中国明对虾凝血栓蛋白基因全长cDNA的克隆及其表达特征

获得了中国明对虾凝血栓蛋白(TSP)基因全长cDNA,该基因由2868个碱基组成,具有一个2763bp的开放阅读框,编码920个氨基酸,其中包含21个氨基酸组成的信号肽.中国明对虾TSP由四类不同的结构域组成,从N端开始顺序为几丁质结合结构域,EGF-like结构域,Type Ⅲ repeat和TSP carboxyl-terminal domain(TSP-C结构域).结构域分析发现,中国明对虾的N端不具有TSP N-terminal domain(TSPN结构域),但有一个几丁质结合结构域,其C端的Type Ⅲ和TSP-C结构域非常保守.该基因在弧菌感染后的对虾淋巴器官和肝胰脏中的表达量显著增加,并具有不同的时空表达趋势,提示中国明对虾TSP基因在免疫反应中具有重要作用.     

栉孔扇贝血淋巴细胞HSP70表达变化的FCM法检测

建立了热激、冷激、细菌感染和水质恶化等逆境中栉孔扇贝血淋巴细胞HSP70表达变化的流式细胞术检测法。结果发现,该方法可灵敏检出上述条件下,血淋巴细胞中HSP70表达的增加。Duncan检验显示,热激条件下HSP70表达增加最为显著。     

海水养殖业的生物保安

提要随着人们生活水平的日益提高、经济全球化及世界范围内国际贸易的急剧增长，越来越多的国家和国际组织认识到涉及食品安全、动植物生命和健康以及有关环境方面风险的生物保安(Biosecumy)的重要性。联合国粮农组织因此将其作为本组织16项学科间行动重点领域之一列入中期计划，处理旨在“促进、发展和加强粮食、农业、渔业和林业政策及管理框架”的共同战略。海水养殖业的生物保安定义为管理所有和海水养殖生产过程中相联系的生物本身健康和环境风险问题。这个风险包括一切外来物种、引进病害生物和养殖生物的病原，破坏生物多样性和跨地域流行的造成养殖生物大面积减产的重大流行性感染疾病以及由于生物技术发展而造成的生物和环境污染问题等。生物保安可以理解为在养殖生产过程中采取的一整套卫生防御和病原检测、隔离、脱毒等技术及管理措施。严格执行这些措施，就会避免养殖地受到外部病原感染，并可有效防止病原在养殖区内的暴发、传播、泛滥。本文对生物保安产生的背景、定义、研究内容以及国内外的发展趋势进行了论述。呼吁我国有关部门密切关注海水养殖业的生物保安，研究和开发生物保安相关高新技术，及时制定我国海水养殖产业发展的生物保安标准和规范，并在生产过程中切实贯彻执行，确保我国海水养殖业的持续健康发展。     

中国明对虾线粒体MnSOD在大肠杆菌中的重组表达、产物纯化及活性测定

采用PCR方法扩增编码中国明对虾线粒体锰超氧化物歧化酶(MnSOD)成熟肽的基因,并克隆到大肠杆菌表达载体pCRR T7/NT TOPOR TA中进行体外重组表达.重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3) pLysS后,经IPTG诱导表达产生包涵体形式的目的蛋白.对重组蛋白进行 LC-ESI-MS 分析的结果表明,融合蛋白的三个肽段与中国明对虾线粒体MnSOD 相应肽段完全一致.将重组蛋白通过金属螯合柱进行纯化,进而透析、复性,最后获得了活性高达2373U/mg的重组蛋白.中国明对虾线粒体MnSOD的成功表达,为深入研究其在中国明对虾免疫反应和抗氧化胁迫中的作用奠定了基础.     

毛细管电泳RT-PCR方法在中国明对虾抗菌肽基因表达定量检测中的应用

建立了毛细管电泳RT—PCR检测基因表达谱的方法,并利用实时定量PCR技术对此方法进行基因表达定量的可靠性进行了验证。利用此新方法研究了弧菌和白斑综合征病毒（WSSV）感染对中国明对虾抗菌肽（penaeidin）基因mRNA表达的影响。结果表明,弧菌感染后对虾肽基因表达变化可分为三个阶段：迅速下调,缓慢回升,持续稳定。WSSV感染后对虾肽基因表达的变化显示出与弧菌感染组不同的变化趋势：迅速下调,迅速回升,再次下降。     

栉孔扇贝热休克蛋白70基因Cdna的克隆与分析

应用表达序列标签法，获得了栉孔扇贝HSP70基因cDNA的部分序列，然后利用锚定PCR技术克隆到了该基因的全长cDNA。克隆到的HSP70 cDNA全长2553bp，编码区全长1902bp，可以编码634个氨基酸。Blast分析表明该序列与其他生物的HSP70基因具有很高的相似性。在该cDNA序列编码的氨基酸序列中含有3个HSP70家族的特征模体，结合Blast分析的结果，可以确认所获得的cDNA序列是栉孔扇贝HSP70的编码序列。该基因的克隆为进一步深入研究栉孔扇贝的抗逆机理以及指导扇贝的遗传选育和遗传改良都具有重要的理论意义。     

中国对虾性别相关片段的初步研究

采用mRNA双随机引物差示技术分离中国对虾性别相关片段。然后利用这些引物组合对中国对虾的基因组进行了PCR检测，发现其中两对引物组合可以扩增出具有性别相关性的片段。     

栉孔扇贝EST中微卫星标记的筛选

使用RepeatMasker软件在栉孔扇贝的6935条ESTs中发现了42条微卫星序列。选取其中的7个序列，根据微卫星位点的旁侧序列设计引物，并对设计出的引物在中国、日本、韩国野生群体中进行多态性检测，发现有6对引物能产生扩增产物，其中有3对引物可望在以后的群体分析及连锁图谱的构建中加以应用。该结果初步证实了在栉孔扇贝的ESTs序列中存在微卫星位点，从而为扇贝生物中微卫星标记的筛选开辟了新的途径。     

中华绒螯蟹四倍体诱导研究

分别使用C．B、6－DMAP和中科院海洋所专有诱导剂PA三种试剂诱导中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）四倍体，囊胚期获得的最高诱导率依次是50．31％、54．87％和79．75％。在使用PA作为诱导剂的实验中，于受精卵排出后20h、浓度为50倍稀释液、处理持续时间240min，囊胚期检测，最高诱导率85．60％。将抱卵蟹浸入PA液进行处理，受处理卵培育至蚤状幼体检测，最高诱导率27．29％。     

跨越新世纪的海洋生物高技术前沿

结合我国实际，就世纪海洋生物高技术前沿和应用领域进行了阐述，并提出了进一步研究与开发我国海洋生物技术的建议。