)。AM、Neu与第一秒用力呼气容积占预计值%(FEV1占预计值%)、一秒率(FEV1/FVC)分别呈负相关(r=-0.280、P<0.05,r=-0.345、P<0.01;r=-0.677,r=-0.773,P均<0.01)。(2)Westernblot显示COPD组患者诱导痰细胞中COX-2蛋白表达(57±8)显著高于正常对照组(83±10,P<0.05)。(3)COPD各组诱导痰PGE2浓度[分别为(111±17)、(117±23)、(118±29)、(153±24)、(194±28)ng/L]显著高于正常对照组[(81±18)ng/L,P均<0.01],且与FEV1占预计值%、FEV-1/FVC呈负相关(r=-0.748,r=-0.750,P均<0.01),与MMP-2浓度呈正相关(r=0.775,P<0.01)。COPD各组诱导痰MMP2浓度[(4.0±0.9)、(4.5±1.5)、(7.7±3.1)、(11.9±3.5)、(18.5±5.     

沉默结缔组织生长因子对大鼠肝纤维化及细胞外基质积聚的影响

目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)小干扰RNA(siRNA)在CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型中的抗肝纤维化作用及其对细胞外基质积聚的影响.方法 雄性SD大鼠30只,随机分成5组.模型组:皮下注射CCl4及经门静脉注射等渗盐水,3 d 1次,连续6周;预防组:皮下注射CCl4及经门静脉注射CTGF siRNA,连续6周;治疗组:皮下注射CCl4 2周,随后给予CTGF siRNA及CCl4 4周;对照siRNA干预组:皮下注射CCl4及经门静脉注射对照siRNA,连续6周;空白对照组:经门静脉注射等渗盐水6周.用HE和Sirius red染色评估大鼠肝组织学变化,RTPCR或(和)Western blot检测肝组织CTGF、Ⅰ与Ⅲ型胶原及层黏连蛋白的表达,放射免疫法检测外周血Ⅲ型前胶原及透明质酸含量.结果 模型组及对照siRNA组大鼠肝组织CTGF、Ⅰ与Ⅲ型胶原及层黏连蛋白基因表达显著上调;与模型组相比,预防组及治疗组由CCl4诱导的CTGF mRNA和蛋白表达及Ⅰ与Ⅲ型胶原、层黏连蛋白mRNA表达分别下调76%±8%、95%±2%、74%±8%、78%±8%、31%±7%和80%±3%、93%±3%、57%±6%、59%±10%、43%±9%(F值分别为68.630,21.234,24.219,16.315和9.716,P值均＜0.01),肝纤维化程度明显减轻,大鼠外周血Ⅲ型前胶原和透明质酸含量也显著降低.结论 经门静脉注射CTGF siRNA能显著抑制实验大鼠肝CTGF基因表达,由此通过阻止细胞外基质积聚而缓解肝纤维化.     

缬沙坦涂层支架对支架术后再狭窄中胶原沉积的影响

目的评价缬沙坦涂层支架对支架置入后新生内膜中胶原沉积的影响及其预防支架内再狭窄的可行性。方法18只新西兰大白兔分为裸支架组,载体涂层支架组,缬沙坦涂层支架组3组。采用多层涂布技术制备缬沙坦涂层支架和载体涂层支架。分别将裸支架、载体涂层支架及缬沙坦涂层支架置入兔腹主动脉。术前、术后及支架置入3个月后分别行定量腹主动脉造影(QCA)测量血管直径。3个月后处死实验兔,分别测定3组支架血管段的管腔面积,内外弹力膜围绕面积,新生内膜面积及最大内膜厚度并做比较。将支架血管段进行MASSON染色,观察胶原沉积情况,天狼星红-苦味酸染色进一步观察胶原的类型。结果裸支架组(n=8),载体涂层支架组(n=8),缬沙坦涂层支架组(n=10),QCA测量的术前、术后及3个月后腹主动脉直径相似。缬沙坦组管腔面积最大,新生内膜面积最小,裸支架组、载体涂层支架组、缬沙坦涂层支架组平均管腔面积分别为(4345548±125822)μm2,(4302061±167952)μm2,(5016269±207934)μm2,平均新生内膜面积分别为(1119635±163503)μm2,(1135636±136555)μm2,(441577±74099)μm2,平均最大内膜厚度分别为(240±30)μm,(192±21)μm,(116±12)μm。MASSON染色可见新生内膜中主要是胶原沉积,天狼星红-苦味酸染色发现胶原沉积主要为Ⅲ型胶原,间或有Ⅰ型胶原。结论缬沙坦涂层支架主要是通过抑制胶原沉积抑制支架置入后血管内膜增生发挥其防治支架内再狭窄作用的。