新生鼠胰岛干细胞分离、培养和分化的实验研究

目的　探索新生鼠胰岛干细胞体外分离鉴定、培养以及体外分化的方法。方法　用胶原酶消化新生大鼠胰腺 ,将消化的组织碎片在pH7.4～ 7.6条件下经含血清RPMI 164 0及无血清RPMI164 0 (添加bFGF ,EGF ,N 2 )培养液中培养 ,观察形成类胰岛样细胞团的全过程。用胰岛素释放实验检测胰岛功能 ,免疫荧光法检测nestin的表达。结果　胰腺消化碎片培养 3 6h内 ,可见nestin阳性细胞贴壁 ,添加bFGF ,EGF ,N2后nestin阳性细胞快速增长 ,18～ 2 4d形成类胰岛样细胞团 ,并可表达胰岛素。结论　胰腺细胞中nestin阳性细胞具有胰岛干细胞特点 ,经体外培养可获得类胰岛样细胞团     

成年猪胰岛分离方法的改进

目的 :开发成年猪胰岛分离方法。方法 :取成年猪胰腺体尾部 ,胰管内注入冷 0 .1 %胶原酶消化液 ,在 38.5℃水浴箱中消化后 ,放入 4℃ Hanks液中分离并用 60 0μm的滤过网过滤回收。残留的组织重新悬浮在冷 Hanks液中 ,并放入 Ricordi′s chamber内振荡 5min后再次过滤回收。用Ficoll不连续密度液梯度离心法进行胰岛纯化。结果 :纯化前、后胰岛收获量分别为 ( 850 5± 3349)g-1〔IEQ:( 4 2 53± 2 732 ) g-1)、( 2 334± 1 2 2 3) g-1〕,纯度 >80 %。胰岛收获量与消化后的消化液胰蛋白酶活性显示了弱的负相关 ( r=- 0 .44,P=0 .1 3) ,胰岛收获量≥ 80 0 0 g-1组的消化后消化液胰蛋白酶活性明显低于胰岛收获量 <80 0 0 g-1( 78.3± 2 6.7vs1 37.5± 48.4BAEEU,P<0 .0 5)。结论 :我们采用的胰岛分离方法能够获得大量的猪胰岛细胞 ;胰蛋白酶活性影响胰岛收获量。     

缺碘地区长期供碘后学龄儿童甲状腺体积与生长发育关系的研究

根据1991～1992年中日联合调查小组在缺碘地区吉林省吉林市丰满区青山村,永吉县西阳乡马鞍山村,正常地区吉林省通输县四井子乡的调查结果,对病区448名和非病区132名7～14岁学生的甲状腺体积与年龄、身高、体重的关系进行分析研究。发现无论在长期供碘的地方性甲状腺肿病区,还是未供碘的非病区,甲状腺体积随着年龄、身高、体重的增长而增大,甲状腺体积y(ml)与年龄X_1(year)、身高X_2(cm)、体重X_3(kg)均呈中度正相关,具有显著的线性关系。回归方程为:病区青山村y=-1.6791+0.1433X_1+0.0197X_2+0.09X_3;病区马鞍山村y=-3.2254+0.2072X_1+0.0305X_2+0.0664X_3;非病区四井子乡y=4.6091+0.0842X_1-0.0588X_2+0.2358X_3。同时在不同外环境碘地区,在目前的碘营养水平上,外环境碘水平正常区学龄儿童甲状腺体积小于缺碘地区学龄儿童甲状腺体积;严重缺碘地区学龄儿童甲状腺体积大于中度缺碘地区学龄儿童甲状腺体积。     

直线切割闭合器在全腹腔镜下胃肠Roux-en-Y 吻合中应用

目的：探讨直线切割闭合器在全腹腔镜下胃肠 Roux-en-Y 吻合中应用的可行性与安全性。方法回顾性分析2011年11月至2014年2月间在首都医科大学附属北京天坛医院普通外科全腹腔镜下21例胃远端切除患者的临床和随访资料,其中消化道重建全部采用了使用直线切割闭合器胃肠 Roux-en-Y 吻合。结果所有病例均顺利完成手术,无中转开腹。20例逆蠕动胃肠 Roux-en-Y吻合时间25-40（32.1±5.5）min,1例顺蠕动胃肠 Roux-en-Y 吻合时间为35 min。1例逆蠕动胃肠 Roux-en-Y 吻合患者术后第4天进食,术后6 d 出现胃排空障碍,经保守治疗术后12 d 缓解。其余患者围手术期未出现吻合口出血、瘘、狭窄（梗阻）等并发症。术后随访2周~27个月,1例术后5.5个月因小肠侧侧吻合口狭窄再次开腹手术,其余未见吻合口相关的并发症。结论直线切割闭合器在全腹腔镜胃肠Roux-en-Y 吻合中应用,避免了镜下缝合操作,具有操作简单、易于掌握、安全等特点。     

成年猪胰岛分离的实验研究

猪胰岛作为异种胰岛组织供体来源日益受到重视,但由于猪胰岛的分离比其他动物困难,至今未能确立能够稳定地获得大量胰岛细胞的分离方法。本研究以开发成年猪胰岛分离方法为目的,采用以往的胰岛分离方法[1],并在此基础上加以改进,尝试了成年猪胰岛的分离。而且探讨了预防性添加胰蛋白酶抑制剂对成年猪胰岛分离的效果。一、材料与方法1.胰腺来源:肉联厂提供的成年杂种猪,猪龄7个月,体重100～120ｋｇ,在相对无菌条件下取出胰腺体尾部,保存在冷Ｅｕｒｏｃｏｌｌｉｎｓ液中送到实验室。整个过程中温缺血时间为15～20ｍｉｎ,冷缺血时间为35～50ｍ…     

新生大鼠胰腺nestin阳性细胞的体外分离、培养和分化的研究

目的探索新生大鼠胰腺nestin阳性细胞体外分离、培养并使之形成类胰岛样细胞团的方法。方法应用胶原酶消化新生大鼠胰腺,将消化的组织碎片培养形成类胰岛样细胞团后传代。免疫荧光细胞化学法检测贴壁细胞胰岛素、胰高血糖素及nestin的表达。RT-PCR检测培养1周的贴壁细胞nestin及细胞角蛋白(CK19)的表达。结果在pH 7．6条件下培养24-36 h有部分细胞贴壁生长,改用pH 7．4无血清RPMI 1640培养液培养18-24 d可形成类胰岛样细胞团,传代后可有单层细胞生长。培养24～36 h的贴壁细胞nestin呈阳性,但胰岛素、胰高血糖素阴性,形成的类胰岛样细胞团传代后24 h胰岛素、胰高血糖素呈阳性。培养1周的单层细胞经RT-PCR扩增获得nestin 片段,但未获得CK19相应的片段。结论类胰岛样细胞团传代培养后可表达胰岛素、胰高血糖素; 胰腺nestin阳性细胞具有胰岛干细胞的特点。     

袖状胃切除术治疗重度肥胖症进展

随着肥胖人群的增加,减肥手术的应用逐渐广泛,袖状胃切除术作为一种相对较新的术式,由于其术式简单,手术风险小且效果良好,近年来受到了越来越多的减肥外科医师和肥胖患者关注。本文从患者选择、手术技巧、效果、并发症等方面介绍袖状胃切除术的最新进展。     

原发性腹茧症的影像学特征、治疗及预后分析

目的研究原发性腹茧症的影像学特点和预后影响因素。方法回顾性分析首都医科大学附属北京天坛医院普外科2000年1月～2009年12月收治的原发性腹茧症患者的临床特征、CT检查资料、治疗方法和预后。结果全部6例均表现为肠梗阻。腹部X线平片可见小肠扩张积气肠袢及液气平面。腹部CT检查可见小肠扩张聚集成团,其周围似可见增厚的包膜包裹。腹部B超检查均发现小肠肠管部分扩张,4例可见少量腹水。5例进行了消化道钡餐检查,均提示回肠远端钡剂通过缓慢,其中1例提示回肠远端狭窄,另1例造影后出现完全性肠梗阻。剖腹探查术中均显示全部或部分小肠被一层灰白色致密坚韧的纤维膜包裹,大网膜缺如。均行部分纤维膜剥除、粘连松解术等,1例同时行部分小肠切除术。术后6例全部治愈。结论消化道造影和腹部CT检查对于原发性腹茧症具有重要的诊断价值。手术是安全有效的治疗方法。     

肠外营养支持下胃肠道肿瘤患者围手术期甲状腺激素水平变化

目的观察肠外营养支持下胃肠道肿瘤患者围手术期甲状腺激素水平变化。方法行R0根治术的胃肠肿瘤患者36例作为肿瘤组。同期收入院的无甲状腺疾病的患者10例作为对照组。肿瘤组术前1天及术后第14天分别检测血清甲状腺激素（TH）。肿瘤组术后给予15～20 kCal/（kg.d）的肠外营养支持5～7 d,肠蠕动恢复后给予清流食并逐渐过度至流食、半流食。用微粒子捕捉酶免疫分析法检测血清FT3、TT3、FT4及TSH含量,荧光偏振免疫分析法检测血清TT4含量,放射免疫分析法检测血清rT3含量。结果肿瘤组术前FT3水平明显低于对照组（P〈0.05）,rT3水平明显高于对照组（P〈0.01）。肿瘤组术后第14天FT3、TT3明显低于术前水平（P〈0.05）。rT3明显高于术前水平（P〈0.01）。结论①胃肠肿瘤患者术前即已存在非甲状腺疾病综合征（nonthyroid illness syndrome,NTIS）;②胃肠肿瘤患者术后NTIS短期内很难完全恢复。     

减重手术术后胃食管反流病的研究进展

减重手术做为目前治疗肥胖症有效术式,其安全和持久性得到了广泛的认可。其中腹腔镜袖状胃切除术(LSG)由于操作简单、不改变胃肠道结构、具有安全性高且疗效明显的优点,近年来做为主要的减重术式得到迅速普及应用。但肥胖症患者在行LSG术后,胃食管反流病发病率、疾病的转归、术中是否加做抗反流手术目前尚无统一意见。