散发性大肠癌CpG岛甲基子表型的基因表达

目的探讨CpG岛甲基子表型阳性的散发性大肠癌的基因表达特征。方法对71例散发性大肠癌采用甲基化特异性PCR法行p14ARF、人类mut-s同系物1(hMLH1)、p16INK4a、6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)和肿瘤甲基化位点1(MINT1)共5个基因启动子甲基化的检测,确定CpG岛甲基子表型;进行K-ras、APC、P53、Bax和转化生长因子βⅡ受体(TGFβRⅡ)共5个基因的免疫组化检测。分析散发性大肠癌CpG岛甲基子表型和基因表达之间的关系。结果71例散发性大肠癌中,CpG岛甲基子表型阳性率为21．1％(15／71);K-ras、APC、P53、Bax和TGFβRⅡ蛋白阳性表达率分别为43．7％(31／71)、42．3％(30／71)、47．9％(34／71)、71.4％(50／70)和59．2％(42／71)。CpG岛甲基子表型和APC、P53、Bax、TGFβRⅡ蛋白表达均无显著相关性,但与K-ras蛋白表达显著相关,CpG岛甲基子表型阳性者K-ras蛋白阳性表达率显著高于CpG岛甲基子表型阴性者(66.7％比37．5％, P=0．043)。结论CpG岛甲基子表型阳性的散发性大肠癌中K-ras蛋白呈高表达,提示多基因同时甲基化与K-ras蛋白的激活表达密切相关,两者的关系表明表遗传学机制可以间接引起遗传学改变。     

鸟苷酸环化酶C在大肠癌淋巴结中表达的意义

目的:探讨在新鲜淋巴结组织检测鸟苷酸环化酶C(GCCmRNA)对大肠癌淋巴结微转移的诊断意义,以求更准确地评估大肠癌的转移情况。方法:收集本院2001.10～2002.3大肠癌根治术标本42例,计得淋巴结618枚;其中经病理形态学诊断无淋巴结转移者25例,得淋巴结370枚。用RT-PCR法检测GCCmRNA、CEAmRNA及CK20mRNA,分别以形态学证实转移淋巴结、良性大肠疾病淋巴结及正常大肠粘膜组织作为对照。全组病例随访6～26个月。结果:病例中临床分期为:DukesA期14例、B期11例、C期17例。总的阳性检出率为GCC22.65%(140/618)、CEA44.01%(272/618)、CK2043.69%(270/618);而在25例形态学诊断无转移病例中,三者的阳性率分别为12.16%(45/370)、42.16%(156/370)和41.62%(154/370)。25例常规病理阴性病例中14例检出GCCmRNA阳性淋巴结,其中4例出现复发转移,GCC诊断试验的灵敏度及特异度分别为100%、52.38%。淋巴结GCCmRNA阳性与复发/转移有统计学相关,影响无瘤生存率。结论:在传统病理形态学阴性的淋巴结中仍可能存在癌转移,用RT-PCR法检测微转移可提高淋巴结转移检出率,更准确地评估大肠癌患者的临床病理分期。GCCmRNA具有较好的特异性。     

早期胃癌生物学行为的病理研究

胃癌的早期发现,是提高胃癌患者生存期的关键。国外应用流式细胞分析术(Flow Cytometry,FCM)定量测定肿瘤细胞核DNA含量的异常改变与肿瘤生物学行为之间关系方面的研究,取得了较好的结果。本文在胃镜活检组织FCM检测的基础上,选择21例早期胃癌及癌旁胃组织存档标本进行FCM检测及回顾性分析,以冀探讨FCM在胃癌早期诊断及对其恶性程度估价中的应用价值。     

中国人遗传性非息肉病性结直肠癌MSH6基因胚系突变的测序研究

目的探讨中国人遗传性非息肉病性结直肠癌(hereditary nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC)家系中MSH6基因胚系突变。方法采用PCR-直接测序的方法检测39个无胚系MSH2及MLH1基因突变、符合不同临床标准的中国人HNPCC家系先证者MSH6基因各外显子胚系突变;对137名正常人胚系基因组DNA进行错义突变相应外显子的测序分析。应用Envision二步法检测有突变的先证者肿瘤组织MSH6蛋白表达。结果在39个HNPCC先证者中共发现6个MSH6基因的胚系突变,分别位于第4、6、9和第10外显子;突变类型为4个错义突变、1个无义突变、1个剪接区的插入突变;对4个错义突变的相应外显子的测序分析显示:137名正常人胚系基因组DNA5例具有第6外显子1163密码子处的c.3488A>T的错义突变,约占3.65%(5/137),为单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP);其余错义突变在正常人群中均未发现。在6例有MSH6基因胚系突变家系的肿瘤组织中免疫组化染色除1例为SNP的肿瘤组织MSH6蛋白阳性表达外,其余均为阴性表达。经过查询国际HNPCC突变数据库及SNP数据库证实上述突变中5个为国际上尚未报道的病理性突变,1个为新发现的SNP。结论MSH6基因胚系突变在符合不同临床标准的中国人HNPCC中均起一定作用,对无MSH2及MLH1基因胚系突变的先证者行MSH6基因胚系突变的测序分析对确诊HNPCC家系是必要的。     

一种新型肿瘤组织起源分子标志物的建立与评价

背景与目的：原发灶不明恶性肿瘤是一类转移性肿瘤的统称,在诊断时无法找到原发位点,约占所有恶性肿瘤的5%~10%。明确肿瘤的组织起源对于患者的诊断和治疗具有重要意义。方法：整合ArrayEx-press和Gene Expression Omnibus数据库中肿瘤类型明确的样本数据,构建涵盖22种常见肿瘤类型、5800例样本的基因表达谱数据库;通过支持向量机递归特征消除算法筛选组织特异性基因,建立肿瘤分类模型;采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RTQ-PCR)检测石蜡包埋肿瘤组织中基因的表达水平,并将基因分型结果与病理诊断结果进行比较。结果：基于肿瘤基因表达谱大数据,筛选出96个组织特异性基因,其中包含常见的肿瘤相关基因,如钙黏蛋白1(cadherin 1,CDH1)、激肽释放酶相关酶3(kallikrein-related peptidase 3,KLK3)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)等。在206例石蜡包埋组织样本中,182例的基因分型结果与病理诊断结果一致,准确率达到88.4%(95%CI：83.2%~92.4%)。结论：96基因RTQ-PCR检测对22种常见肿瘤类型具有较好的分类性能,可作为临床和病理诊断的辅助工具。     

下颌骨前突截骨矫正预防下齿槽神经损伤的一种手术方法

<正> 下颌前突是牙颌畸形中比较多见明颌骨发育畸形。颌骨性下颌前突,主要为,前牙下颌反颌,近中错位并伴有开颌,下颌前突畸形不仅使面部下1/3发生明显畸形,使面形变长影响面容、开颌并严重影响咀嚼和发育,使前牙的切断作用大大减弱畸形患者用矫正器,对牙齿的错位有一定效果,但对下颌前突的面形变长难以改善。近年国内外均有报告采用手术矫正畸形,得到良好效果。但在下颌骨截骨术后,下齿槽神经功能障碍的发生率较高,游离下齿槽神经需时很长,操作亦不便,为了防止发生这种并发症,我们对下颌骨截骨采用了一种新的     

小干扰RNA靶向抑制埃兹蛋白对肠癌细胞生物学行为的影响

目的：探讨细胞膜与细胞骨架连接的埃兹蛋白（Ezrin）对肠癌细胞生长和侵袭转移能力的影响。方法：选取肠癌细胞系（Lovo，SW 480）作为研究材料，采用小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）方法下调Ezrin的表达，分别通过实时荧光定量PCR和Western印迹法检测siRNA对Ezrin mRNA和蛋白表达水平的下调及下调作用随干扰时间的变化。根据Western印迹法检测结果，选取Ezrin蛋白表达最低的时间点检测干扰后肠癌细胞生物学行为的改变。运用CCK-8法检测2株细胞干扰前后增殖能力的改变，流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡，Transwell实验检测肠癌细胞侵袭和转移能力的变化。结果：实时荧光定量PCR和Western印迹结果显示，Ezrin siRNA对Ezrin mRNA和蛋白表达水平均有显著的下调作用。下调Ezrin蛋白后，2株肠癌细胞S期细胞比例略有下降，G1期细胞比例略有上升，与对照组比差异无统计学意义（P〉0．05）；2株细胞凋亡指数增加，与对照组比差异有统计学意义（P〈0．05）；肿瘤细胞的运动侵袭能力下降，穿过人工基底膜的细胞数量明显减少，与干扰前比差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：Ezrin在肠癌生长和侵袭转移过程中发挥重要作用，有可能成为抑制肠癌发生发展的新靶点。     

影响人软组织肉瘤异种移植成功的某些相关因素

研究裸小鼠体内异种肉瘤移植成功的可能因素。方法对移植成功群（Ｓ群）与移植失败群（Ｆ群）的临床状况，组织病理学、免疫特性、ＤＮＡ含量、增殖因子和癌基因蛋白等进行了比较研究。结果与肉瘤异种移植成功有关的可能因素为：组织来源、恶性程度高低（核分裂象、异形性、细胞密度）、间质成份多寡、Ｓ期细胞百分数等。增殖因子Ｋｉ┐６７和ＰＣＮＡ在Ｓ群中表达明显高于Ｆ群。ｐ５３蛋白表达在两群间有明显差别。结论Ｋｉ┐６７和ＰＣＮＡ是判定肉瘤生长速率和进展的较理想的指标。ｐ５３在肿瘤进展中具有重要作用。     

微卫星不稳定散发性大肠癌的临床病理特征和DNA倍体研究

目的:探讨微卫星不稳定的散发性大肠癌的临床病理特征及微卫星不稳定表型和DNA倍体类型的关系。方法:对71例散发性大肠癌行BAT25和BAT26两个位点的微卫星不稳定检测和流式细胞术倍体分析,探讨微卫星不稳定状态和临床病理特征及DNA倍体类型的关系。结果:微卫星不稳定的阳性率为9.86%(7/71),微卫星不稳定表型和发病部位、组织学类型及分化程度相关(P<0.05),而与性别、年龄、淋巴结转移和分期无关。微卫星不稳定的散发性大肠癌中右半结肠癌和低分化腺癌的比例高于微卫星稳定者。68例患者检出二倍体和异倍体分别为18和50例,微卫星不稳定表型者5例为二倍体,因此和DNA倍体类型显著相关(P=0.012)。结论:微卫星不稳定的散发性大肠癌好发于右半结肠,具有低分化腺癌的倾向,多为二倍体。     

散发性大肠癌的错配修复缺陷研究

目的探讨错配修复缺陷的散发性大肠癌的临床病理特征及错配修复缺陷检测手段的应用。方法对71例散发性大肠癌行hMLH1启动子甲基化检测、微卫星不稳定检测以及hMLH1和hMSH2的免疫组化检测,分析错配修复缺陷的散发性大肠癌的临床病理特征,探讨三种检测方法的应用价值。结果hMLH1基因启动子甲基化、微卫星不稳定和错配修复蛋白表达的阳性率分别为9.9%,9.9%和71.0%,三者密切相关。hMLH1启动子甲基化和微卫星不稳定的散发性大肠癌均具有结肠癌多发和低分化腺癌相对多见的特征。错配修复蛋白表达阴性的散发性大肠癌仅具有低分化腺癌相对多见的特征。结论错配修复缺陷的散发性大肠癌具有结肠癌和低分化腺癌多发的倾向,hMLH1启动子甲基化和微卫星不稳定以及错配修复蛋白的失表达三者密切相关。