免疫细胞素Hu14.18-IL-2对黑色素瘤病人的免疫激活作用

目的评估免疫细胞素Hu14.18-IL-2对黑色素瘤病人体内免疫作用。方法33位黑色素瘤病人用一种人源化抗神经节苷脂GD-2的单抗与IL-2融合的免疫细胞素进行治疗,按每天0.8、1.6、3.2、4.8、6.0、7.5 mg/m2静脉滴注,连续3 d为一疗程,病情稳定或缓解后,在第5周接受第2疗程治疗。观察病人外周血单核淋巴细胞抗体依赖的细胞毒性、自然杀伤细胞活性、IL-2的体外增殖以及IL-2可溶性受体的变化。结果Hu14.18-IL-2能诱导病人淋巴细胞的吞噬作用,增强外周血中自然杀伤细胞的杀伤能力和数目,使血清中IL-2受体复合体的可溶性受体α链水平上升。结论免疫细胞素Hu14.18-IL-2对黑色素瘤病人具有免疫激活作用。     

辐射基因治疗黑色素瘤的实验研究

研究低剂量辐射结合腺病毒(AdCMV)载体介导的p53基因转导对人黑色素瘤A375细胞系基因转移效率和辐射敏感性的影响.用复制缺陷的重组腺病毒载体(AdCMV-p53)介导入p53基因转染1 Gy X-射线预辐照的A375细胞系,RT-PCR检测mRNA水平,流式细胞仪测定细胞周期阻滞及外源性P53蛋白表达情况,克隆形成率测定辐射后细胞存活率.用携带报道基因的复制缺陷重组腺病毒载体AdCMV-GFP作为对照.实验结果表明,1 Gy X-射线辐照可较高地增加AdCMV-p53对A375细胞的基因转导效率,转导的外源性野生型p53可在A375(wtp53)细胞中高效表达,并诱导细胞周期G1期阻滞;单纯转导p53对A375细胞无明显诱导凋亡和生长抑制效应;而转导p53后给予X-射线辐射,当剂量达到4 Gy及其以上时,48h后AdCMV-p53感染组细胞开始出现明显形态改变,克隆存活率明显低于AdCMV-GFP感染组和未感染组,显示存活曲线下移,4Gy时细胞存活率就减少了1个量级.小剂量辐射既可有效增加AdCMV-p53介导的p53转导,又不会对患者产生明显副作用;转导野生型p53的人黑色素瘤A375细胞系显示P53过表达;过表达的P53蛋白虽然对A375细胞无明显生长抑制及凋亡诱导作用,但可明显增加其辐射敏感性.这表明p53是基因治疗黑色素瘤较好的侯选基因,也为临床上放疗联合基因治疗黑色素瘤提供了实验室依据,即减轻临床上对于辐射敏感性差的肿瘤单纯大剂量照射或单纯基因疗法中rAd-p53制品用量过大而给病人造成的毒副作用.     

75MeV/u￣(12)C离子Bragg曲线及黑色素瘤细胞失活的测量

用双电离室法测定了ＨＩＲＦＬ提供的７５ＭｅＶ／ｕ１２Ｃ离子经不同厚度降能片后的相对剂量，将降能片厚度等效为组织等效材料一水中的深度，得到了碳离子在水介质中的Ｂｒａｇｇ曲线，与计算的Ｂｒａｇｇ曲线进行了比较。同时测定了离子经不同厚度降能片后对黑色素瘤（Ｂ１６）细胞的失活效应，得到了离子束在不同贯穿深度上的Ｂ１６细胞存活数据。     

颗粒溶素活性肽与增强型绿色荧光蛋白融合基因真核表达质粒的构建及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达

目的构建人颗粒溶素(GLS)活性肽(9ku-GLS)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因的真核表达载体,并检测其在小鼠黑色素瘤细胞B16中的表达。方法经PCR扩增9ku-GLS基因,插入质粒pBudCE4.1中,经酶切及测序鉴定正确后,亚克隆至质粒pEGFP-C1中,将融合基因真核表达质粒pEGFP-C1/S9K转染B16细胞,采用荧光显微镜及RT-PCR法检测融合蛋白的表达。结果融合基因真核表达质粒pEGFP-C1/S9K经双酶切鉴定证明构建正确,转染B16细胞24h后,荧光显微镜下可观察到绿色荧光,且经RT-PCR可扩增出267bp的目的基因片段。结论已成功构建9ku-GLS与EGFP融合基因的真核表达质粒,且在B16细胞中表达了融合蛋白。     

氨氯地平对小鼠黑色素细胞瘤B16细胞自发性肺转移的抑制作用及其机制

目的 研究氨氯地平对小鼠黑色素细胞瘤B16细胞自发性肺转移的抑制作用及其机制.方法 将小鼠黑色素细胞瘤B16细胞接种于C57BL/6J小鼠右腹股沟皮下,2×106个/只,次日将小鼠随机分为阴性对照组(给予生理盐水0.2 ml/只,每天灌胃1次,共21 d)、氨氯地平低、中、高剂量组(分别给予氨氯地平1、3和10 mg/...     

Current status of gene therapy in melanoma treatment

Melanoma is the deadliest type of skin cancer and which has a high ability of metastasis. Surgery is an effective method to treat I or II stage melanoma patients. However, there are few treatment options for metastatic melanoma. Gene therapy is one of the attractive options and is considered as the future direction for treating melanoma. This review mainly discusses the properties and challenges of the various gene therapies in melanoma, especially the delivery systems and gene targeting.     

Astragaloside IV improves melanocyte differentiation from mouse bone marrow mesenchymal stem cells

Vitiligo results in an autoimmune disorder destructing skin pigment cells, melanocytes (Mcs). This study aimed to investigate whether Astragaloside IV (AIV) could efficiently induce differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSCs) into Mcs. BMMSCs were induced and differentiated into Mcs with 0.1, 0.2, and 0.4 mg/L AIV during 150-day. Morphologic changes of differentiated cells were observed. Levels of some melanocytic specific genes (TRP-1, TRP-2, MART-1, Mitf) were measured with quantitative polymerase chain reaction (qPCR) at 90, 120, and 150 days of induction. After 90-day induction, the differentiated cells with 0.4 mg/L AIV demonstrated the typical morphology of Mcs, positive 3,4 dihydroxyphenylalanine staining, and positive staining of TRP-1, TRP-2, MART-1, and Mitf. After 90- and 120- days’ induction with 0.4 mg/L AIV, TRP-1 expression was significantly elevated (p < 0.01), and TRP-2 expression was significantly increased in 0.4 mg/L AIV-treated group compared to negative control (p < 0.01), 0.1 mg/L (p < 0.01), and 0.2 mg/L (p < 0.01) AIV-treated groups. Moreover, MART-1 expression was significantly up-regulated in 0.4 mg/L AIV-treated group compared to negative control, but without difference compared to 0.1 mg/L (p > 0.05) and 0.2 mg/L (p > 0.05) AIV-treated groups. During 90 to 150- day induction, there were no significant differences for Mitf levels between AIV-treated groups and negative control (p > 0.05). In conclusion, 90-day induction with 0.4 mg/L AIV up-regulated TRP-1, TRP-2, and MART-1 expression, indicating that AIV can efficiently induce Mcs differentiation from BMMSCs. These results provide experimental and theoretic evidence for AIV application in clinical vitiligo repigmentation treatment.     

表达MAGE-1/HSP70/MAGE-3工程菌的稳定性

目的检测重组工程菌pET28a-MAGE-1/HSP70/MAGE-3/BL21(DE3)生物学性状的稳定性。方法将工程菌菌株连续传50代,每隔10代挑取单克隆菌落进行诱导表达,并计算质粒丢失率。提取不同代次的质粒,扫描电镜观察,检测融合蛋白表达水平,并进行工程菌的染色镜检及生化鉴定。结果pET28a-MAGE-1/HSP70/MAGE-3/BL21(DE3)融合蛋白工程菌呈典型的大肠杆菌形态,各代次菌的各项检测结果与原始菌种差异无显著意义。结论重组工程菌pET28a-MAGE-1/HSP70/MAGE-3/BL21(DE3)生物学性状稳定,可作为生产用菌种。     

黑色素瘤抗原-4基因在结肠腺癌中表达的检测

目的检测黑色素瘤抗原-4(MAGE-4)基因在结肠腺癌中的表达情况。方法采用RT-PCR方法检测44份结肠腺癌组织及15份癌旁正常组织标本中MAGE-4基因的表达。结果44份结肠腺癌标本中,MAGE-4基因的阳性表达率为38.64%,而在15份癌旁正常组织中均不表达,两组比较差异有显著意义。对阳性标本的RT-PCR扩增产物中目的基因片段进行DNA测序,证实为MAGE-4全长编码基因。结论MAGE-4基因在结肠腺癌组织中呈特异性表达,提示该基因可用于结肠癌疫苗的开发。     

循环应用低剂量环磷酰胺对黑色素瘤荷瘤小鼠调节性T细胞的影响及抗瘤作用

目的观察循环应用低剂量环磷酰胺(CTX)对黑色素瘤荷瘤小鼠调节性T细胞(Treg)的影响及抗瘤作用。方法通过皮下接种黑色素瘤细胞B16制备黑色素瘤荷瘤小鼠模型;对荷瘤小鼠分别经腹腔单次或循环注射CTX,每隔7d给药1次,共3次,应用流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4+CD25+Foxp3+Treg的含量;培养小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),将DC与脾T淋巴细胞混合培养,应用ELISA法检测脾T淋巴细胞干扰素γ(IFNγ)的分泌量;同时测量肿瘤的大小,绘制肿瘤生长曲线,并观察各组荷瘤小鼠自身免疫病的发生情况。结果CTX的最佳应用剂量为100mg/kg。随着荷瘤时间的延长,荷瘤小鼠脾脏CD4+CD25+Foxp3+/CD4+的比值呈逐渐升高趋势。单次应用CTX抑制Treg的时间较短,而循环应用CTX能够延长对Treg的抑制,使其维持在相对较低的水平;循环应用CTX显著提高了荷瘤小鼠脾T淋巴细胞IFNγ的分泌水平。单次和循环应用CTX均未能延缓肿瘤的生长,两组小鼠均未见免疫性白斑及明显的化疗毒副反应。结论循环应用CTX能更加有效地调控Treg,从而促进DC对T淋巴细胞的抗原特异性激活,这将会提高DC疫苗的抗瘤效果。