尿毒清颗粒对糖尿病大鼠足细胞损伤的保护作用研究

目的：探讨尿毒清颗粒对糖尿病大鼠足细胞损伤的保护作用。方法：将SD大鼠制备成STZ糖尿病模型,实验分3组：正常对照组、糖尿病未干预组、尿毒清颗粒治疗组（2.6g·kg-1·d-1灌胃）,于实验第4周、8周末检测血糖、血肌酐、尿肌酐及尿白蛋白排泄率,光镜、电镜下观察肾组织病理改变并计数足突宽度,免疫组化观察足细胞相关蛋白分子nepherin、podocin的表达,Real time-PCR检测肾皮质nepherin、podocin mRNA表达。结果：尿毒清颗粒可以改善糖尿病大鼠肌酐清除率,降低尿白蛋白排泄,改善肾脏病理,减轻足突融合,维持足细胞相关蛋白分子的分布与表达。结论：初步证实尿毒清颗粒能通过上调足细胞相关蛋白分子水平减轻足细胞损伤,对糖尿病大鼠足细胞损伤具有保护作用。     

辛伐他汀对糖尿病鼠肾nephrin基因表达的影响

目的探讨辛伐他汀（simvastatin）对糖尿病鼠肾nephrin基因表达的影响。方法以SIZ诱导大鼠发生糖尿病（DM），以辛伐他汀灌胃，不同病程取标本测定尿白蛋白排泄率（UAE）、尿β2-微球蛋白（β2-MG）排泄率，测定血浆胆固醇浓度，以免疫组化及荧光定量RT—PCR法定性及定量测定肾脏nephrin mRNA的表达。结果DM非治疗组UAE及β2-MG排泄率高于对照组，而辛伐他汀治疗组则明显低于DM8周非治疗组；DM8周非治疗组nephrin mRNA的表达量较正常对照组及辛伐他汀治疗组明显减少。结论DM大鼠UAE及尿β2-MG排泄率均明显升高，辛伐他汀可阻断这一改变；DM大鼠nephrin mRNA的表达量逐渐减少，辛伐他汀可能通过降低DM大鼠血浆胆固醇浓度影响nephrin mRNA的表达进而减少UAE。     

加味济生肾气汤对STZ诱导的糖尿病肾病大鼠足细胞及其自噬的影响＊

目的 探究加味济生肾气汤对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞和自噬作用的影响，为糖尿病肾病的中药治疗奠定一定基础。方法 将66只SD大鼠按照随机数字表法分成对照组，模型组，羟苯磺酸钙组，加味济生肾气汤低、中、高剂量组。造模后，各组分别以生理盐水，羟苯磺酸钙，1 mL/kg/d、4 mL/kg/d、10 mL/kg/d药物浓度的加味济生肾气汤处理。6周后，取大鼠肾脏，电镜观察肾脏足细胞形态；免疫组化检测Nephrin的表达；Western blot检测LC3II/I和P62的表达。结果 模型组大鼠肾小球基底膜可见显著增厚，足细胞排列较紊乱，数目减少，足突融合，在加味济生肾气汤中剂量组和高剂量组中上述症状得以缓解；与对照组比较，模型组大鼠肾组织中的Nephrin水平均明显降低，LC3II/I比值显著下降，P62水平显著升高。与模型组比较，加味济生肾气汤高剂量组大鼠肾组织中的Nephrin水平均明显升高，LC3II/I比值均显著升高，P62水平显著降低（P < 0.05）。结论 加味济生肾气汤通过提高自噬水平，减少足突发生融合，提高肾脏的过滤功能。     

血管紧张素Ⅱ对足细胞Notch通路及Nephrin表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激小鼠足细胞对Notch通路、Nephrin表达的影响。方法 AngⅡ刺激小鼠足细胞并给予缬沙坦干预,采用免疫荧光化学、Western blot、Real-time PCR方法检测Notch1、Notch胞内域1(NICD1)、Hes1、Nephrin的表达情况。结果 AngⅡ呈时间依赖性增加足细胞Notch1、NICD1、Hes1表达,抑制Nephrin表达(P<0.01);缬沙坦可抑制AngⅡ对Notch通路的活化,增加Nephrin的表达(P<0.01)。结论 AngⅡ通过激活Notch通路降低足细胞Nephrin表达。     

雷公藤内酯醇对IgA肾病大鼠蛋白尿和nephrin、podocin蛋白及mRNA表达的影响

目的:观察雷公藤内酯醇(TP)对IgA肾病(IgAN)大鼠尿蛋白和足细胞nephrin、podocin蛋白及mRNA表达的影响。方法:采用牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖的方法建立IgAN大鼠模型。将60只大鼠随机分为正常组、模型组、洛丁新组、TP剂量组、TP中剂量组、TP高剂量组,每组10只。于0,10,14周收集血尿标本,并处死大鼠留取肾组织标本。检测24 h尿蛋白定量,血生化指标,分别采用实时定量PCR及ELISA法检测肾组织nephrin、podocin mRNA和蛋白表达。结果:(1)实验前各组大鼠尿蛋白差异无统计学意义(P>0.05),第10周末各造模组蛋白尿均明显高于正常组(P<0.01),第14周末TP各剂量组及洛丁新组蛋白尿均较模型组明显减少(P<0.01),TP高剂量组Alt值高于其余各组(P<0.05);(2)与正常组相比,模型组nephrin、podocin蛋白、mRNA表达明显降低(P<0.01);TP各剂量组及洛丁新组nephrin、podocin蛋白、mRNA表达均较模型组明显增高(P<0.05);TP中、高剂量组较洛丁新组nephrin、podocin蛋白浓度显著增高(P<0.05);TP各剂量组与洛丁新组及TP各剂量组间nephrin、podocin mRNA表达均差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TP能够明显减轻IgAN大鼠的蛋白尿,且能明显提高肾组织nephrin、podocin mRNA及蛋白的表达。提示TP能调节IgAN足细胞相关分子nephrin、podocin基因及蛋白的表达,减少足细胞损害,减少尿蛋白。     

叉头状转录因子O1对糖尿病大鼠足细胞影响的实验研究

目的 探讨叉头状转录因子O1（Fox01）对糖尿病大鼠足细胞的影响.方法 链脲佐菌素（STZ）诱导构建糖尿病大鼠模型90只,并采用简单随机抽样法分为糖尿病（DM）＋空慢病毒载体（LV-pSC-GFP）感染组（LV-NC组,n=30）,DM＋大鼠结构性活性FoxO1慢病毒载体（LV-CA-FoxO1）感染组（LV-CA组,n=30）,DM组（n=30）,另设对照组（NG组,n=30）注射相应体积的柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液.于慢病毒感染后的2、4、8周末,测大鼠尿白蛋白、体重、血糖、血肌酐、尿素氮,光镜和透射电镜观察肾小球及其足细胞结构变化,实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting法检测大鼠肾皮质中FoxO1、足盂蛋白（PCX）、nephrin mRNA和蛋白的表达.多组间比较采用单因素方差分析.结果 与LV-NC、DM组相比,LV-CA组大鼠肾脏中FoxO1 mRNA、蛋白表达水平明显升高（F8W值分别为10 919.75、3 867.34,均P＜0.05）,尿白蛋白、血肌酐、尿素氮明显降低（2周除外）（F8W值分别为132.72、187.68、503.69,均P＜0.05）,肾脏中PCX、nephrin mRNA和蛋白水平明显升高（mRNA F8w值分别为778.94、478.10;蛋白F8W值分别为393.64、255.79,均P＜0.05）,肾脏病理学变化也明显改善,可见肾小球体积减小,系膜细胞及基底膜增生程度降低,足突融合也有一定程度改善.结论 通过靶向注射慢病毒载体来上调FoxO1的表达可改善DM大鼠足细胞的损伤.     

纤溶系统对膜性肾病大鼠足细胞损伤的影响

目的：观察大鼠膜性肾病（MN）模型的全血uPA、tPA及PAI-1的表达情况,及其对足细胞损伤凋亡的影响及肾脏病理改变的影响,探讨早期预防纤溶紊乱对防止MN进展有重要意义。方法：按改良border法制作MN大鼠模型,正式免疫第1、2、3、4周末检测全血uPA、tPA及PAI-1的表达水平;取大鼠肾组织进行光镜、电镜观察肾组织病理学改变;采用免疫组化方法检测肾足细胞Nephrin、WTl蛋白表达含量,并进行相关性分析。结果：与正常组大鼠相比,模型组大鼠的全血uPA、tPA水平明显减少,而PAI-1水平明显增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;电镜显示肾小球足细胞广泛足突融合至消失;GBM基质出现“钉样突起”,肾间质纤维化程度较重。肾小球足细胞分布区WT-1和Nephrin蛋白表达下调,其中Nephrin蛋白表达量变化有统计学意义（P<0.01）。相关性分析显示,大鼠全血tPA和uPA水平与肾组织Nephrin蛋白的表达变化呈正相关,全血PAI-1水平与肾组织Nephrin蛋白的表达变化呈现负相关。结论：在MN发展中,纤溶系统对足细胞损伤凋亡具有重要意义,早期评估预测MN足细胞损伤情况或可为防治早期MN步入终末期肾脏病找到又一治疗靶点,亦可为临床研究治疗MN的药物提供新的思路。     

Nephrin、podocin在V型狼疮性肾炎肾组织中的表达

目的 探讨肾小球足细胞相关蛋白nephrin和podocin在V型狼疮性肾炎(V-LN)发病中的作用.方法 检测V-LN组11例和特发性膜性肾病(IMN)组8例患者的尿常规、24-h尿蛋白定量、尿补体C3及纤维蛋白原降解产物(FDP)、血脂、血清补体及肝肾功能,并行肾组织活检间接免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察nephrin、podocin表达的变化.结果 24-h尿蛋白定量、血清白蛋白、肌酐、尿补体C3两组间无统计学差异;V-LN组血脂、血清补体C3、C4及尿FDP均低于IMN组;nephrin、podocin表达两组均减弱,但IMN组更明显.结论 Nephrin、podocin表达减弱可能参与V-LN蛋白尿的发生,但V-LN表达减弱不及IMN明显,推测V-LN蛋白尿的发生可能还有其他机制参与.     

podocin基因敲低对小鼠足细胞nephrin和α-actinin表达与分布的影响

目的 研究足细胞分子podocin、nephrin和α-actinin之间的相互作用和联系。方法 将针对podocin分子设计的特异RNA干扰(RNAi)质粒导人体外培养的小鼠足细胞系(MPC5)；应用免疫荧光染色及双标记在共聚焦显微镜下观察nephrin、podocin和α-actinin的分布方式；半定量RT-PCR和免疫蛋白印迹检测podocin、nephrin，α-actinin-4及内参照GAPDH／β-actin在mRNA水平和蛋白水平的表达量。结果 (1)干扰组podocin的荧光强度显著低于对照组，其mRNA和蛋白的表达量分别下降了65％和89％。免疫双标记显示podocin的分布发生了明显变化：对照组podocin不但分布在胞核的周围，而且在胞浆呈放射性沿着细胞骨架分布，以及主要在胞膜上呈连续性的线状分布；干扰组podocin呈点状分布在胞核周围。(2)干扰组nephrin的荧光强度亦明显减低，其mRNA及蛋白的表达量分别减少了70％和78％。免疫双标记显示nephrin的分布也发生了显著变化：干扰组nephfin亦呈点状分布在胞核周围；在对照组，nephrin和podocin的分布方式相同。(3)干扰组和对照组α-actinin的分布及在mRNA和蛋白水平上的表达量无明显差异，呈细丝状均匀分布于胞质内，亦呈放射性分布于足细胞伸出的突起中。结论 通过RNAi成功地使MPC5的podocin表达下调。Podocin和nephrin分子关系紧密，可能存在着直接的分子间反应；podocin与α-actinin无直接的作用和联系。     

Expression of nephrin,podocin, α-actinin,and WT1 in children with nephrotic syndrome

Recently, nephrin, podocin, -actinin, and WT1, which are located at the slit diaphragm and expressed by the podocyte, were found to be causative in congenital/familial nephrotic syndrome (NS), but their role in acquired NS remains unclear. We studied their expression in NS with the aim of disclosing their possible role in the development of proteinuria. Immunofluorescence, confocal microscopy, and image analysis were used to study the expression and the distribution in 19 children with primary NS, 9 with isolated hematuria, and 9 controls. All the children with NS presented with heavy proteinuria and foot process effacement was identified by electron microscopy. No proteinuria and foot process effacement was seen in the group with hematuria. A dramatic decrease of podocin expression was found in NS (86.66±22.74) compared with control groups (P=0.014). Furthermore, we also found the pattern of distribution of nephrin, podocin, and -actinin changed in children with NS. In conclusion, a dramatic decrease of podocin expression and abnormal distribution of nephrin, podocin, and -actinin were found in children with NS. No differences were found in children with isolated hematuria, suggesting involvement of these molecules in the development of proteinuria in primary NS.