PDX-1蛋白对棕榈酸诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用

目的探讨PDX-1蛋白对棕榈酸诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用。方法PDX-1基因克隆及表达质粒的构建,PDX-1蛋白的表达、纯化和鉴定,PDX-1蛋白保护棕榈酸引起的胰岛细胞凋亡的研究。结果PDX-1蛋白可以延缓胰岛细胞的自然凋亡过程,保护其三维形态;可以降低处理后的胰岛Caspase-3活性,同时可以增加葡萄糖刺激胰岛素释放,PDX-1蛋白干预后的棕榈酸组（1.560±0.074）uIU/mL,与对照组（1.426±0.056）uIU/mL相比有显著差异（P〈0.05）。结论表明PDX-1蛋白可以减少棕榈酸诱导的胰岛凋亡,保护β细胞功能。     

内毒素对大鼠胰岛细胞凋亡及其意义的研究

目的：探讨内毒素对大鼠胰岛细胞凋亡作用的意义。方法：采用单细胞凝胶电泳和DNA凝胶电泳技术,分析外源NO供体（硝普钠）和LPS对离体胰岛细胞的凋亡及胰岛素合成与分泌的影响。结果：体外试验显示,外源NO明显引起胰岛细胞DNA断裂,出现慧星尾和凋亡梯状带,并呈剂量依赖关系,高浓度NO（60mmol/L,SNP)可引起胰岛细胞DNA随机降解,外源NO强裂抑制葡萄糖刺激β－细胞的胰岛素合成与分泌,LPS离体条件下,对胰岛细胞凋亡作用不明显。结论：LIPS通过整体作用诱导炎症细胞和胰岛细胞iNOS表达,产生NO介导胰岛细胞凋亡,从而抑制胰岛素合成与分泌。     

游离脂肪酸对大鼠胰岛分泌功能和胰岛细胞凋亡的影响研究

目的：研究游离脂肪酸对体外培养SD大鼠胰岛功能和胰岛细胞凋亡的影响并探讨可能机制。方法：取健康雄性SD大鼠胰岛原代分离培养,分为6组,培养1d：NC1组（5．6mmol／L葡萄糖）、FFA1组（0．25mmol／L）、FFA2组（0．5mmol／L）;培养3d：NC2组（5．6mmol／L葡萄糖）、FFA3组（0．25mmol／L）、FFA4组（0．5mmol／L）;每组6个样本,每个样本20个胰岛。采用RT—PCR扩增胰岛素、PDX-1、Bax、Caspase-3基因mRNA表达,TUNEL法检测胰岛细胞凋亡率,放射免疫法检测胰岛素水平。结果：①FFA1、FFA2组Insulin、PDX-1基因表达量、胰岛素分泌较NC1组明显下降,FFA1、FFA2组凋亡基因Bax、Caspase-3表达量及胰岛细胞凋亡率较NC1组明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）;②FFA3、FFA4组Insulin、PDX-1基因表达量、胰岛素分泌较NC2组明显下降,FFA3、FFA4组凋亡基因Bax、Caspase-3表达量及胰岛细胞凋亡率较NC2组明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：游离脂肪酸抑制体外培养SD大鼠胰岛细胞的胰岛素分泌功能,其可能机制是FFA抑制胰岛素基因、PDX-1基因的合成,刺激胰岛细胞凋亡基因Bax、Caspase-3表达,并导致胰岛细胞凋亡,最终导致胰岛细胞分泌功能下降。     

PDX-1蛋白对棕榈酸诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用

目的探讨PDX-1蛋白对棕榈酸诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用。方法PDX-1基因克隆及表达质粒的构建,PDX-1蛋白的表达、纯化和鉴定,PDX-1蛋白保护棕榈酸引起的胰岛细胞凋亡的研究。结果PDX-1蛋白可以延缓胰岛细胞的自然凋亡过程,保护其三维形态;可以降低处理后的胰岛Caspase-3活性,同时可以增加葡萄糖刺激胰岛素释放,PDX-1蛋白干预后的棕榈酸组(1.560±0.074)uIU/mL,与对照组(1.426±0.056)uIU/mL相比有显著差异(P<0.05)。结论表明PDX-1蛋白可以减少棕榈酸诱导的胰岛凋亡,保护β细胞功能。     

ＰＡＲＰ-１抑制剂在游离脂肪酸诱导胰岛细胞凋亡中的作用

目的:探讨PARP-1抑制剂3-氨基苯酰胺(3-Aminobenzamide,3-AB)在游离脂肪酸棕榈酸诱发的胰岛细胞凋亡和坏死中的作用.方法:常规培养RIN-m5F细胞株,采用四甲基偶氮唑盐(MTY)比色法观察棕榈酸和PARP-1抑制剂3-AB作用后细胞的增殖情况,并用流式细胞术及TUNEL法分析细胞凋亡和坏死.结果:棕榈酸明显抑制RIN-m5F细胞的增殖(P<0.01);低浓度3-AB与棕榈酸共同孵育24 h后细胞的凋亡率和坏死率显著低于棕榈酸单独培养(P<0.01);高浓度3-AB与棕榈酸共同孵育后较棕榈酸单独培养时细胞凋亡率显著性增强(P<0.01).结论:低浓度3-AB能有效抑制棕榈酸所诱导的胰岛细胞株RIN-m5F细胞坏死,缓解细胞凋亡;而高浓度3-AB则促进细胞凋亡.进一步说明了3-AB在棕榈酸所诱导的胰岛细胞凋亡过程中具有双重作用,此可为2型糖尿病的治疗提供一个新的靶点.     

丹参酮ⅡA磺酸钠对LPS引起的HUVEC功能异常和凋亡调控作用的研究

目的：研究丹参酮ⅡA磺酸钠（sodium tanshinone ⅡA sulphonate,STS）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）引起的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）功能异常和凋亡的调控作用。方法：将第6~8代处于对数生长期的HUVEC按如下分组给予处理：DMEM组、LPS（1.0 μg/mL）处理组、高浓度（50.0 μg/mL）STS预处理组、中浓度（25.0 μg/mL）STS预处理组和低浓度（12.5 μg/mL）STS预处理组。其中,各STS预处理组均先以对应浓度的STS预处理HUVEC 2 h,再加入1 μg/mL LPS进行刺激。处理24 h后,CCK?8 法测定细胞活力;流式细胞术检测细胞增殖;ELISA 法检测细胞培养上清中炎症因子白介素1β（interleukin?1β,IL?1β）的蛋白浓度;Western blot法检测细胞裂解液中IL?1β和凋亡相关分子cleaved caspase?9和cleaved caspase?3的表达,以及细胞核蛋白中核因子κB?p65（nuclear factor?κB?p65,NF?κB?p65）的水平。此外,划痕实验检测HUVEC的迁移能力;光镜观察细胞形态变化;DAPI染色显示细胞核染色质的改变;Annexin V/PI双染法检测HUVEC的凋亡情况。结果：与DMEM相比,LPS处理导致HUVEC活力和迁移能力减低,但促进其增殖;IL?1β和NF?κB p65蛋白水平升高;cleaved caspase?3和cleaved caspase?9表达增高并伴有凋亡水平提高（P＜0.05）。STS预处理能够以浓度依赖的方式部分或完全逆转LPS引起的上述现象（P＜0.05）。结论：STS能够通过浓度依赖的方式抑制LPS引起的HUVEC功能异常和凋亡,对血管内皮起到保护作用。     

中药单体成分大黄素对胰岛β细胞NIT-1的影响

目的研究中药提取的单体成分大黄素对胰岛β细胞NIT-1增殖、凋亡及胰岛素分泌作用的影响。方法不同浓度的大黄素分别作用于NIT-1细胞不同时间。以MTT法检测细胞的增殖活性；收集细胞，以Annexin V／PI染色，经流式细胞术检测细胞凋亡发生率；收集细胞培养上清液测定基础和高糖刺激后胰岛素分泌量。结果2．5μg／mL大黄素作用于NIT-1细胞时对其增殖无明显影响，5．0μg／mL以上对NIT-1细胞增殖的影响呈时间和剂量依赖性降低（P〈0．01）；0～25．0μg／mL大黄素分别作用于NIT-1细胞24h后，细胞凋亡率呈浓度依赖性增加（P〈0．05）；0～5．0μg／mL大黄素分别作用于NIT-1细胞24h后，基础胰岛素分泌量呈浓度依赖性降低（P〈0．05）；高糖刺激后胰岛素分泌量在大黄素0和2.5μg／mL组间无差别，而在5．0μg／mL组则明显降低（P〈0．05）。结论大黄素可诱导胰岛细胞凋亡，并抑制胰岛素分泌。     

LncRNA MEG3表达量与脂多糖诱导支气管上皮细胞增殖及凋亡和炎症因子分泌的关系

【摘要】 目的 探讨长链非编码RNA母系表达基因3（LncRNA MEG3）对脂多糖（LPS）诱导的支气管上皮细胞增殖、凋亡及炎症因子分泌的影响。 方法 体外培养支气管上皮细胞16HBE,LPS处理16HBE细胞建立炎症损伤模型。采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测白细胞介素-8（IL-8）与白细胞介素-1β（IL-1β）的含量;甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测LPS诱导的16HBE细胞中MEG3的表达水平。取对数生长期支气管上皮细胞,用50 μg/mL的LPS处理细胞24 h作为LPS组,正常培养的细胞作为NC组,将Si-MEG3、Si-con、pcDNA-MEG3、pcDNA转染主支气管上皮细胞48 h,随后使用50 μg/mL的LPS处理细胞24 h,分别命名为LPS+si-MEG3组、LPS+si-con组、LPS+pcDNA-MEG3组、LPS+pcDNA组。通过MTT与流式细胞术检测细胞增殖能力及凋亡能力的改变;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved caspase-3）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（Cleaved caspase-9）、细胞周期蛋白1（CyclinD1）的蛋白表达量。 结果 与NC组相比,LPS组IL-8、IL-1β水平、细胞凋亡率及Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9蛋白的表达水平均显著升高（P＜0.05）,细胞增殖率及CyclinD1蛋白、MEG3的表达水平均显著降低（P＜0.05）;干扰MEG3表达可促进LPS诱导的支气管上皮细胞凋亡及抑制细胞增殖,与LPS+si-con组相比,LPS+si-MEG3组支气管上皮细胞中MEG3的表达水平、细胞增殖率、CyclinD1蛋白相对表达量显著降低（P＜0.05）,IL-8、IL-1β水平、细胞凋亡率、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9蛋白相对表达量显著升高（P＜0.05）;与LPS+pcDNA组相比,LPS+pcDNA-MEG3组支气管上皮细胞中IL-8、IL-1β水平、细胞凋亡率及Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9蛋白的相对表达水平均显著降低（P＜0.05）,MEG3的表达水平、细胞增殖率及CyclinD1的表达水平均显著升高（均P＜0.05）。 结论 LncRNA MEG3过表达能够促进LPS诱导的支气管上皮细胞增殖,抑制细胞凋亡,减少炎症因子分泌。     

右美托咪定对肺巨噬细胞炎性损伤的保护效应

目的 本研究观察了右美托咪定（dexmedetomidine,Dex）对内毒素（LPS）联合γ-干扰素(IFNγ)所致肺巨噬细胞活力损伤的影响。方法 大鼠肺巨噬细胞NR8383接种于96孔培养板,分别采用正常培养液以及不同药物组合培养：100 ng/mL LPS + 50 U/mL IFNγ、 100 ng/mL LPS + 50 U/mL IFNγ+ 10 ng/mL Dex、 100 ng/mL LPS + 50 U/mlIFNγ+ 1 ng/mL Dex、 100 ng/mL LPS + 50 U/mL IFNγ+ 10 ng/mL Dex + 10 μM Yohimbine、 10 ng/mL Dex 、 1 ng/mL Dex、10μM Yohimbine (选择性 2肾上腺素能拮抗剂),24 h后采用Western blot 检测诱导性一氧化氮合酶（iNOS）生成量;采用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测细胞活力。结果 100 ng/mL LPS联合50 U/mL IFNγ刺激引起NR8383细胞iNOS大量表达,细胞活力下降为正常培养细胞的47.8%。10 ng/mL Dex可以明显抑制LPS联合IFNγ刺激所引起的NR8383细胞iNOS表达量和细胞活力下降（63.4% vs 47.8 %,P<0.05）;10μM Yohimbine可部分阻断10 ng/mL Dex的抑制效应;1 ng/mL Dex对LPS联合IFNγ刺激引起的NR8383细胞iNOS表达量和活力损伤没有明显影响。Dex、Yohimbine单独对NR8383细胞iNOS表达量和活力没有影响。结论 Dex (10 ng/mL) 能保护LPS联合IFNγ所致肺巨噬细胞NR8383活力损伤,此效应是通过 2肾上腺素能受体介导的。     

Caspase依赖的氧化应激对脓毒症肾小管上皮细胞损伤的作用及机制

目的：观察不同活性氧（reactive oxygen species,ROS）及氧化应激水平对脓毒症肾小管上皮细胞增殖、凋亡、周期等生物学效应的影响,探索氧化应激水平和线粒体?Caspase途径能否作为脓毒症肾小管上皮损伤的治疗靶点。方法：用终浓度为10 μg/mL的脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）处理人肾小管上皮HK?2 细胞 12 h建立脓毒症细胞模型,将细胞模型随机分为H2O2组（H2O2,300 μmol/L）、Caspase 抑制剂组（Ac?DEVD?CHO,15 μmol/L）、Caspase抑制剂+H2O2组（H2O2,300 μmol/L+Ac?DEVD?CHO,15 μmol/L）和阴性对照组（不处理）;另以正常培养的HK?2细胞为空白对照组。Western blot检测Cleaved?Caspase 3和Cleaved?多聚ADP核糖多聚酶（poly ADP?ribose polymerase,PARP）蛋白表达,MTT 检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞 ROS水平、细胞凋亡和细胞周期。结果：阴性对照组细胞ROS水平、凋亡率、凋亡相关蛋白Cleaved?Caspase 3和Cleaved?PARP水平以及G1期细胞比例均较空白对照组升高（P均 < 0.05）,增殖率较空白对照组降低（P < 0.05）。H2O2组细胞ROS水平、凋亡率、Cleaved?Caspase 3和Cleaved?PARP水平以及G1期细胞比例均较阴性对照组升高（P均 < 0.05）,而增殖率较阴性对照组降低（P < 0.05）。Caspase抑制剂+H2O2组细胞ROS 水平、凋亡率、Cleaved?Caspase 3和 Cleaved?PARP水平以及G1期细胞比例均较 H2O2组降低（P均 < 0.05）,但均高于阴性对照组（P均 < 0.05））;增殖率较H2O2组升高（P <0.05）,但仍低于阴性对照组（P < 0.05）。结论：脓毒症细胞模型中存在异常升高的氧化应激反应。ROS能通过线粒体?Caspase凋亡途径抑制脓毒症肾小管上皮细胞增殖,促进细胞凋亡和引起细胞周期G1期阻滞。抑制Caspase对ROS引起的脓毒症肾小管上皮细胞损伤有一定保护作用。     

VEGF对大鼠胰岛瘤细胞增殖、凋亡及胰岛素分泌功能的影响

目的 探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）对大鼠胰岛瘤细胞（INS-1）增殖、凋亡、胰岛素分泌以及相关基因表达的影响。方法 用不同浓度（0、40、80、160 ng/mL)VEGF对大鼠INS-1细胞进行处理,采用CCK-8试剂盒检测INS-1细胞增殖,用Annexin Ⅴ及碘化丙啶(PI)双染试剂检测细胞凋亡;INS-1细胞经VEGF处理后做标准葡萄糖刺激的胰岛素分泌实验, ELISA法检测胰岛素,实时定量PCR技术检测胰岛分泌过程中相关基因表达,Western blot检测VEGF对Insulin蛋白表达的影响。结果 不同浓度VEGF对INS-1细胞作用24 h、48 h、72 h,其细胞活性均无明显变化（P>0.05）。但当VEGF浓度为80 ng/mL和160 ng/mL时对细胞凋亡具有抑制作用(PSur)、内向整流性钾离子通道基因 (inwardly rectifying potassium channel 6.2, Kir6.2)的表达随VEGF浓度增高呈下降趋势,葡萄糖激酶基因（glucokinase,GCK）的表达先降低后升高,葡萄糖转运蛋白基因2（glucose transporter 2,Glut2）表达呈先升高后降低趋势,Insulin蛋白的表达量随VEGF浓度增高呈逐渐下降趋势。结论 VEGF在高糖状态下对细胞凋亡和胰岛素分泌有抑制作用,为探索VEGF在糖代谢中的作用提供了新的线索。     

原花青素对LPS/ATP诱导的NLRP3炎症小体激活及NF⁃κBp65磷酸化的抑制作用

目的：研究原花青素对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）与腺嘌呤核苷三磷酸（adenosine triphosphate,ATP）联合诱导的小鼠小胶质细胞BV2 NOD样受体蛋白3（nucleotide?binding oligomerization domain?like receptor protein 3,NLRP3）炎症小体激活及核因子（nuclear factor,NF）?κBp65磷酸化的抑制作用。方法：以1.0 μg/mL LPS、2.5 μmol/L ATP诱导BV2细胞炎症损伤模型,用不同浓度原花青素（0.1、1.0、2.5、5.0 μg/mL）干预细胞。采用噻唑蓝（thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT）法检测细胞存活率;比色法检测一氧化氮（nitric oxide,NO）释放水平;微量酶标法测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活力;ELISA法检测白细胞介素（interleukin,IL）?1β、IL?18的分泌水平;Western blot法检测NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis?associated speck?like protein containing a CARD,ASC）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）?1、pro?caspase?1、p?NF?κBp65、NF?κBp65蛋白表达水平。结果：不同浓度的原花青素对BV2细胞存活率的影响与对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。与对照组相比,LPS/ATP诱导可增加BV2细胞NO、IL?1β、IL?18水平以及LDH活力（P < 0.05）,增加NLRP3、ASC、pro?caspase?1、caspase?1、     

内毒素耐受对人中性粒细胞抗炎反应的影响

目的：探讨脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的耐受对人中性粒细胞分泌抗炎因子白介素（interleukin,IL）-10及细胞凋亡水平的影响。方法：采用1 μg/mL牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonasgingivalis,P.gingivalis）LPS或者1 μg/mL大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）LPS刺激人中性粒细胞12 h,诱导细胞耐受。洗脱后,分别采用2种LPS再次刺激20 h,采用ELISA技术检测细胞分泌IL-10水平。同法诱导细胞耐受,洗脱后,再次刺激3 h,采用AV-PI法检测细胞凋亡水平。结果：P.gingivalis LPS或E.coli LPS单次刺激人中性粒细胞后,IL-10分泌水平均较刺激前明显增加（P<0.05）,凋亡水平则无明显改变（P>0.05）。2种LPS分别重复刺激之后,IL-10分泌水平均较单次刺激后显著增加（P<0.05）。P.gingivalis LPS重复刺激3 h后,中性粒细胞短期内凋亡水平与单次刺激后无明显改变（P>0.05）,而E.coli LPS重复刺激3 h后,细胞短期内凋亡水平较单次刺激后明显下降（P<0.05）。结论：内毒素耐受能促进人中性粒细胞分泌IL-10,但不同LPS诱导的耐受对细胞凋亡水平的影响可能存在差异。     

脂肪细胞因子和胰岛素抵抗的关系研究进展

瘦素与IR 目前研究认为瘦素受体与胰岛素抵抗（IR）关系密切。位于下丘脑的瘦素受体与瘦素结合后，使下丘脑弓状核分泌神经α减少，从而降低INS水平，改善IR；而位于胰岛β细胞上的瘦素受体与瘦素结合后，则能抑制葡萄糖刺激的胰岛素（INS）分泌，对糖耐量异常和2型糖尿病（DM）病人的血INS水平、血糖均有一定的影响。     

棕榈酸对转化生长因子β1刺激的肝星状细胞增殖、凋亡及Caspase-12蛋白表达的影响

目的研究棕榈酸对转化生长因子β1（TGF-β1）刺激的肝星状细胞（HSC）增殖、凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（caspase-12）蛋白表达的影响。方法将液氮保存下的肝星状细胞株,于37℃、5% CO2孵箱中进行复苏传代培养,同步化后将细胞分为5 组：空白组、TGF-β1（5 ng/ml）组、TGF-β1+ 低、中、高剂量棕榈酸组,即5 ng/ml TGF-β1刺激24 h,再分别加入50、100及200μmol/L不同剂量棕榈酸作用24 h 后,用MTT比色法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡率、免疫细胞化学法测定Caspase-12 蛋白表达。结果不同浓度棕榈酸均能抑制细胞增殖（P <0.05）,且随着剂量的增加,细胞相对增殖率（RGR）降低,低、中、高剂量组分别为76.56%、60.93%和34.37%,组间比较差异有统计学意义（P <0.05）。透视电镜发现,不同剂量棕榈酸组出现细胞核变小,细胞出现大量线粒体空泡,染色质边集等典型凋亡表现。空白组、TGF-β1组、TGF-β1+低、中、高剂量棕榈酸组凋亡率分别为（3.32±0.29）%、（1.70±0.14）%、（7.26±0.46）%、（11.24±0.52）%及（15.55±0.31）%,组间两两比较差异有统计学意义（P <0.05）;随着棕榈酸剂量的增加,细胞Caspase-12 蛋白表达增加（P <0.05）。结论棕榈酸能抑制细胞增殖,增加Caspase-12 蛋白表达,促进HSC 凋亡。     

内毒素耐受对小鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP⁃1、MMP⁃7及细胞迁移能力的影响

目的：观察牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的耐受对小鼠腹腔巨噬细胞分泌基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）?1和MMP?7的影响,以及耐受巨噬细胞对小鼠成纤维细胞L929迁移能力的影响。方法：采用1 μg/mL P.gingivalis LPS重复刺激小鼠腹腔巨噬细胞,构建内毒素耐受模型,并以1 μg/mL大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）LPS作为阳性对照。收集细胞条件培养液上清,采用ELISA技术检测MMP?1和MMP?7表达水平。观察耐受巨噬细胞条件培养液对L929细胞划痕创伤构建后细胞迁移能力的影响。结果：P. gingivalis LPS重复刺激后,巨噬细胞MMP?1分泌水平较单次刺激组降低（P < 0.05）,MMP?7分泌水平无明显变化（P > 0.05）。P. gingivalis LPS诱导的耐受巨噬细胞培养液上清刺激12、24 h后,L929细胞划痕修复面积大于单次刺激组培养液上清刺激后（P < 0.05）。结论：P. gingivalis LPS诱导的耐受能抑制小鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP?1,促进L929细胞迁移。     

沉默脂联素受体1对脂多糖诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖凋亡的影响

目的：观察脂联素受体1（adiponectin receptor1, AdipoR1）沉默对脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（MH7A）增殖、凋亡的影响。 方法： ①利用免疫荧光、Western blot鉴定并验证shRNA技术对构建的AdipoR1沉默MH7A（sh-AdipoR1组）细胞的干扰效率;②分别用CCK8试剂盒、流式细胞仪检测LPS（100 ng/mL）对sh-AdipoR1组及空载病毒对照（sh-NC组）细胞增殖及凋亡的影响;③利用实时定量聚合酶链反应法（real-time polymerase chain reaction,realtime PCR）检测LPS对sh-AdipoR1及sh-NC组细胞中凋亡相关基因BCL-2、BCL-XL、BAX、BAK表达的影响。同时设置无LPS刺激的sh-NC、sh-AdipoR1组作为对照。 结果： ①荧光显微镜下可见sh-AdipoR1组细胞荧光蛋白表达效率趋近于100%,Western blot检测结果显示：与sh-NC组相比,sh-AdipoR1组AdipoR1蛋白的表达显著下降(P＜0.05),表明AdipoR1沉默的细胞构建成功;②无LPS刺激情况下,sh-NC组与sh-AdipoR1组细胞增殖速率及凋亡细胞比例无明显差异;LPS刺激可显著增加sh-NC组和sh-AdipoR1组细胞相对增殖速率及凋亡细胞比例（P＜0.05）;在LPS作用24、48 h,sh-AdipoR1组细胞增殖速率均显著低于sh-NC组（P＜0.05）,而sh-AdipoR1组细胞凋亡率显著高于sh-NC组（P＜0.05）;③real-time PCR结果显示,无LPS刺激情况下,sh-NC组与sh-AdipoR1组抑制凋亡基因BCL-2、BCL-XL与促进凋亡基因BAK、BAX的相对表达量均无显著差异（P＞0.05）;LPS刺激可降低抑凋亡基因BCL-2、BCL-XL表达,增加促凋亡基因BAX、BAK表达（P＜0.05）;在LPS诱导下与sh-NC组相比,sh-AdipoR1组抑制凋亡基因BCL-2、BCL-XL表达下降,促凋亡基因BAX、BAK表达显著升高（P＜0.05）。 结论：AdipoR1基因的沉默可抑制LPS诱导的MH7A细胞增殖,促进细胞凋亡,并提示AdipoR1相关信号通路可能在类风湿关节炎发生发展中起到重要作用,阻断该途径可有效阻断LPS诱导的MH7A细胞炎症反应。     

Vaspin对棕榈酸诱导的INS-1细胞自噬水平的影响

目的：研究脂肪细胞因子Vaspin对棕榈酸诱导的INS-1细胞自噬水平的影响。方法：培养INS-1细胞,分为正常组：用普通培养基培养24h;棕榈酸（palmiticacid,PA）组：以0.5mmol/LPA培养24h;PA+Vaspin组：先加入320ng/mLVaspin预培养2h,再以0.5mmol/LPA+320ng/mLVaspin共培养24h;PA+Vaspin+雷帕霉素（rapamycin）组：先以50nmol/LRapamycin预培养2h,再以0.5mmol/LPA+320ng/mLVaspin共培养24h;PA+Vaspin+3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）组：先以1mmol/L3-MA预培养2h,再以0.5mmol/LPA+320ng/mLVaspin共培养24h。葡萄糖（3.3mmol/L和16.7mmol/L）刺激胰岛素分泌实验检测各组胰岛素分泌水平,Westernblot检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammaliantargetofrapamycin,mTOR）、p-mTOR、Beclin-1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及P62蛋白水平,mRFP-GFP-LC3检测自噬流水平,流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果：与正常组相比,PA组INS-1细胞上清液中胰岛素分泌水平在3.3mmol/L葡萄糖和16.7mmol/L葡萄糖刺激下均降低[（1.02±0.08）ng/mLvs.（0.54±0.06）ng/mL,P=0.000;（1.15±0.13）ng/mLvs.（0.71±0.05）ng/mL,P=0.000）],PA+Vaspin组较PA组升高[（0.76±0.03）ng/mLvs.（0.54±0.06）ng/mL,P=0.001;（0.91±0.04）ng/mLvs.（0.71±0.05）ng/mL,P=0.011）];与正常组相比,PA组INS-1细胞p-mTOR与mTOR蛋白比值低（2.04±0.14vs.1.19±0.09,P=0.000）,PA+Vaspin组p-mTOR与mTOR蛋白比值较PA组高（1.51±0.05vs.1.19±0.09,P=0.005）;同时,PA组自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与正常组相比明显增加（0.81±0.07vs.0.65±0.04,P=0.005;2.35±0.25vs.1.16±0.11,P=0.000）,P62蛋白水平降低（1.04±0.19vs.0.60±0.08,P=0.000）;PA+Vaspin组Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平较PA组低（0.58±0.04vs.0.81±0.07,P=0.001;1.95±0.08vs.2.35±0.25,P=0.007）,P62蛋白增加（0.82±0.03vs.0.60±0.08,P=0.032）;PA组自噬溶酶体数量较正常组多（8.33±1.53vs.0.33±0.58,P=0.000）,Vaspin干预后降低（3.67±1.53vs.8.33±1.53,P=0.001）;同时,PA干预INS-1细胞24h后细胞凋亡明显增加（7.91±0.50vs.22.15±2.05,P=0.000）,PA+Vaspin组较PA组细胞凋亡减少（13.23±1.97vs.22.15±2.05,P=0.000）。结论：Vaspin能够改善棕榈酸诱导的INS-1细胞过度自噬和细胞凋亡,改善胰岛β细胞分泌功能。     

丹皮酚抑制脂多糖诱导的血管内皮细胞TNF-α释放对共培养体系中血管平滑肌细胞凋亡及p38 MAPK信号通路的影响

目的 观察丹皮酚（Paeonol,Pae）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）损伤的大鼠血管内皮细胞（vascular endothelial cells,VECs）炎性因子释放及对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）凋亡的影响,阐明Pae抑制VSMCs凋亡是否通过影响VECs释放的炎性因子调控p38 MAPK信号通路。方法 组织块预消化贴壁法原代培养VECs和VSMCs;Transwell小室建立VSMCs和VECs共培养体系;LPS诱导VECs损伤;MTT方法检测细胞存活率;ELISA检测VECs分泌肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha, TNF-α）的水平;流式细胞仪检测VSMCs凋亡率;Western blotting检测VSMCs中p38 MAPK信号通路及凋亡相关蛋白表达。结果 与正常对照组比较,LPS可显著提高VECs分泌的TNF-α水平（P＜0.05）,明显升高共培养体系中VSMCs p38 MAPK信号通路蛋白及凋亡相关蛋白（p-MKK3/6、p-p38、p53和Cleaved caspase-3）水平（P<0.05）,显著提高VSMCs凋亡率（P<0.05）;与LPS刺激组比较,Pae可显著抑制VECs分泌的TNF-α（P＜0.05）,明显降低共培养体系中VSMCs p38 MAPK信号通路蛋白及凋亡相关蛋白（p-MKK3/6、p-p38、p53和Cleaved caspase-3）水平（P＜0.05）,显著降低VSMCs凋亡率（P＜0.05）。结论 Pae可抑制VECs释放TNF-α,从而抑制p38 MAPK信号通路,进而减少VSMCs凋亡。     

胰敏颗粒对体外培养大鼠脂毒性胰岛细胞分泌胰岛素的影响

目的观察胰敏颗粒对体外培养的棕榈酸导致的脂毒性的大鼠胰岛细胞分泌胰岛素的影响。方法分离正常大鼠胰岛细胞,置于RPMI 1640培养液中,加入20 mmol/L棕榈酸盐,培养24 h后,更换培养液,将胰岛细胞分为棕榈酸组(A组)、胰敏颗粒含药血清组(B组)、罗格列酮含药血清组(C组)3组;另设空白对照组(D组),未经棕榈酸盐处理,作为空白对照。各组分别加入含3.3或16.7 mmol/L葡萄糖的孵化液+非含药血清或含胰敏颗粒血清或含罗格列酮血清100μL/mL,进行葡萄糖刺激胰岛素释放试验,放射免疫法检测培养液中胰岛素的浓度。结果在低糖和高糖刺激条件下,A组胰岛素分泌水平均显著低于D组,2组比较,差异具有高度统计意义(P0.01);在低糖和高糖刺激下,B组胰岛素分泌水平显著高于A组,2组比较,差异具有统计意义(P0.05或P0.01);C组仅在高糖刺激下,胰岛素分泌水平显著高于A组,2组比较,差异具有高度统计意义(P0.01);B组与C组在低糖和高糖刺激下胰岛素分泌水平差异均无统计意义。结论胰敏颗粒能够保护棕榈酸对胰岛β细胞分泌功能的损害。