阿格列汀通过miR-497-5p/GPLD1信号通路抑制高糖诱导的心肌成纤维细胞纤维化的研究

目的 探究阿格列汀对高糖诱导的小鼠心肌成纤维细胞（mouse cardiac fibroblasts,MCFs）纤维化的影响及其作用机制。 方法 使用5.50、25.00 mmol/L葡萄糖处理MCFs细胞,设为低糖组和高塘组。阿格列汀（0.05、0.10、0.20 μmol/L）治疗高糖诱导的MCFs细胞6 h,筛选最适浓度0.10 μmol/L。使用脂质体法将mimics-NC组（转染mimics-NC）、miR-497-5p组（转染miR-497-5p）、anti-NC组（转染anti-NC）、anti-miR-497-5p组（转染anti-miR-497-5p）、si-NC组（转染si-NC）、si-糖基磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D（glycosylphosphatidylinositol specific phospholipase D,GPLD1）组（转染si-GPLD1）、阿格列汀+mimics-NC组（转染mimics-NC）、阿格列汀+miR-497-5p组（转染miR-497-5p）、阿格列汀+miR-497-5p+pcDNA组（共转染miR-497-5p和pcDNA）、阿格列汀+miR-497-5p+pcDNA-GPLD1组（共转染miR-497-5p和pcDNA-GPLD1）转染至MCFs细胞,并用25.00 mmol/L葡萄糖或0.10 μmol/L的阿格列汀处理。蛋白免疫印迹（Western blotting,WB）实验、实时荧光定量聚合酶链式反应（real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测各组细胞中α-平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle actin,α-SMA）、胶原Ⅰ（collagenⅠ,ColⅠ）、ColⅢ的蛋白表达及 miR-497-5p、GPLD1的表达。双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。 结果 与NG组相比,HG组MCFs细胞中α-SMA、ColⅠ、ColⅢ的蛋白表达显著升高,miR-497-5p显著降低（P＜0.05）,而阿格列汀（0.10、0.20 μmol/L）呈浓度依赖性显著抑制高糖诱导的MCFs细胞中α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白升高和miR-497-5p的降低。过表达miR-497-5p后,高糖诱导的MCFs细胞中α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白表达均明显降低,并且miR-497-5p抑制野生型GPLD1细胞的荧光活性,负向调控GPLD1蛋白表达。敲减GPLD1具有与过表达miR-497-5p相似的抑制高糖诱导MCFs细胞α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白表达的作用。过表达GPLD1则能够显著削弱阿格列汀和过表达miR-497-5p对高糖诱导MCFs细胞α-SMA、ColⅠ、ColⅢ表达的抑制作用。 结论 阿格列汀可抑制高糖诱导的心肌成纤维细胞的纤维化,其机制与调控功能miR-497-5p/GPLD1信号通路有关。     

miR-205促进hAS Cs细胞系向软骨细胞方向分化的作用及机制研究

目的 探讨微小RNA(miR)-205通过调控核心结合因子α-1(Cbfα-1)表达促进人脂肪干细胞(hASCs)细胞系向软骨细胞方向分化的作用及机制.方法 慢病毒转染法将Lenti-miR-205、Lenti-control慢病毒液分别转染至hASCs细胞,命名为miR-205过表达组、miR-NC组,另取未处理细胞为对照组;RT-qPCR法检测转染后miR-205基因表达量,MTT比色法检测细胞增殖;用甲苯胺蓝染色、免疫细胞染色及免疫荧光染色观察转染后第3代hASCs细胞诱导分化情况,RT-qPCR、Western blot法检测诱导分化2周后各组Cbfα-1、Smad3、TGF-β1、ColⅡmRNA和蛋白表达.结果 转染后miR-205过表达组miR-205基因相对表达量高于miR-NC组和对照组(P<0.001).miR-205过表达组转染后hASCs细胞培养3、7 d MTT试验吸光度(A)值高于对照组和miR-NC组(P<0.05).诱导分化2周后,甲苯胺蓝染色显示,miR-205过表达组细胞染色呈强阳性深蓝染色,对照组和miR-NC组为微弱浅蓝色;免疫细胞化学染色显示,miR-205过表达组细胞及胞外基质强阳性棕黄染色,对照组和miR-NC组为弱阳性淡黄染色;免疫荧光染色显示,miR-205过表达组红色荧光强度较强,对照组和miR-NC组红色荧光强度较暗淡.miR-205过表达组诱导分化后Cbfα-1 mRNA和蛋白相对表达量低于对照组和miR-NC组,Smad3、TGF-β1、ColⅡmRNA和蛋白相对表达量高于对照组和miR-NC组(P<0.05).结论 miR-205过表达可促进hASCs细胞增殖、促进细胞向软骨细胞方向分化,可能通过抑制Cbfα-1、激活TGF-β1/Smad3信号通路发挥调控作用.     

miR-614过表达抑制肺腺癌A549细胞增殖、侵袭及裸鼠移植瘤生长

目的:探讨miR-614过表达对肺腺癌A549细胞增殖、侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响.方法:将培养至对数生长期的人A549细胞分为对照组、miR-NC组(脂质体转染miR-NC mimic)和miR-614组(脂质体转染miR-614 mimic).RT-qPCR检测每组A549细胞中miR-614的表达,CCK-8法检测每组A549细胞增殖活性;Transwell法检测检测每组A549细胞侵袭细胞数,Western Blot法检测每组A549细胞血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)和Ki-67蛋白的相对表达量.皮下种植0.2 mL各组A549细胞悬液(5 ×106/mL),构建裸鼠移植瘤的模型,每周测量1次移植瘤组织的体积,造模5周后进行移植瘤组织称重.结果:miR-614组A549细胞增殖活性和侵袭细胞数低于miR-NC组(P＜0.05),细胞VEGF、MMP-2和Ki-67蛋白表达低于miR-NC组(P＜0.05),TIMP-2蛋白表达高于miR-NC组(P＜0.05);miR-614组裸鼠移植瘤质量低于miR-NC组,且造模3周、4周和5周后,移植瘤体积低于miR-NC组(P＜0.05).结论:miR-614过表达可抑制A549细胞的增殖和侵袭,进而抑制肿瘤生长.     

miR-497-5p靶向VEGFA抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移和上皮间质转化的实验研究

目的探讨miR-497-5p对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移和上皮间质转化（EMT）的影响及其机制。方法将体外培养的Ishikawa细胞分为miR-NC组、miR-497-5p组、pLV-VEGFA组和miR-497-5p+VEGFA组,采用Real time PCR检测miR-497-5p和血管内皮生长因子A（VEGFA）mRNA的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-497-5p和VEGFA的靶向关系,Western blot检测VEGFA蛋白和EMT相关蛋白神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达,Transwell小室实验检测Ishikawa细胞的侵袭和迁移。结果转染miR-497-5p mimics可升高Ishikawa细胞中miR-497-5p表达,降低VEGFA mRNA表达（P<0.05）,VEGFA是miR-497-5p的靶基因。与miR-NC组比较,miR-497-5p组细胞中VEGFA、Vimentin和E-cadherin蛋白的表达水平、侵袭细胞数和迁移细胞数均明显降低,而N-cadherin蛋白表达升高（P<0.05）;与pLV-VEGFA组比较,miR-497-5p+VEGFA组细胞中VEGFA、Vimentin和E-cadherin蛋白的表达水平以及侵袭、迁移细胞数量均明显降低,而N-cadherin蛋白表达明显升高（P<0.05）。结论 miR-497-5p可靶向VEGFA抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的侵袭、迁移和上皮间质转化。     

miR-574-3p在三阴性乳腺癌细胞紫杉醇药物敏感性中的作用

目的 研究miR-574-3p在三阴性乳腺癌细胞紫杉醇（PTX）药物敏感性中的作用。方法 构建稳定转染细胞株,根据细胞转染情况分为未转染组、miR-阴性对照（miR-NC）组和miR-574-3p过表达组,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测不同浓度紫杉醇作用下细胞增殖情况（未转染组设置亚组：空白组和对照组）,实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）法检测色素框同源物2(CBX2) mRNA的表达水平,Western blot法检测CBX2蛋白的表达水平,Transwell检测细胞侵袭迁移力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果 CCK-8法检测结果显示,紫杉醇对各组三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长抑制呈一定的浓度依赖性,但不同浓度紫杉醇（0.05、0.15、0.45、1.35、4.05、8.10μmol/L）作用下,miR-574-3p过表达组生长抑制作用均高于对照组与miR-NC组（P<0.05）;实时荧光定量PCR结果显示,2.10μmol/L紫杉醇作用下,miR-574-3p过表达组细胞中CBX2 mRNA表达水平低于未转染组和miR-NC组（P<0.05）;Wes...     

miR-27a-3p调控XIAP表达对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-27a-3p对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的T-ALL Jurkat细胞分为未转染组(未处理)、miR-NC组(转染阴性对照miR-NC)和miR-27a-3p组(转染miR-27a-3p模拟物),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-27a-3p表达水平,噻唑蓝(M T T)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和X染色体连锁的凋亡抑制基因(XIAP)蛋白表达水平,比色法检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性,双荧光素酶报告基因(DLR)实验检测miR-27a-3p和XIAP的靶向关系.结果 与未转染组或miR-NC组比较,miR-27a-3p组细胞中miR-27a-3p表达水平、细胞凋亡率、细胞中Bax表达水平和caspase-3活性均明显升高,而细胞增殖活力和细胞中Bcl-2、XIA P蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);miR-NC组和未转染组上述各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05).DLR实验证实miR-27a-3p可与XIAP靶向结合.结论 miR-27a-3p可抑制T-ALL Jurkat细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控XIA P表达有关.     

miR-105-5p调控CDC5L表达对胶质瘤细胞增殖迁移的影响

目的:分析微小RNA-105-5p(miR-105-5p)通过调控细胞分裂周期蛋白5样蛋白抗体(CDC5L)对胶质瘤细胞增殖、迁移的影响。方法:收集本院35例经手术治疗的人脑胶质瘤组织及因脑外伤行减压术的正常脑组织样本。取对数生长期U251细胞,分为对照(control)组、转染miR-105-5p阴性对照(miR-NC)组、转染miR-105-5p模拟物(miR-105-5p mimics)组、转染沉默CDC5L阴性对照(si-NC)组、转染沉默CDC5L(si-CDC5L)组、共转染miR-105-5p mimics及pcDNA(pcDNA)组以及共转染miR-105-5p mimics及pcDNA-CDC5L(miR-105-5p mimics+pcDNA-CDC5L)组。qRT-PCR检测胶质瘤组织、正常脑组织及各组U251细胞中miR-105-5p及CDC5L mRNA的表达情况;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移;Western blot法检测CDC5L、细胞周期蛋白(CyclinDl)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9及细胞周期蛋白依赖性激...     

miR-27a-3p调控XIAP表达对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-27a-3p对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的T-ALL Jurkat细胞分为未转染组(未处理)、miR-NC组(转染阴性对照miR-NC)和miR-27a-3p组(转染miR-27a-3p模拟物),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-27a-3p表达水平,噻唑蓝(M T T)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和X染色体连锁的凋亡抑制基因(XIAP)蛋白表达水平,比色法检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性,双荧光素酶报告基因(DLR)实验检测miR-27a-3p和XIAP的靶向关系.结果 与未转染组或miR-NC组比较,miR-27a-3p组细胞中miR-27a-3p表达水平、细胞凋亡率、细胞中Bax表达水平和caspase-3活性均明显升高,而细胞增殖活力和细胞中Bcl-2、XIA P蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);miR-NC组和未转染组上述各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05).DLR实验证实miR-27a-3p可与XIAP靶向结合.结论 miR-27a-3p可抑制T-ALL Jurkat细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控XIA P表达有关.     

circ0006152/miR-557/Wnt3a信号轴在非小细胞肺癌A549细胞发生发展中的机制

目的 环状RNA(circRNA)与非小细胞肺癌发生发展有关,本研究旨在探讨circ0006152/miR-557/Wnt3a信号轴在非小细胞肺癌A549细胞发生发展中的机制。方法 取对数生长期A549细胞进行分组和转染,采用随机数字法分为对照组(常规培育)、si-NC组(转染si-NC)、si-circ0006152组(转染si-circ0006152)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-557 mimics组(转染miR-557 mimics)和si-circ0006152+miR-557 inhibitors组(转染miR-557 inhibitors的同时进行si-circ0006152转染),检测A549细胞增殖抑制率、凋亡、侵袭和Wnt3a、β-catenin蛋白表达。结果 与si-NC组比较,si-circ0006152组的A549细胞增殖抑制率和凋亡率明显升高,侵袭数量显著降低(P<0.001);与miR-NC组比较,miR-557 mimics组的A549细胞增殖抑制率[(48.42±5.73)%vs.(4.27±0.19)%]、凋亡率[(45.38±...     

MicroRNA-155/Nrf2对体外培养雪旺细胞增殖和迁移的影响及作用机制

目的 探讨microRNA-155(miR-155)/Nrf2对雪旺细胞增殖和迁移的影响及作用机制，为坐骨神经慢性卡压损伤等临床诊断和治疗策略提供科学依据。方法 将大鼠雪旺细胞（RSC96）作为研究对象，转染miR-155 mimics、miR-155 inhibitor、si-Nrf2及其阴性对照质粒（miR-NC、inhibitor NC、si-NC）。为验证miR-155过表达/抑制质粒转染效果，探究miR-155对雪旺细胞增殖、迁移的影响，将细胞分为inhibitor NC组（细胞转染inhibitor NC质粒）、miR-155 inhibitor组（细胞转染miR-155 inhibitor质粒）、miR-NC组（细胞转染miR-NC质粒）、miR-155 mimics组（细胞转染miR-155 mimics质粒）。为了验证Nrf2沉默效果，将细胞分为si-NC组（细胞转染si-NC质粒）、si-Nrf2(1)组[细胞转染si-Nrf2(1)质粒]、si-Nrf2(2)组[细胞转染si-Nrf2(2)质粒]。为证实靶向Nrf2可实现miR-155对细胞增殖、迁移的影响和Nr...     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。