用Bactec TB460快速培养阳性的菌液直接进行分枝杆菌菌种鉴定

ＢａｃｔｅｃＴＢ460分析仪能快速培养出分枝杆菌 ,并能以较快的速度进行粗筛分型 ,初步定出分枝杆菌的菌种 ,而再进一步的鉴定 ,则需要转种罗氏培养基 ,行传统的方法鉴定。我们采用ＢａｃｔｅｃＴＢ460分析仪快速培养阳性的分枝杆菌菌液直接进行分枝杆菌的菌种鉴定 ,现介绍如下。1　材料与方法1 1　标准菌种　结核分枝杆菌 (Ｈ3 7ＲＶ)、堪萨斯分枝杆菌、戈登分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、蟾蜍分枝杆菌等均购于北京生物制品所。1 2　实验菌株　为本院经ＢａｃｔｅｃＴＢ460培养 ,ｐ 硝基 α 氨基 β 羟基 苯丙酮 (ＮＡＰ)试剂鉴定确认为非结核…     

通过增加痰液量和超声裂菌提高结核分枝杆菌荧光定量PCR检出率

目的通过增加痰液量和超声破碎法提取痰液中的结核菌DNA,提高结核分枝杆菌实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)的检出率。方法选择206例肺结核患者,以103例非结核患者作为对照组;肺结核患者同时进行结核菌涂片,并在美国BD公司的MAGIT960仪器上进行液体快速培养结核菌。另收集至少5 mL的痰液,加入2~3倍体积的4%氢氧化钠液化后,取1 mL按照采用常规方法抽提痰液中的结核菌DNA,剩余部分采用改进的超声破碎法提取结核菌DNA;两者同时进行实时荧光定量PCR检测。结果采用增量超声法,对于涂片阳性、培养阳性的结核患者,阳性检出率由87.5%(可信区间为81.4%~93.6%)提升至95.5%(可信区间为91.7%~99.4%)(P0.05)。对于涂片阴性、培养阳性的患者,阳性检出率由57.4%(可信区间为47.5%~67.4%)提高至83%(可信区间为75.4%~90.6%)(P0.01)。增量超声法比常规方法,定量值平均提高14倍以上。结论通过增加痰液量和超声破碎法提取痰液中的结核菌DNA,可提高实时荧光定量PCR结核分枝杆菌的检出率,值得进一步推广应用。     

耐多药结核分枝杆菌临床分离株30株对氟喹诺酮类及二线注射类抗结核药敏感性的分析

目的 了解耐多药结核分枝杆菌对氟喹诺酮类和（或）二线注射类抗结核药物的敏感性情况.方法 收集2011年6～9月采用Bactec-MGIT 960检测的30株耐多药结核分枝杆菌临床分离株,检测其对氟喹诺酮类及二线注射类抗结核药的药敏结果并进行分析.结果 30株耐多药结核分枝杆菌菌株对氟喹诺酮类和二线注射类抗结核药物耐药共21株（70％）.单药耐药依次为：氧氟沙星耐药19株（63.33％）,莫西沙星耐药13株（耐药率43.33％）,左氧氟沙星耐药10株（耐药率33.33％）,阿米卡星耐药9株（耐药率30％）,卷曲霉素最少（26.67％）.氧氟沙星耐药率高于左氧氟沙星耐药和三种氟喹诺酮类药同时耐药,差异有统计学意义（P=0.038）.氟喹诺酮类任意耐药及两种注射类药物任意耐药共8株[即广泛耐药结核病（XDR-TB）].氟喹诺酮类任意耐药及两种注射类药物敏感为11株,氟喹诺酮类均敏感及两种注射类药物任意耐药为2株,相比差异有统计学意义（P =0.001）.结论 耐多药结核病（MDR-TB）临床分离株对氟喹诺酮类药物耐药严重,氟喹诺酮类药物的耐药也是早期XDR-TB菌株的耐药主要形式.因此,氧氟沙星不建议作为MDR-TB的治疗用药.而MDR-TB临床分离株对阿米卡星和卷曲霉素敏感性较好,推荐可用于MDR-TB的首选药物.     

脂阿拉伯甘露聚糖的提纯及其对肺结核的诊断价值

目的 初步建立提取纯化结核分枝杆菌（M .TB）脂阿拉伯甘露聚糖（lipoarabinomanan,LAM）的方法 ,并将其用于血清标本检测,评价其对肺结核的诊断价值。 方法 M .TB菌体经冰浴超声破碎,乙醇回流,DNase I 酶RNase酶除去DNA和RNA, 热酚水法去蛋白,氯仿甲醇去酚和脂质,得到粗制的脂多糖。经Sephacryl-100凝胶过滤层析分离纯化,得到LAM。将其作为抗原,通过免疫金渗滤法检测涂阳肺结核和对照血清标本中的LAM抗体。 结果 所得LAM经SDS-PAGE银染,与对照标准品大小一致,为37 kDa。血清LAM抗体检测对肺结核诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、和涂片符合率分别为91.7%、87.8%、92.7%、86.2%、90.2%。 结论 成功提取到LAM抗原,用其检测血清结核抗体显示出理想的敏感性和特异性,有望成为结核病血清学快速诊断方法之一。     

恒温扩增实时荧光检测技术在肺结核诊断中的临床价值

目的 评估RNA恒温扩增实时荧光检测技术(SAT)在临床痰液标本结核分枝杆菌检测中的价值.方法 对2011年9至12月上海市肺科医院230例临床确诊肺结核患者和78例其他呼吸系统疾病患者的痰液分别用SAT法、BD960培养法、罗氏培养法和集菌涂片法同时进行检测.SAT法与BD960培养法结果不符标本,再用结核分枝杆菌核酸扩增荧光体外检测试剂盒(PCR-TB)进行检测,同时对BD960培养阳性菌株和SAT扩增产物进行扩增及测序,对菌种进行鉴定.采用x2检验比较SAT法与上述3种方法对结核病患者的阳性检出率.结果 以BD960培养法作为金标准(剔除BD960培养法中有7份污染菌),则SAT方法的敏感度为90.5％( 95/105),特异度为84.2％( 165/196),阳性预测值为75.4％ (95/126),阴性预测值为94.3％( 165/175).SAT法与BD960培养法结果符合率为86.4％( 260/301).223份临床确诊的肺结核患者痰标本SAT法、BD960培养法、罗氏培养法和涂片法的阳性检出率分别为56.5％( 126/223)、45.7％( 102/223)、41.7％( 93/223)和37.2％( 83/223),SAT法显著高于其他3种方法,差异有统计学意义(x2=4.087,P＜0.05).结论 SAT技术用于结核分枝杆菌实验室诊断具有特异度高、敏感度好,操作简便、快速,污染率低的特点,有望成为实验室诊断的新方法.     

关于延长非结核分支杆菌菌种鉴定生化反应试剂保存时间的探讨

近年来,非结核分支杆菌引起感染的报道甚多,然而非结核分支杆菌肺病在临床症状及Ｘ线表现与结核分支杆菌极其相似,难以区别,只有通过实验室诊断进行鉴别。另外,由于非结核分支杆菌菌种的不同,临床上治疗方案也各有不同^[1],因此需要及早对其菌种作出鉴定,但配制一批鉴定非结核分支杆菌菌种鉴定的生化反应试剂比较麻烦,而且试剂的保存时间较短,每次都要浪费很多剩余试剂。由于以上原因,一般我们都将初步确定为非结核分支杆菌的菌种保存起来,积累到一定数量,再进行鉴定,使非结核分支杆菌菌种鉴定结果的报告时间较长,延误病人治疗。     

两种不同方法测定分支杆菌药敏试验的比较

分枝杆菌药敏试验通常是在固体罗氏培养基中按要求加入各种药物 ,根据细菌在培养基上的生长情况来判断药敏试验的结果。采用 BACTEC MGIT 96 0测定仪检测分枝杆菌药敏试验是目前比较先进的方法 ,其主要是采用连续检测接种标本的培养管所显示的荧光强度来判断分枝杆菌生长的情况。本实验对 80份住院初、复治结核病患者的痰标本 ,进行分离培养出的分枝杆菌 ,做上述两种方法的药敏试验 ,观察两种方法对 4种常用结核药物的符合率 ,现将结果报告如下。材料与方法1.标本来源均为我院 2 0 0 1年 5月至今分枝杆菌培养阳性的菌种。2 .试剂　　 M…     

两种测定分支杆菌药敏试验的方法比较

目的:分支杆菌药敏试验通常采用以罗氏培养基为基础绝对法中的间接法,也就是在固体罗氏培养基中按要求加入各种药物,根据细菌在培养基上的生长情况来判断药敏试验的结果;采用BACTECMGIT 960测定仪检测分支杆菌药敏试验是目前比较先进的方法,其主要是采用连续检测接种标本的培养管所显示的荧光强度来判断分支杆菌生长的情况.     

上海地区结核分枝杆菌分离株对一线和二线抗结核药物的耐药性分析

目的 了解结核分枝杆菌分离株对一线和二线抗结核药物的耐药性。方法 收集2008年1月至2009年3月采用Bactec-MGIT 960检测的518株结核分枝杆菌,分析药物敏感试验结果。数据行x2检验。结果518株结核分枝杆菌菌株对一线和二线抗结核药物全敏感168株,占32.44％;耐药350株,占67.56％;单耐药72株,占13.90％;耐两种药24株,占4.63％;耐三种及以上药254株,占49.03％。217株为耐多药菌株,占所有病例的41.89％。65株为广泛耐药菌株,占所有病例的12.55％,占耐多药菌的29.95％。在一线药物中,耐异烟肼有278株,耐药率达53.67％;二线药物中,耐氧氟沙星有206株,耐药率达39.77％。433例复治患者任一药物耐药率、耐多药率和广泛耐药率分别为72.05％、46.42％和13.86％,均高于初治患者的44.70％、18.82％和5.88％（x2 =24.253,x2=22.229,x2=4.117,均P＜0.01）。结论 上海地区结核病专科医院结核分枝杆菌分离株的耐药率高,且耐多药与广泛耐药率也较高,在复治患者中耐药情况更严重。