低氧环境下Notch信号通路对人牙髓干细胞成牙本质向分化的影响

目的探讨低氧环境下通过低氧诱导因子-1α（HIF-1α）调控Notch信号通路对人牙髓干细胞（HDPSC）成牙本质向分化能力的影响。 方法组织块酶消化法培养HDPSC,给予氯化钴（CoCl₂）诱导的化学性低氧环境,Western blot检测HIF-1α蛋白表达,茜素红染色检测细胞矿化结节形成能力,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Notch下游靶基因Hes1与成牙本质相关基因的表达;进一步加入Notch信号通路特异性阻断剂γ分泌酶抑制剂（GSI）,观察以上指标的变化。报告基因方法检测HIF-1α对Notch信号通路的调控作用。采用R version 3.5.3软件进行统计分析,计量资料进行正态检验,多组间比较采用单因素方差分析（方差齐）或Kruskal-Wallis H检验（方差不齐）,两两比较采用LSD-t检验（方差齐）或Mann-Whitney U检验（方差不齐）。 结果（1）CoCl₂诱导的低氧条件下HDPSC中的HIF-1α蛋白水平上调,Notch下游靶基因Hes1 mRNA相对表达量为1.46 ± 0.12,相比常氧组（1.06 ± 0.09）显著增高（t = -4.64,P = 0.012）;GSI处理阻断Notch信号通路后,低氧条件下HDPSC中HIF-1α蛋白水平下调,Hes1 mRNA相对表达量降低至0.82 ± 0.14,与处理前相比差异有统计学意义（t = 5.98,P = 0.004）;常氧条件下GSI处理后的HDPSC中HIF-1α蛋白水平也明显下调,Hes1 mRNA相对表达量（0.30 ± 0.09）相比处理前也显著降低（t = 10.08,P = 0.001）;（2）矿化诱导后的茜素红染色结果显示：低氧处理后,HDPSC细胞成牙本质分化能力下降;GSI处理后,成牙本质向分化能力增强。成骨/牙本质相关基因mRNA表达水平检测结果显示：低氧处理后,BSP、OCN和DSPP的mRNA相对表达量分别为0.53 ± 0.14、0.43 ± 0.20、0.48 ± 0.11,相比常氧组（1.21 ± 0.12、1.08 ± 0.19、1.03 ± 0.13）显著降低（t_BSP = 6.30,P_BSP = 0.003;t_OCN = 4.07,P_OCN = 0.015;t_DSPP = 5.67,P_DSPP = 0.005）;GSI处理后,低氧条件下BSP、OCN和DSPP mRNA相对表达量分别为0.99 ± 0.13、1.09 ± 0.13、0.95 ± 0.16,与处理前相比显著增高（t_BSP = -4.17,P_BSP = 0.014;t_OCN = -4.83,P_OCN = 0.012;t_DSPP = -4.30,P_DSPP = 0.017）,常氧条件下BSP、OCN和DSPP mRNA相对表达量分别为1.73 ± 0.20、1.55 ± 0.08、1.52 ± 0.14,与处理前相比显著增高（t_BSP = -3.84,P_BSP = 0.027;t_OCN = -3.99,P_OCN = 0.035;t_DSPP = -4.43,P_DSPP = 0.011）。（3）荧光素酶报告基因结果显示,HIF-1α可调控NICD启动子,使双荧光素酶相对表达活性为5.37 ± 0.12,与对照组（2.09 ± 0.15）相比显著增强（t = -28.92,P<0.001）,提示HIF-1α可能使Notch信号通路激活。 结论低氧引起HDPSC中HIF-1α升高并可能通过激活Notch信号通路抑制其成牙本质向分化能力。     

低氧增强自噬促进舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭

目的探讨低氧条件下对舌鳞状细胞癌（TSCC）自噬活性和迁移能力的影响。 方法应用含1% O₂的低氧培养箱培养TSCC UM1细胞,Western blot检测低氧诱导3、6、9、12、24 h后低氧诱导因子1α（HIF-1α）和自噬标记蛋白Beclin-1、自噬相关蛋白5（ATG5）和微管相关蛋白轻链3（LC3）的表达变化;细胞划痕实验检测低氧诱导后细胞迁移能力的改变;Transwell侵袭小室实验检测低氧诱导后细胞的侵袭能力;SPSS 13.0统计软件进行数据分析。 结果低氧条件下,与对照组（0.527 ± 0.055）相比,TSCC UM1细胞自噬体双层膜标记蛋白LC3Ⅱ的表达（1.206 ± 0.053）增加（t= 12.96,P<0.001）,同时自噬相关蛋白Beclin-1表达量（1.151 ± 0.078）较对照组（0.775 ± 0.062）明显提高（t= 6.736,P= 0.001）,ATG5的表达（1.231 ± 0.06）较对照组（0.711 ± 0.052）也明显上升（t= 7.834,P= 0.001）。与对照组相比,低氧诱导后细胞迁移能力（0.349 ± 0.024）较对照组（0.788 ± 0.037）明显增加（t= 9.918,P= 0.001）,细胞侵袭能力（23 ± 2）较对照组（71 ± 4）明显增强（t= 9.528,P= 0.001）。 结论低氧条件下可以增强TSCC细胞自噬活性,促进其迁移和侵袭。     

低氧诱导因子-1α在舌鳞状细胞癌中的表达及其与临床预后的关系

目的:探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在舌鳞状细胞癌(tongue squamous cellcarcinoma,TSCC)中的表达及其对临床预后的影响。方法:收集舌鳞状细胞癌组织标本49例以及相应癌旁组织标本15例。免疫组织化学法检测其中HIF-1α的表达。临床随访所选病例患者情况,将随访结果与HIF-1α表达情况进行统计分析。Kaplan-Meier方法分析无病生存期(DFS)和总生存期(OS)生存曲线,Log-Rank分析临床病理学参数与HIF-1α表达之间的意义。多变量Cox回归分析临床参数和HIF-1α表达之间的相关性。结果:在49例舌鳞状细胞癌标本中有43例表达HIF-1α,表达率为87.76%;而在癌旁组织中的表达率为33.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α过表达与T分级(P=0.01)、组织分化(P<0.001)和淋巴结转移(P=0.05)密切相关。同时,HIF-1α过表达、组织分化和淋巴转移均与患者5年生存率(P<0.001,P=0.008,P<0.001)和无病生存率(P=0.01,P=0.020,P<0.001)密切相关。Cox比例风险回归模型表明,HIF-1α的过表达以及淋巴转移是影响舌鳞状细胞癌的预后独立因素。结论:舌鳞状细胞癌中存在HIF-1α的表达,HIF-1α的过表达预示舌鳞癌患者的预后较差。在舌鳞癌的检测与治疗中,它可能作为一个新的靶点发挥作用。     

涎腺腺样囊性癌中BNIP3蛋白的表达及临床意义分析

目的 研究促凋亡蛋白BNIP3在涎腺腺样囊性癌（SACC）中的表达以及与临床病理特征及患者预后的关系,探讨其在腺样囊性癌低氧自噬中的作用。方法 采用免疫组织化学法检测65例SACC患者中BNIP3、低氧诱导因子（HIF）-1α和LC3的蛋白表达,分析BNIP3表达与SACC临床病理特征之间的关系及其与HIF-1α、LC3表达的相关性,并对患者生存率进行单因素生存分析。结果 BNIP3在41例SACC中阳性表达（63.1%）,其表达的高低与组织学分级相关（P=0.001）。BNIP3与HIF-1α的表达相关（P=0.011）,与LC3的表达无明显相关性（P=0.167）。BNIP3阴性表达组的总体存活率高于BNIP3阳性表达组（P<0.05）。结论 BNIP3在SACC的发生、发展中可能发挥着重要作用,为SACC的基因靶向治疗提供了新的治疗方向。     

非综合征型唇腭裂DNA甲基化谱的生物信息学分析

目的:针对非综合征型唇腭裂（non-syndrome cleft lip/cleft, NSCL/P）DNA甲基化谱,采用生物信息学技术筛选NSCL/P异常甲基化位点和异常甲基化区域,探讨DNA甲基化与NSCL/P发病机制的关系。方法:从基因表达综合数据库（Gene Expression Omnibus, GEO）的数据集下载原始数据,纳入67例NSCL/P患者和59例无出生缺陷者的全血甲基化数据。数据分析包括①探针过滤、质控、归一化等数据清洗;②差异甲基化位点和差异甲基化区域等差异甲基化分析;③对差异甲基化区域所在的基因进行基因本体（Gene Ontology,GO）富集分析、京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG）信号通路富集分析,明确异常DNA甲基化对生物功能学的影响。采用R 3.4.3统计学软件进行数据清洗、筛选差异甲基化位点和差异甲基化区域,采用DAVID 6.8工具对差异甲基化区域进行GO和KEGG富集分析。结果:NSCL/P患者和正常对照者差异显著的甲基化位点共814个（校正P<0.001,|Δβ|>0.125）,其中NSCL/P组与对照组相比,高甲基化位点178个,低甲基化位点636个;差异显著的甲基化区域共386个（P<0.05）,其中高甲基化区域204个,低甲基化区域182个。GO富集分析显示,富集于7个生化过程相关的差异性甲基化基因共38个,富集于3个分子功能相关的差异性甲基化基因共163个,富集于3个细胞成分有关的差异性甲基化基因共114个（P<0.01）。KEGG通路分析显示,9个信号通路出现差异性甲基化基因富集,涉及59个基因（P<0.05）。结论:DNA甲基化异常可能是影响NSCL/P发生、发展的重要表观遗传学机制,为诊断标志物筛选和靶向干预提供了线索。     

靶向p38丝裂素活化蛋白激酶对兔唇裂术后瘢痕增生的影响

目的研究运用p38丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK）基因重组腺病毒靶向敲低目的基因的表达,通过检测p38MAPK信号通路受到抑制后不同时间段兔上唇瘢痕增生受到的影响,来探讨疗效最佳的基因治疗时间。 方法对90只2.0~2.5 kg的上唇裂新西兰白兔进行唇裂修复术,选取术后第0、1、2周对其瘢痕正中注射重组病毒,将第3周的瘢痕组织制成标本。通过使用蛋白免疫印迹法（Western blot）、实时荧光定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫组织化学染色等方法分别定性、定量检测p38MAPK及瘢痕形成相关因子与Smad蛋白和mRNA的相对表达水平。使用SPSS 24.0软件对实验结果进行统计学分析。 结果相较于术后第0、2周,术后第1周瘢痕组织中ColⅢ（1.373 ± 0.073,F = 8.027,P = 0.002）、MMP1（1.715 ± 0.028,F = 9.262,P = 0.001）表达明显升高,ColⅠ（0.424 ± 0.015,F = 7.794,P = 0.003）和TIMP1（0.464 ± 0.025,F = 6.196,P = 0.007）表达明显降低,差异均有统计学意义。术后第1周的Smad2蛋白表达水平与mRNA表达水平降低（F = 14.123,P = 0.029）,Smad3蛋白表达水平与mRNA表达水平降低（F = 3.796,P = 0.037）,与其他组相比差异均有统计学意义。 结论抑制p38MAPK表达可能通过Smad依赖型信号通路发挥抑制瘢痕增生的作用,兔上唇唇裂术后第1周瘢痕形成过程中靶向敲低p38MAPK对瘢痕增生影响最大。     

粪肠球菌脂磷壁酸对巨噬细胞自噬的影响

目的通过研究粪肠球菌脂磷壁酸（LTA）对巨噬细胞自噬功能的影响,为后续进一步深入探讨顽固性根尖周炎的发病机制提供实验依据。 方法体外培养小鼠巨噬细胞系RAW 264.7,细胞计数试剂盒（CCK-8）检测LTA的细胞毒性作用;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测LTA作用下巨噬细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin1的表达水平;实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测自噬相关基因LC3、Beclin1 mRNA表达水平的变化;构建稳定表达自噬双荧光慢病毒载体HBLV-mRFP-GFP-LC3-PURO的巨噬细胞系,激光共聚焦显微镜观察自噬情况;SPSS 20.0统计软件进行数据分析。 结果CCK-8结果表明,选用20 μg/mL LTA及其以下浓度处理巨噬细胞24 h均未见明显毒性作用（t = 2.102,P = 0.1106）;Western blot结果表明,LTA刺激巨噬细胞后：LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值表达量（0.42 ± 0.04）与对照组（0.04 ± 0.02）相比显著提高,差异有统计学意义（F = 14.25,P<0.001）,Beclin1蛋白表达量（0.56 ± 0.11）与对照组（0.28 ± 0.08）相比呈上升趋势（F = 3.459,P = 0.0258）,均存在剂量依赖效应;实时荧光定量PCR结果表明,LTA刺激巨噬细胞后,LC3基因表达水平（5.94 ± 0.85）与对照组（1.03 ± 0.28）相比显著提高（F = 12.93,P<0.001）;Beclin1基因表达水平（2.22 ± 0.21）与对照组（1.02 ± 0.28）相比呈上升趋势（F = 6.036,P<0.001）,存在剂量依赖效应;成功构建稳定表达HBLV-mRFP-GFP-LC3-PURO的巨噬细胞系,激光共聚焦显微镜下观察显示,LTA作用组自噬体形成量（58 ± 6）与对照组（18 ± 8）相比差异有统计学意义（F = 12.36,P = 0.0021）。 结论粪肠球菌LTA可诱导巨噬细胞产生自噬,且存在剂量依赖效应。     

miR-199b-5p在头颈癌细胞中的表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响

目的： 明确miR-199b-5p差异表达在头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）发生、发展中的作用并探讨其生物学功能。方法： 检测128例HNSCC组织中miR-199b-5p的表达,通过Kaplan-Meier生存分析,分析临床病理参数与miR-199b-5p表达水平之间的关系。通过miRNA异常表达对HNSCC细胞生长、侵袭和迁移能力以及克隆形成的影响,检测HNSCC细胞中miRNA的功能。采用SPSSl9.0软件包对数据进行t检验。结果： 在79例淋巴结转移的HNSCC组织中,miR-199b-5p的表达水平为1.68±0.21;在49例非淋巴结转移的HNSCC组织中,其表达水平为2.64±0.24,差异显著（P=0.001）。在HNSCC患者中,高表达miR-199b-5p的患者总体存活率显著增高（P=0.01）,且高表达水平的miR-199b-5p可以显著抑制头颈鳞癌细胞的侵袭和转移。结论： 作为抑癌基因,miR-199b-5p在HNSCC的发生、发展中起着关键作用。     

雷帕霉素通过促进细胞自噬抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖活性效应

目的探讨雷帕霉素（RAP）抑制表现异常增殖活性的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖活性的作用及其分子机制。 方法使用不同质量浓度的血小板衍生生长因子（PDGF）作为诱导剂处理大鼠主动脉VSMC，构建模拟脉管畸形的体外模型。实验分为对照组、PDGF组、PDGF+RAP组和PDGF+VEC（血管内皮细胞）组，观察对VSMC增殖活性的改变，检测不同处理方式对VSMC自噬水平的影响。两组间比较应用独立样本t检验，多组间比较应用重复测量方差分析，多组mRNA表达量、蛋白表达量比较应用单因素方差分析。 结果细胞增殖检测（CCK-8）和EdU实验结果显示：PDGF处理的VSMC活性呈时间依赖性上升。与PDGF组相比，在48和72 h，PDGF+RAP组细胞增殖活性分别降低了24.8%（0.129 ± 0.010比0.172 ± 0.012，t = 4.787，P = 0.009）和45.1%（0.170 ± 0.012比0.292 ± 0.046，t = 4.431，P = 0.011）；PDGF+VEC组细胞增殖活性分别降低了10.0%（0.155 ± 0.013比0.172 ± 0.012，t = 2.357，P = 0.076）和8.9%（0.266 ± 0.022比0.292 ± 0.046，t = 1.718，P = 0.161）。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹（Western blot）结果显示，与对照组比较，PDGF可抑制平滑肌蛋白抗体-B（Smoothelin-B）表达（0.486 ± 0.057比1.005 ± 0.067，t = 10.192，P = 0.001），促进细胞视黄醇结合蛋白-1（CRBP-1）表达（3.185 ± 0.091比0.991 ± 0.056，t = 35.461，P<0.001）；而在PDGF+RAP组和PDGF+VEC组，Smoothelin-B表达增加（0.857 ± 0.091比0.486 ± 0.057，t = 5.943，P = 0.004；0.563 ± 0.067比0.486 ± 0.057，t = 1.501，P = 0.208），CRBP-1表达减少（1.579 ± 0.042比3.185 ± 0.091，t = 27.707，P<0.001；2.951 ± 0.144比3.185 ± 0.091，t = 2.382，P = 0.076）。与对照组比较，PDGF组LC3B（LC3-Ⅱ/Ⅰ比值）明显下降（0.175 ± 0.003比1.020 ± 0.020，t = 72.263，P<0.001），p62表达显著上升（2.632 ± 0.098比1.005 ± 0.007，t = 28.562，P = 0.001）。与PDGF组比较，PDGF+RAP组的LC3B明显升高（0.316 ± 0.037比0.175 ± 0.003，t = 6.529，P = 0.022），p62蛋白显著降低（1.396 ± 0.070比2.632 ± 0.098，t = 17.771，P<0.001）；PDGF+VEC组LC3B稍有上升（0.206 ± 0.014比0.175 ± 0.003，t = 3.687，P = 0.021），而p62蛋白表达降低（2.400 ± 0.076比2.632 ± 0.098，t = 3.220，P = 0.032）。透射电镜观察发现，PDGF+RAP组、PDGF+VEC组自噬小体较PDGF组上升。 结论高质量浓度PDGF可使VSMC增殖活性上升；雷帕霉素或VEC可通过激活自噬，抑制PI3K/AKT信号通路使细胞活性降低，并促使VSMC向收缩型转变，逆转PDGF的效应。     

低氧诱导下舌鳞癌SCC-6细胞中HIF-1α、VEGF的表达及TSA对其表达的抑制

目的:观察低氧与人舌鳞状细胞癌SCC-6细胞中HIF-1α、VEGF表达的相关性,曲古抑菌素A(TSA)对其表达的抑制作用,初步探讨其作用机制。方法:体外培养的舌鳞状细胞癌SCC-6细胞,经不同作用时间去铁胺处理,模拟低氧条件培养后,RT-PCR检测HIF-1α、VEGF的mRNA表达,Western Blot检测其蛋白表达;模拟低氧条件下,不同浓度、时间梯度TSA处理SCC-6细胞后,分别检测HIF-1α、VEGF的mRNA及蛋白表达。结果:①低氧下SCC-6细胞HIF-1α蛋白表达增加,但其mRNA的表达不受影响;作为HIF-1α下游基因的VEGF的mRNA和蛋白表达,随HIF-1α蛋白表达增加而增加;②低氧下,TSA可抑制HIF-1α的蛋白表达及VEGF的mRNA和蛋白表达,并呈量效和时效关系,但HIF-1α的mRNA表达不受影响;③HIF-1α的调节在蛋白水平。结论:体外条件下,模拟低氧可诱导舌鳞状细胞癌SCC-6细胞中HIF-1α蛋白、其下游基因VEGF的mRNA和蛋白的表达增加。TSA可抑制HIF-1α的蛋白表达,进而抑制其下游基因VEGF的表达,从而发挥抗肿瘤血管生成的作用,并且呈量效和时效关系。     

CXC受体4阳性表达骨髓间充质干细胞的分选及其骨向分化的能力

目的研究磁珠分选法分选表面CXC受体4（CXCR4）阳性表达的大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）的分选效率,以及分选后BMSC的增殖、迁移和成骨能力是否受到影响。 方法全骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSC,通过生长曲线、成骨成脂诱导分化和流式检测BMSC表面标记蛋白表达,鉴定大鼠BMSC。流式检测细胞表面CXCR4的阳性率,通过生长曲线及克隆形成实验检测细胞的增殖活性及克隆形成能力,Transwell体外趋化实验检测细胞迁移能力,通过检测成骨诱导早期细胞ALP活性和成骨相关基因的表达,分析细胞成骨能力,数据采用单因素方差分析处理。 结果通过全骨髓贴壁法获得具有自我更新和多向分化能力的大鼠BMSC。磁珠分选阳性细胞表面CXCR4表达[（55.13 ± 0.67）%]较未分选组[（6.49 ± 0.59）%]显著增加（LSD-t = 63.66,P<0.001）。分选阳性细胞的克隆形成能力[（16.22 ± 1.68）%]以及培养后期细胞增殖活性（A_{450（5 d）}= 1.40 ± 0.04;A_{450（7 d）}= 1.60 ± 0.01）较未分选细胞[CFU =（17.00 ± 1.76）%;A_{450（5 d）}= 1.49 ± 0.07;A_{450（7 d）}= 1.60 ± 0.12]均无明显变化;而培养早期（第1、3天）分选阳性细胞的增殖活性[A_{450（1 d）}= 0.50 ± 0.01;A_{450（3 d）}= 0.81 ± 0.05]较未分选细胞[A_{450（1 d）}= 0.57 ± 0.01;A_{450（3 d）}= 0.96 ± 0.06]稍低[LSD-t_{1 d} = 5.208,P_{1 d} = 0.002;LSD-t_{3 d} = 3.563,P_{3 d} =0.012]。分选阳性细胞的基质细胞衍生因子1α（SDF-1α）定向迁移能力（71.33 ± 5.69）较未分选细胞（23.33 ± 1.53）显著增强（LSD-t = 17.211,P<0.001）。在成骨诱导早期,分选阳性细胞的Runx2 mRNA（0.93 ± 0.12）较未分选组（0.51 ± 0.14）表达上调（LSD-t = 4.703,P = 0.003）,而ALP活性及ALP mRNA、OCN mRNA的表达均无明显变化（P>0.05）。 结论磁珠分选法可有效分选CXCR4⁺ BMSC,显著提高BMSC向SDF-1α的迁移效率,对细胞的增殖活性影响不大。     

缺氧诱导因子-1α在腺样囊性癌中的表达及侵袭相关性研究

目的研究缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible fector-1α,HIF-1α）和微血管密度（microvessel density,MVD）在腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma,ACC）中的表达和相关性,探讨两者在ACC侵袭性生物学行为的作用机理。方法应用免疫组织化学方法,检测35例涎腺ACC患者、13例涎腺多形性腺瘤患者和10例正常人涎腺组织中HIF-1α的表达和微血管的密度与形态。结果HIF-1α的阳性表达率和MVD计数在正常涎腺组织、多形性腺瘤、ACC中依次增加,组间差异有统计学意义（χ2=21.87,P〈0.001）;ACC中MVD计数随着HIF-1α表达的增强而升高（F=5.56,P〈0.01）;ACC中有转移病例的HIF-1α阳性表达率（χ2=6.42,P〈0.05）和MVD计数均高于非转移病例（F=5.82,P〈0.05）,有神经侵犯病例的HIF-1α阳性表达率（χ2=5.32,P〈0.05）和MVD计数均高于无神经侵犯病例（F=6.02,P〈0.05）。结论HIF-1α的表达和MVD在ACC中可能相关,HIF-1α可能通过影响肿瘤血管的生成,使ACC具有相应的侵袭性生物学行为,HIF-1α的表达和MVD可作为判断ACC侵袭性和恶性程度的重要指标。     

丙酮酸激酶M2与CD276在头颈鳞癌中的表达及临床意义

目的: 观察丙酮酸激酶M2（pyruvate kinase M2,PKM2）和B7H3（CD276）在头颈鳞癌（head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC）和正常口腔黏膜中的表达,探讨PKM2与CD276的相关性。方法: 应用免疫组织化学方法检测PKM2和CD276在70例HNSCC及18例正常口腔黏膜组织中的表达水平,分析PKM2和CD276的表达水平与HNSCC临床病理特征的关系。采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果: PKM2和CD276在HNSCC 的表达水平比正常黏膜组织高。PKM2和CD276的表达水平与TNM分期相关（P<0.05）,与患者性别、年龄、病理分级无相关性（P>0.05）。CD276在头颈鳞癌中的表达与PKM2的表达呈正相关。结论: PKM2和CD276在HNSCC的高表达与肿瘤恶性进展相关。PKM2可能通过增加CD276的表达而参与免疫调控。     

miR-31-5p对牙髓干细胞HIF-1α/BNIP3信号通路及成骨相关因子表达的影响

目的: 探讨微小RNA-31-5p（miR-31-5p）对牙髓干细胞（DPSCs）低氧诱导因子1α（HIF-1α）/Bcl-2/腺病毒E1B 19-kDa相互作用蛋白3（BNIP3）信号通路及成骨相关因子表达的影响。方法: 体外培养人DPSCs,分为对照组（不转染）、mimic NC组（转染negative control-miR-31-5p）、miR-31-5p mimic组（转染hsa-miR-31-5p mimic）、siRNA NC组（转染nonsense siRNA）和miR-31-5p siRNA组（转染miR-31-5p siRNA）。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组DPSCs细胞中miR-31-5p、HIF-1α、BNIP3、碱性磷酸酶（ALP）、Runt相关转录子2（Runx2）mRNA的表达情况,MTT法检测各组DPSCs细胞增殖情况,ALP活性测定试剂盒检测各组DPSCs细胞ALP活性,蛋白印迹（WB）法检测各组DPSCs细胞中HIF-1α、BNIP3、Runx2蛋白的表达情况。采用SPSS 24.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 与对照组、mimic NC组相比,miR-31-5p mimic组DPSCs细胞A值、ALP mRNA表达水平及活性、Runx2 mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,ALP染色明显减弱,miR-31-5p mRNA、HIF-1α、BNIP3 mRNA及HIF-1α、BNIP3、Beclin1蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。与对照组、siRNA NC组相比,miR-31-5p siRNA组DPSCs细胞A值、ALP mRNA表达水平及活性、Runx2 mRNA及蛋白水平显著升高（P<0.05）,ALP染色明显增强,miR-31-5p mRNA、HIF-1α、BNIP3 mRNA及HIF-1α、BNIP3、Beclin1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论: miR-31-5p可以激活HIF-1α/BNIP3信号通路,抑制DPSCs细胞的成骨相关因子表达。     

过表达甲基转移酶样3修复炎症来源牙周膜干细胞的成骨能力

目的探讨N⁶-甲基腺嘌呤（m⁶A）修饰与甲基转移酶样3（METTL3）在牙周膜干细胞（PDLSC）成骨分化和成脂分化中的作用。 方法使用流式细胞术、细胞集落形成实验分别鉴定PDLSC的表面标志物和增殖能力。通过茜素红染色和油红O染色分别检测PDLSC的成骨和成脂分化潜能。在人牙周膜干细胞（hPDLSC）和炎症来源牙周膜干细胞（pPDLSC）中分别构建METTL3过表达和敲低模型,成骨诱导一定时间,通过实时定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）、茜素红染色和油红O染色分别在mRNA水平、蛋白水平和宏观水平检测成骨和成脂的变化。两样本比较使用独立样本t检验,多组样本比较使用单因素方差分析。 结果（1）流式细胞术结果显示,hPDLSC和pPDLSC均阳性表达CD29（100.0%,98.0%）、CD105（100.0%,99.5%）和CD146（31.5%,17.8%）,阴性表达CD34（1.3%,0.4%）和CD45（1.4%,0.4%）。（2）细胞集落形成实验结果显示,hPDLSC和pPDLSC的集落形成数量分别为55±5和72±8,hPDLSC的细胞增殖能力较pPDLSC低（t = 3.16,P = 0.034）。（3）茜素红染色和油红O染色说明,两种细胞均具有成骨和成脂分化能力,hPDLSC具有更强的成骨分化能力（t = 27.77,P<0.001）,而pPDLSC具有更强的成脂分化能力（t = 5.02,P = 0.007）。（4）成骨诱导培养7 d后的慢病毒转染模型中,METTL3过表达组比过表达对照组的成骨关键基因Runx2的mRNA表达水平高,在hPDLSC和pPDLSC中的METTL3过表达组的表达量是3.63 ± 1.15和1.61 ± 0.38,分别是其过表达对照组的3.39倍（t = 3.777,P = 0.020）和1.71倍（t = 2.948,P = 0.042）;而在METTL3敲低组较敲低对照组低,在hPDLSC和pPDLSC中的METTL3敲低组的表达量是0.16 ± 0.03和0.26 ± 0.07,分别是其敲低对照组的0.15倍（t = 9.669,P<0.001）和0.26倍（t = 8.767,P<0.001）。同样地,Runx2的蛋白表达水平也发生相同改变。将转染后的细胞进行21 d的成骨诱导培养后进行茜素红染色,结果显示METTL3过表达组较过表达对照组染色深且钙化结节较大,定量分析结果显示在hPDLSC和pPDLSC中的METTL3过表达组是28.47% ± 3.82%和8.55% ± 0.43%,分别是其过表达对照组的1.78倍（t = 5.012,P = 0.007）和1.76倍（t = 7.293,P = 0.002）,而在METTL3敲低组较敲低对照组染色浅且钙化结节较小,定量分析结果显示在hPDLSC和pPDLSC中的METTL3敲低组是6.36% ± 2.00%和3.78% ± 0.56%,分别是其敲低对照组的0.35倍（t = 4.444,P = 0.011）和0.43倍（t = 5.337,P = 0.006）;将转染后的细胞进行21 d的成脂诱导培养,再进行油红O染色,结果显示脂滴的大小及数量在METTL3过表达组较过表达对照组少,定量分析结果显示在hPDLSC和pPDLSC中的METTL3过表达组是0.89% ± 0.11%和1.10% ± 1.15%,分别是其过表达对照组的0.24倍（t = 5.454,P = 0.006）和0.49倍（t = 2.935,P = 0.043）,而在METTL3敲低组则比敲低对照组的脂滴更大且多,定量分析结果显示在hPDLSC和pPDLSC中的METTL3敲低组是3.60% ± 1.08%和5.34% ± 1.31%,分别是其敲低对照组的1.94倍（t = 2.794,P = 0.049）和2.93倍（t = 4.131,P = 0.015）。 结论pPDLSC的METTL3表达水平低于hPDLSC;METTL3的过表达可促进hPDLSC和pPDLSC的成骨分化,并抑制两者的成脂分化。     

低氧状态下骨细胞参与破骨细胞形成的作用机制研究

目的 探究低氧状态下骨细胞对破骨细胞形成的作用及其机制。方法 用去铁胺甲磺酸（DFO）刺激骨细胞系MLO-Y4建立体外低氧骨细胞培养体系。CCK-8实验检测DFO对MLO-Y4细胞增殖活性的影响;采用DFO处理后的MLO-Y4细胞培养液制备条件培养基诱导RAW264.7细胞分化,行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测;利用实时荧光定量聚合酶链反应、细胞免疫荧光和蛋白质印迹（Western blot）检测DFO作用下MLO-Y4表达低氧诱导因子（HIF）-1α与核因子κB受体活化因子配体（RANKL）的情况;检测HIF-1α siRNA转染对MLO-Y4表达HIF-1α和RANKL的影响。结果 100 μmol·L ^-1 DFO作用24 h时MLO-Y4增殖活性升高,之后随着时间延长细胞增殖活性下降（P<0.01）。加入可溶性RANKL后,低氧组可见破骨细胞形成明显增加（P<0.001）。100 μmol·L ^-1 DFO作用下,HIF-1α mRNA表达稳定,RANKL mRNA的表达随时间明显变化,24 h时最高（P<0.01）;HIF-1α、RANKL蛋白表达升高（P<0.01）。低氧状态下siHIF-1α转染可降低HIF-1α和RANKL的表达（P<0.01）,破骨细胞减少（P<0.01）。结论 低氧状态下MLO-Y4可通过上调HIF-1α的蛋白水平促进RANKL的生成,进而加速RAW264.7细胞向破骨细胞分化。     

低氧对大鼠颏舌肌成肌细胞分化的影响

目的:通过观测低氧环境对体外培养大鼠颏舌肌成肌细胞分化及低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响,探讨低氧引起颏舌肌损伤的机制以及HIF-1α在其中的作用。方法:根据环境氧浓度不同,将体外培养的原代大鼠颏舌肌成肌细胞分为正常氧浓度组(NC)(21%)和低氧组(HG)(1%),分别诱导分化0 d、1 d、3 d、6 d。采用RT-PCR及Western blotting检测生肌调节因子(MyoD)、肌源性决定因子(myogenin)、肌球蛋白重链(MHC)以及HIF-1α的mRNA及蛋白表达;倒置显微镜下观察成肌细胞分化的形态变化。结果:在颏舌肌成肌细胞分化过程中,两种氧状态下HIF-1αmRNA表达均没有显著变化(P>0.05),但蛋白表达逐渐上调;低氧对MyoD、myogenin、MHC的mRNA(P<0.05)和蛋白表达有显著的抑制作用,致肌管形成延迟;低氧使HIF-1αmRNA(P<0.05)和蛋白显著上调。结论:低氧环境可能是通过上调HIF-1α表达抑制大鼠颏舌肌成肌细胞的分化,从而抑制颏舌肌损伤的修复。     

低氧状态下骨细胞参与破骨细胞形成的作用机制研究

目的 探究低氧状态下骨细胞对破骨细胞形成的作用及其机制。方法 用去铁胺甲磺酸（DFO）刺激骨细胞系MLO-Y4建立体外低氧骨细胞培养体系。CCK-8实验检测DFO对MLO-Y4细胞增殖活性的影响;采用DFO处理后的MLO-Y4细胞培养液制备条件培养基诱导RAW264.7细胞分化,行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测;利用实时荧光定量聚合酶链反应、细胞免疫荧光和蛋白质印迹（Western blot）检测DFO作用下MLO-Y4表达低氧诱导因子（HIF）-1α与核因子κB受体活化因子配体（RANKL）的情况;检测HIF-1α siRNA转染对MLO-Y4表达HIF-1α和RANKL的影响。结果 100 μmol·L ^-1 DFO作用24 h时MLO-Y4增殖活性升高,之后随着时间延长细胞增殖活性下降（P<0.01）。加入可溶性RANKL后,低氧组可见破骨细胞形成明显增加（P<0.001）。100 μmol·L ^-1 DFO作用下,HIF-1α mRNA表达稳定,RANKL mRNA的表达随时间明显变化,24 h时最高（P<0.01）;HIF-1α、RANKL蛋白表达升高（P<0.01）。低氧状态下siHIF-1α转染可降低HIF-1α和RANKL的表达（P<0.01）,破骨细胞减少（P<0.01）。结论 低氧状态下MLO-Y4可通过上调HIF-1α的蛋白水平促进RANKL的生成,进而加速RAW264.7细胞向破骨细胞分化。