Isolation and identification of a sulfate reducing bacteria and sequence analysis of its dissimilatory sulfite reductase gene

A sulfate reducing bacteria was isolated from mining sewage of Daqing Oilfield by Hungate anaerobic technology. Physiological-biochemical analysis showed that the strain could utilize polyacrylamide as sole carbon and nitrogen source. The sequence analysis of 16S rDNA illustrated that the similarity of F8 and Desulfovibrio desulfuricans (AF192153) was 99%, and the similarity sequence of dissimilatory sulfite reductase gene (DSR) cloned from the strain and Desulfovibrio desulfuricans (AF273034) was 98%. Their phylogenitic analysis was basically anastomosed, and thus temporarily named as Desulfovibrio desulfuricans F8. The DSR cloned from F8 strain was 2740 bp in length consisting of three ORF, DSRA, DSRB and DSRD as a single operon (DSRABD) regulated by the same operator. DSRA contained typical conservative box of sulfate—sulfite reducing enzyme (SiteⅠand SiteⅡ), which could bind siroheme and [Fe4S4]. DSRB retained a [Fe4S4] binding site, with an uncomplimentary structure for siroheme binding. There was no conservative box in DSRD. Sequence analysis of DSR will provide a theoretical basis for quantitative detection, metabolic pathway modification through gene engineering, and sulfate reducing bacteria (SRB) suppression.     

杂色蛤中副溶血弧菌的定量风险评估

基于国际食品法典委员会关于微生物定量风险评估的理论框架,研究了从水产品批发市场到各零售点（主要为超市）杂色蛤中副溶血弧菌的动态变化情况,对因食用杂色蛤感染副溶血弧菌而引发疾病的风险进行预测,预测出每年、每人因消费生杂色蛤而导致由副溶血弧菌引发的食源性疾病的可能平均值被估计为1.65×10-8.同时对杂色蛤的另一种食用模式——烧烤,也进行了分析研究,确定因其所导致的风险十分小,可以不作为评估的对象.最后根据研究的结果提出针对政府监管部门的管理以及商业运营者和消费者的建议,这些风险管理措施、控制程序和安全食用规范的实施,均可大大降低因食用杂色蛤而感染副溶血弧菌并引发疾病的风险.     

PCR-核酸薄膜层析法检测创伤弧菌

采用自行建立和优化的PCR-核酸薄膜层析检测体系,对创伤弧菌(Vibriovulnificus)进行检测。采用创伤弧菌的vvhA基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测创伤弧菌的PCR-核酸薄膜层析检测法,并进行了特异性和灵敏度试验。结果表明,所建立起的检测法灵敏度为3.6×102 cfu·mL-1,比PCR-琼脂糖凝胶电泳检测方法高一个数量级。创伤弧菌的PCR-核酸薄膜层析检测方法具有较高灵敏度和良好特异性,操作简单,检测速度快,同时又保护了操作人员的身体健康,具有广阔的推广前景。     

中国明对虾凝血栓蛋白基因全长cDNA的克隆及其表达特征

获得了中国明对虾凝血栓蛋白(TSP)基因全长cDNA,该基因由2868个碱基组成,具有一个2763bp的开放阅读框,编码920个氨基酸,其中包含21个氨基酸组成的信号肽.中国明对虾TSP由四类不同的结构域组成,从N端开始顺序为几丁质结合结构域,EGF-like结构域,Type Ⅲ repeat和TSP carboxyl-terminal domain(TSP-C结构域).结构域分析发现,中国明对虾的N端不具有TSP N-terminal domain(TSPN结构域),但有一个几丁质结合结构域,其C端的Type Ⅲ和TSP-C结构域非常保守.该基因在弧菌感染后的对虾淋巴器官和肝胰脏中的表达量显著增加,并具有不同的时空表达趋势,提示中国明对虾TSP基因在免疫反应中具有重要作用.     

中华绒螯蟹苗种生产中副溶血性弧菌病的诊断与防治

为了研究中华绒鳌蟹副溶血性弧菌病的症状、诊断及防治方法，从发病蟹苗体上分离出病原体，提纯培养后经全自动微生物分析仪分析鉴定，再用三糖铁培养基培养确定为副溶血性孤菌，然后进行药酶试验。试验表明，其对氧哌嗪青霉素和呋喃西林高度敏感，对庆大霉素、新霉素等中度敏感，对复方新诺明、青霉素G等轻度敏感，而对链霉素、土霉素等则不敏感。在此基础上提出采用生态学方法进行预防，并采用中草药及抗生素进行治疗的防治措施。     

海湾扇贝幼体期流行性弧菌病的研究

从辽宁兴城育苗场和辽宁省海洋水产研究所育苗室患面盘解体的海湾扇贝ArgopectenirradiansLamarck幼体中分离出6株菌,经感染试验表明,其中3株菌B01、Y01和Y02为病原菌。根据菌体形态及生理、生化测试,B01鉴定为需钠弧菌Vibrionatriegen,Y01和Y02具有相同的形态、生理、生化特征,鉴定为弧菌属Vibrio。需钠弧菌对庆大霉素、痢特灵、菌必治、诺氟沙星、氯霉素、环丙沙星、多粘菌素B敏感;Y01和Y02菌对诺氟沙星、菌必治、氯霉素、复方新诺明、环丙沙星、磺胺异唑敏感。对海湾扇贝育苗水体中细菌总数和弧菌数量的监测结果表明,幼体发生病变之前的水体中,细菌和弧菌的密度高于正常育苗水体的。文中还对病原菌的传播途径等问题进行了讨论。     

蛭弧菌对鲤感染嗜水气单胞菌预防效果的观察

以不同浓度的蛭弧菌 (Bdellovibriobacteriovorus) (简称Bd)Bd - 9- 2 592 2投放水族箱中 ,对鲤用浸泡法进行人工感染嗜水气单胞菌 (Aeromonashydropila) (简称SC)SC- 96- 2 4试验 ,并观察蛭弧菌与病原菌、水质状况及鱼类发病情况变化之间的关系。试验结果表明 ,蛭弧菌对嗜水气单胞菌有较强的裂解和净化作用 ,对水中氨氮有一定的降解作用 ,并且对鲤感染嗜水气单胞菌所致暴发性出血病有明显的预防作用     

噬菌蛭弧菌Bd-9五种保藏方法的比较研究

作者对噬菌蛭弧菌Bdellovibriobacteriovorus的不同保藏方法进行了试验研究,并对其保藏效果进行了比较,结果表明,5种保藏方法中以冷冻干燥法保藏效果最好,21个月的复活率为100%,其次为4℃营养肉汤液保藏法和-20℃甘油保藏法,17个月复活率均为67%。     

发光细菌DH132的筛选、鉴定及其在氯霉素生物毒性测定中的应用

利用药敏纸片法,从本实验室保存的发光细菌中筛选出一株对氯霉素敏感的细菌DH132。通过生理生化特征鉴定并利用16SrDNA序列分析的方法,鉴定细菌DH132为哈维氏弧菌。通过在细菌培养液中添加不同浓度的氯霉素溶液,研究了氯霉素浓度与细菌发光强度抑制率之间的关系。结果表明,当氯霉素浓度为80ng/mL和160ng/mL时,对细菌发光的抑制率分别达到10%和50%。氯霉素浓度在0~60ng/mL,60~140ng/mL,140ng/mL~200ng/mL和200~1000ng/mL之间,细菌发光抑制率与氯霉素浓度分别具有很好的线性关系。相对应的回归方程分别为y=0.0627x-0.0233;y=0.3599x-18.276;y=0.7527x-70.219;y=0.0195x 75.964,回归曲线R2值分别为0.9805,0.9918,0.9502和0.9731。     

基于琼脂糖和纳米金的电流型免疫传感器快速检测副溶血性弧菌

将HRP-anti-VP掺杂于琼脂糖和纳米金中并修饰于丝网印刷电极表面,从而制备副溶血性弧菌免疫电极.采用循环伏安法表征免疫电极和监测酶促反应,根据还原电流的变化来定量测定副溶血性弧菌.在优化的实验条件下,免疫电极线性检测范围为105～109 cfu/mL,检出限为7.4×104 cfu/mL(S/N=3).该免疫电极具备较好的特异性、重现性(RSD＜6%)、稳定性(一周后电流响应为初始值的91%)和准确性(与ELISA符合率为97.5%),可初步用于副溶血性弧菌的快速筛检.