基于可靠性的抗震设计 Ⅰ:等效线性系统

这是关于基于可靠性的抗震设计的两部份研究中的第一部份。在如地震荷载那样的随机荷载作用下的可靠性分析和基于可靠性的抗震设计中，经常要求对多自由度（MDOF）非弹性结构进行重复的时程解答，而使计算上花费过大。为减轻这种困难，得出了一种近似的方法。该方法采用保密系统一、二振型和整体屈服特性简单的等处非线性系统代替多自由度系统。使用过去地震中的大量实际记录进行回归分析为基础的两个经验响应修正系数可达到等效化。本文在给出地震激励作用下的特殊阻力矩框架的可靠性分析的数值算例，证明计算上的优点和方法的精确性。     

颗粒溶素活性肽与增强型绿色荧光蛋白融合基因真核表达质粒的构建及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达

目的构建人颗粒溶素(GLS)活性肽(9ku-GLS)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因的真核表达载体,并检测其在小鼠黑色素瘤细胞B16中的表达。方法经PCR扩增9ku-GLS基因,插入质粒pBudCE4.1中,经酶切及测序鉴定正确后,亚克隆至质粒pEGFP-C1中,将融合基因真核表达质粒pEGFP-C1/S9K转染B16细胞,采用荧光显微镜及RT-PCR法检测融合蛋白的表达。结果融合基因真核表达质粒pEGFP-C1/S9K经双酶切鉴定证明构建正确,转染B16细胞24h后,荧光显微镜下可观察到绿色荧光,且经RT-PCR可扩增出267bp的目的基因片段。结论已成功构建9ku-GLS与EGFP融合基因的真核表达质粒,且在B16细胞中表达了融合蛋白。     

低于11 K的单级脉管制冷机性能研究

研究了回热器长度以及80 K以下温区不同回热材料布置形式对单级G-M型脉管制冷机性能的影响.试验研究表明,适当增加回热器长度,制冷机性能可显著提高.在此基础上对低温区回热材料进行优化,采用Er3Ni、铅丸和不锈钢丝网3层复合回热材料获得了最佳的制冷性能.采用额定输入功率为7.5 kW的压缩机驱动,脉管制冷机最低制冷温度达10.9 K,这是目前单级脉管制冷机达到的最低制冷温度.该制冷机在21 K可获得20 W制冷量.     

重组CFP10-PPE68融合蛋白检测结核分枝杆菌感染的初步应用

目的以结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)RD1区特异性培养滤液蛋白10(culture filtrate pro-tein10,CFP10)与戊糖-5-磷酸-3-差异构象酶68(pentose-5-phosphate-3-epimerase68,PPE68)的融合蛋白CFP10-PPE68作为包被抗原,建立检测结核病患者血清中MTB抗体的间接ELISA法。方法采用亲和层析法纯化重组CFP10-PPE68、CFP10和PPE68蛋白;分别以3种蛋白作为包被抗原,建立检测结核病患者血清中MTB特异性抗体的间接ELISA法;采用方阵滴定法对建立的间接ELISA法的条件进行优化;并以临床诊断为金标准,对间接ELISA法的特异性、敏感性和准确性进行验证。结果纯化的重组CFP10-PPE68融合蛋白纯度约为70%。分别以重组CFP10-PPE68、CFP10和PPE68蛋白作为包被抗原的最佳包被浓度分别为2、4、4μg/ml,血清最佳稀释度均为1∶1 000,酶标二抗最佳稀释度均为1∶5 000。3种蛋白对肺外结核的诊断效果均优于肺结核,且重组CFP10-PPE68融合蛋白检测肺外结核的特异性、敏感性及准确性均最佳;3种蛋白诊断结核病的特异性较高,而敏感性相对较低。结论以重组CFP10-PPE68融合蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA法诊断MTB感染具有较高的敏感性和特异性,特别是对难以诊断的肺外结核病的诊断有一定的参考价值。     

10K单级脉管制冷机性能研究

20K温区大功率低温制冷机在超导体冷却、液氢无损贮存和低温泵等方面有着广阔的应用前景。为了探索单级脉管制冷机的极限制冷温度同时提高脉管制冷机在20K温区的制冷量,本文开展了计算模拟和实验研究。回热器模拟软件REGEN3.2的模拟结果显示,在不同的冷端质量流量下,单级脉管制冷机所能达到的最低制冷温度均为9.5K。在此基础上,本文设计了一台单级脉管制冷机,对回热器冷端10～80K温区的回热材料作了进一步优化。采用由不锈钢丝网、铅丸和稀土磁性蓄冷材料Er3Ni构成的复合式回热器,该单级脉管制冷机获得了10.9K的最低制冷温度,这是目前公开报道的单级脉管制冷机最低制冷温度。该制冷机在20.9K可获得20W的制冷量或在29.9K可获得40W的制冷量,输入功率为7.5kW。     

Ipr1DNA疫苗诱导BALB/c小鼠免疫应答的探讨

目的构建真核表达质粒pBud-Ipr1-OriM,探讨其诱导BALB/c小鼠的免疫应答,为新型结核病疫苗的研制提供新思路。方法将鼠胞内病原体抗性基因1(Intracellular pathogen resistance,Ipr1)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tubercu-losis,MTB)的复制子OriM插入真核表达质粒pBudCE4.1,构建pBud-Ipr1-OriM表达质粒(Ipr1 DNA疫苗);将BALB/c小鼠随机分为4组:生理盐水对照组、BCG组、pBud-OriM组及pBud-Ipr1-OriM组,pBud-OriM组及pBud-Ipr1-OriM组经肌肉注射免疫相应的重组质粒,BCG组经背部皮内注射BCG,每隔2周注射1次,共3次;末次免疫后2周,处死小鼠,分离血清,采用ELISA法检测小鼠血清中IL-12和IFNγ的水平;取脾组织,采用流式细胞术检测CD4+和CD8+T细胞数量,同时观察肺脾组织的病理学变化。结果经酶切、测序鉴定证实,重组真核表达质粒pBud-Ipr1-OriM(Ipr1 DNA疫苗)构建成功;pBud-Ipr1-OriM组免疫小鼠血清中IL-12水平及小鼠脾组织中CD4+和CD8+T细胞数量均高于其他组,肺脾组织未见病理学改变。结论 Ipr1 DNA疫苗能有效诱导BALB/c小鼠的细胞免疫应答,为新型结核病疫苗的研制奠定了基础。     

分离型二级脉管制冷机的实验研究--Ⅱ:液氦温区二级脉管制冷机

研制1台新型液氦温区分离型二级脉管制冷机,该制冷机由2台独立的脉管制冷机组成,一级回热器冷端和二级回热器中部通过热桥相连,从根本上弥补了传统直接耦合型多级脉管制冷机级间干扰的不足.采用双压缩机双旋转阀驱动该二级脉管制冷机,第二级最低温度达到了2.5 K,在4.2 K下有508 mW制冷量,同时一级在37.5 K有15 W制冷量.第二级充气压力由1.7 MPa增大到1.85 MPa,制冷机在4.2 K下的制冷量可以达到590 mW.为了能简化结构、扩大应用,提出采用单压缩机单旋转阀驱动该分离型脉管制冷机,达到了相同的制冷性能.     

肺炎支原体P30黏附素基因的原核表达及初步应用

目的构建肺炎支原体P30黏附素基因原核表达质粒并进行表达;以纯化的rP30蛋白为抗原,建立间接斑点-ELISA(dolt-ELISA)法,用于评价rP30蛋白在肺炎支原体(MP)感染诊断中的价值。方法以MP基因组DNA为模板,PCR扩增P30基因,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)/P30,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;Western blot检测表达产物的反应原性;以纯化复性后的rP30蛋白为抗原,建立间接dolt-ELISA法,对40份临床疑似肺炎支原体感染患儿血清进行检测。结果表达的rP30蛋白相对分子质量约为52 000,表达量约占菌体总蛋白的13%,主要以包涵体形式存在,经Ni2+-NTA树脂纯化后,纯度约为93%。Western blot证实,rP30蛋白可与阳性肺炎支原体感染患儿血清发生特异性反应。用rP30蛋白建立的间接dolt-ELISA法,其敏感性和特异性分别为95.45%和72.22%,准确性为85%。结论已成功地在大肠杆菌中表达了rP30蛋白,为MP感染的快速诊断提供了一种新的方法,也为进一步探讨P30蛋白的功能及其在MP感染发病机制中的作用奠定了基础。     

人颗粒溶素活性肽和小鼠单链白细胞介素-12重组卡介苗的构建及鉴定

目的构建含人颗粒溶素(GLS)活性肽和小鼠单链白细胞介素-12(mIL-12)基因的重组卡介苗(BCG),并鉴定其向真核细胞递呈质粒的能力。方法以分子生物学方法构建含相对分子质量为9000的颗粒溶素活性肽基因和小鼠IL-12基因及分枝杆菌复制子OriM的真核穿梭共表达质粒pBM9,以电转化的方式将pBM9质粒转入BCG,构建重组BCG,抽提质粒进行PCR鉴定;将重组菌感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,经RT-PCR检测重组菌向真核细胞递呈质粒的能力。结果重组BCG可扩增出与GLS基因和mIL-12基因相符的目的条带。重组BCG感染RAW264.7细胞96h后,经RT-PCR可扩增出267bp的GLS基因条带和1632bp的mIL-12基因条带。结论已成功构建含GLS和mIL-12基因的重组BCG,该重组BCG能向小鼠巨噬细胞递呈携带的目的基因。