人外周血TIM3 基因敲除T淋巴细胞的制备及其抗肿瘤作用

[摘要] 目的: 通过CRISPR-Cas9 基因编辑技术及质粒电转染技术制备T 细胞免疫球蛋白黏液素3（TIM3）基因敲除的人外周血T淋巴细胞,探讨敲除TIM3 基因后能否增强T细胞免疫功能及其抗肿瘤作用。方法: 通过电转染法将hTIM3 sgRNA/Cas9 双质粒共转染EBV阳性胃癌患者外周血T淋巴细胞,电转24 h 后流式细胞术检测转染效率并利用荧光显微镜观察;体外培养过程中观察基因敲除后T细胞增殖活性,流式细胞术验证TIM3 基因敲除效率以及细胞表型的变化。用肿瘤抗原肽活化T细胞检测TIM3 基因敲除后T 细胞分泌细胞因子水平及体外杀伤胃癌AGS-EBV 细胞的能力。结果:电转染法能够有效地将hTIM3 sgRNA/Cas9 双质粒敲除体系转入人外周血T淋巴细胞,其转染效率平均达（41.5±3.6）%,基因敲除效率波动在40.0%～50.0%（均P<0.01）;经抗原活化后的基因敲除组T细胞的增殖活性和免疫表型未见明显变化,表面活化分子中仅见HLA-DR较对照组明显提高（P<0.05）;TIM3 基因敲除T细胞分泌TNF-α、IFN-γ 的水平显著增高（P<0.01 或P<0.05）,体外杀伤胃癌AGS-EBV 细胞的能力也明显增强（均P<0.05）。结论: 用CRISPR-Cas9 基因编辑及质粒电转染技术制备人外周血TIM3 基因敲除T淋巴细胞的方法简易可行,在体外的扩增活化中保持TIM3 基因水平下调并具有更高的免疫应答水平以及更强的抗肿瘤作用。这一新技术的研发为基因工程化细胞免疫治疗提供了新的思路。     

环境诱胖剂—肥胖病因研究的新思路

Obesogen是近年来肥胖病因研究的新观点和新成果,其将环境中存在的促进或诱发肥胖发生的某些环境污染物或人工合成物看作肥胖的重要病因之一,由于这一类物质在国内尚未获得统一的命名与概述,为此本文建议将这些化学物命名为环境诱胖剂。目前被确认的环境诱胖剂有双酚A、己烯雌酚、全氟烷基酸(PFOA)、有机氯、有机锡、邻苯二甲酸酯等二十多种(类)化学物或药物,其诱胖机制主要为改变脂质稳态平衡和脂肪储量,代谢机制的调定点,促进脂肪的积聚。环境诱胖剂普遍存在于食物、饮水、空气等生活、生产和娱乐环境中,无法达到零接触,因而在寻找更多的环境诱胖剂的同时,需要建立有效的控制措施,以尽量减少这些化学物的接触机会和接触水平,预防肥胖的发生。