缺氧条件下中介素和系膜细胞对内皮细胞血管生成的影响

目的探讨缺氧条件下,中介素(IMD)和肾小球系膜细胞(HMC)对内皮细胞的影响。方法内皮细胞分为4组:(1)内皮细胞与系膜细胞共培养,加IMD处理作为HEMI组;(2)内皮细胞与系膜细胞共培养,无处理作为HEM组;(3)内皮细胞加IMD处理作为HEI组;(4)内皮细胞无处理作为HE组;将各组细胞在1%O2、94%N2、5%CO2条件下缺氧培养12 h后,蛋白质印迹法(Western blot)、免疫细胞化学技术检测相关蛋白表达,实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测相关基因mRNA相对表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血管内皮生长因子A(VEGFA)含量,体外血管形成实验检测内皮细胞的成管分支数。实验结果两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果上皮型钙黏分子(VE-cadherin)表达量HEMI(1.629±0.197、1.557±0.066、10.552±0.523)高于HEM(1.116±0.118、1.340±0.161、8.128±0.542)、HEI(1.278±0.096、1.078±0.088、7.523±1.211)、HE组(1.000±0.000,F=0.734、1.244、6.134,P<0.05),差异有统计学意义;血小板内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)表达量HEMI(1.309±0.234、1.203±0.105、1.654±0.462)高于HEM(1.067±0.379、1.038±0.035、1.601±0.397)、HEI(1.225±0.091、1.101±0.038、1.605±0.207)、HE组(1.000±0.000),差异无统计学意义(F=5.083、5.434、6.428,P>0.05);VEGF表达量HEMI(0.904±0.005、1.922±0.457)高于HEM组(0.690±0.071、1.000±0.000,F=8.307、10.896,P<0.01),ELISA中加入IMD组(1.018±0.319)VEGFA浓度比值高于对照组(0.921±0.294,F=0.132,P<0.05),差异有统计学意义;体外血管形成中HEMI(22.289±0.131)、HEM(21.318±0.594)、HEI(21.533±0.867)、HE(20.755±1.798)高于NE组(18.731±0.525,F=5.926、0.030、1.033,P<0.05;F=6.753,P>0.05)。结论缺氧条件下,IMD可以直接或通过系膜细胞间接双重影响内皮细胞,促进血管形成。     

章古-3汤对大鼠慢性肾衰模型的作用及机制研究

目的：研究蒙药章古-3汤对腺嘌呤诱导大鼠慢性肾衰模型的影响作用并探讨其机制。方法：随机将60只Wistef大鼠分为6组：空白对照组、病理模型组、章古-3汤高剂量治疗组（20g·kg-1／d）、章古-3汤中剂量治疗组（10g·kg-1／d）、章古-3汤低剂量治疗组（5g·kg-1／d）、尿毒清对照组,每组10只。以腺嘌呤200mg·kgkg-1／d灌胃建立CRF模型,造模同时各治疗组灌胃给予章古-3汤,尿毒清组给予尿毒清溶液5g·kg-1／d。连续灌胃24天后,检测生化学指标（BUN、Scr、）;氧自由基指标（MDA、SOD）的变化;观察肾组织病理改变。结果：经章古-3汤治疗的各组大鼠肾功能与同期病理模型组比较,有明显的改善（P〈0．05）,与尿毒清对照组相比无显著性差异。章古-3汤各组与模型组比较。有升高SOD,降低MDA作用（P〈0．05）。结论：蒙药章古-3汤对腺嘌呤导致CRF大鼠模型的肾功能有一定保护作用,其作用机制与抗氧化作用有关。     

线粒体自噬在器官纤维化疾病中作用的研究进展

线粒体自噬是一种选择性降解细胞中损伤或多余线粒体的特异性自噬现象,使细胞在应激损伤时能够维持线粒体数量和质量的稳定,从而维持细胞的正常表型和功能。其分子机制途径较为复杂,主要涉及PINK1/Parkin途径、NIX和BNIP3、FUNDC1等。线粒体自噬的异常与多种疾病密切相关,而调节不同阶段线粒体自噬分子机制在疾病发展中的作用已被重视。现就近年线粒体自噬在多种器官纤维化病变中的研究进展综述如下。     

缺氧条件下中介素和系膜细胞对内皮细胞血管生成的影响

目的探讨缺氧条件下,中介素(IMD)和肾小球系膜细胞(HMC)对内皮细胞的影响。方法内皮细胞分为4组:(1)内皮细胞与系膜细胞共培养,加IMD处理作为HEMI组;(2)内皮细胞与系膜细胞共培养,无处理作为HEM组;(3)内皮细胞加IMD处理作为HEI组;(4)内皮细胞无处理作为HE组;将各组细胞在1%O2、94%N2、5%CO2条件下缺氧培养12 h后,蛋白质印迹法(Western blot)、免疫细胞化学技术检测相关蛋白表达,实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测相关基因mRNA相对表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血管内皮生长因子A(VEGFA)含量,体外血管形成实验检测内皮细胞的成管分支数。实验结果两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果上皮型钙黏分子(VE-cadherin)表达量HEMI(1.629±0.197、1.557±0.066、10.552±0.523)高于HEM(1.116±0.118、1.340±0.161、8.128±0.542)、HEI(1.278±0.096、1.078±0.088、7.523±1.211)、HE组(1.000±0.000,F=0.734、1.244、6.134,P<0.05),差异有统计学意义;血小板内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)表达量HEMI(1.309±0.234、1.203±0.105、1.654±0.462)高于HEM(1.067±0.379、1.038±0.035、1.601±0.397)、HEI(1.225±0.091、1.101±0.038、1.605±0.207)、HE组(1.000±0.000),差异无统计学意义(F=5.083、5.434、6.428,P>0.05);VEGF表达量HEMI(0.904±0.005、1.922±0.457)高于HEM组(0.690±0.071、1.000±0.000,F=8.307、10.896,P<0.01),ELISA中加入IMD组(1.018±0.319)VEGFA浓度比值高于对照组(0.921±0.294,F=0.132,P<0.05),差异有统计学意义;体外血管形成中HEMI(22.289±0.131)、HEM(21.318±0.594)、HEI(21.533±0.867)、HE(20.755±1.798)高于NE组(18.731±0.525,F=5.926、0.030、1.033,P<0.05;F=6.753,P>0.05)。结论缺氧条件下,IMD可以直接或通过系膜细胞间接双重影响内皮细胞,促进血管形成。     

纤维蛋白肽Bβ15～42对大鼠缺血再灌注损伤肾脏局部炎性反应的影响

目的 观察纤维蛋白肽Bβ15～42(the fibrin-derived peptide Bβ15-42,FgBβ15～42肽)对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)后肾脏局部炎性反应的影响并探讨其机制.方法 将SD大鼠随机分成假手术组(Sham组)、IRI组、阴性治疗组和FgBβ15 ～ 42肽治疗组.Sham组:分离肾动脉后关闭腹腔;IRI组:采用双侧肾动脉夹闭的方法制作肾脏IRI模型;阴性治疗组:于肾脏再灌注后立即尾静脉注射随机肽段3.6 mg/kg; FgBβ15～42肽治疗组:于肾脏再灌注后立即尾静脉注射FgBβ15～ 42肽3.6 mg/kg.后3组按照再灌注24h、48 h分为两个亚组,Sham组与各亚组均为8只大鼠.常规生化法检测肾功能;HE、PAS染色观察肾脏组织学改变;免疫组化、实时荧光定量PCR法及Western印迹检测肾组织白细胞介素1β(IL-1β)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的mRNA及蛋白表达.结果 与Sham组相比,IRI组的Scr和BUN水平均显著增加(均P ＜0.05),肾小管及间质病理损伤显著,以再灌注48 h更为明显;与IRI组相比,FgBβ15～ 42肽治疗组Scr和BUN显著下降(均P＜0.05),小管间质损伤程度明显减轻(P＜0.05).与Sham组相比,IRI组IL-1β和ICA M-1的mRNA和蛋白水平于再灌注24h显著上升,48 h稍微下降,但仍维持在较高水平;FgBβ15～ 42肽治疗组大鼠肾组织IL-1β和ICAM-1的表达于再灌注24h、48 h显著低于同时间点的IRI组(均P＜0.05),但仍明显高于Sham组.上述各指标在阴性治疗组和IRI组之间的表达差异无统计学意义.结论 FgBβ15～42肽对肾脏IRI具有保护作用,其作用机制可能与其减少炎性因子IL-1β、黏附分子ICAM-1的表达有关.     

广枣总黄酮的研究概况

近年来对于广枣总黄酮的研究,主要集中在以下四方面:广枣总黄酮抗心律失常作用、增强免疫功能、对动物耐缺氧和心肌缺血的保护作用、抑制血小板聚集和降低血液流变学各项指标.     

红花对四氯化碳致大鼠急性肝损伤的保护作用及其机制

目的研究红花对四氯化碳(CCl4)致大鼠急性肝损伤的保护作用及其机制。方法 50只Wistar雄性大鼠,随机分为正常组,模型组,红花高、中、低剂量组,每组10只。红花高、中、低剂量组灌胃给药剂量分别为1、0. 5、0. 25 g/kg,连续给药8 d,末次给药后1 h,除正常组外,其余组大鼠一次性腹腔注射CCl4花生油溶液致急性肝损伤。于CCl4染毒后24 h处死动物。取血测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活力;取肝组织进行HE染色及测定肝组织中丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和总抗氧化能力((TAOC)的活力;蛋白印迹法(Western blot)检测炎性指标肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及JNK通路中JNK、p-JNK和p-c-Jun、Caspase-3、cleaved Caspase-3蛋白表达;采用RT-PCR和Western blot分别测定死亡受体凋亡途径FasL、Fas及线粒体凋亡途径Bax、Bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果急性损伤后,模型组血清ALT、AST、ALP及肝组织的MDA水平与正常组相比明显升高(P 0. 05),CAT、GSH-Px和T-AOC的水平显著下降(P 0. 05),红花各剂量组同模型组相比上述指标均有统计学差异(P 0. 05); HE染色表明模型组中央静脉周围多数融合坏死,易见凋亡小体,红花各剂量组凋亡小体和小坏死灶均有所减少;模型组各炎症因子及p-JNK、p-c-Jun和cleaved Caspase-3的蛋白表达与正常组相比显著增加(P 0. 05),Bax、FasL、Fas的mRNA和蛋白表达明显增加(P 0. 05),而Bcl-2的mRNA和蛋白表达明显减少(P 0. 05)。红花各剂量组与模型组相比各炎症因子蛋白表达均有统计学差异(P 0. 05),JNK通路Bax、p-JNK、p-c-Jun、FasL、Fas、Bcl-2蛋白表达与模型组相比均有统计学差异(P 0. 05)。与模型组相比,红花中、低剂量组Bax、Bcl-2 mRNA的表达有统计学差异(P 0. 05),高剂量组与模型组之间无统计学差异(P 0. 05)。结论红花对CCl4致大鼠急性肝损伤有保护作用,且可能是通过其抗氧化、抗炎性因子激活以及抑制JNK通路激活、减少该通路激活后诱导的凋亡来实现的。     

蒙药蒙古山萝卜花中总黄酮的含量测定方法

目的:建立蒙古山萝卜花中总黄酮的体外含量测定方法。方法:以芦丁作为对照品,采用Na NO2-Al(NO3)3-Na OH显色体系,于509nm下测定蒙古山萝卜花中总黄酮的含量。结果:芦丁在24.0~84.0mg·L-1于吸光度呈现良好线性关系(n=6,r=0.9997),加样回收率为99.84%,RSD为0.36%。结论:该含量测定方法准确、快捷、简便、经济,是一种理想的测定蒙古山萝卜花中总黄酮的含量测定方法。     

精液中SCF/c-kit值在肾虚男性不育辨证中的价值

目的：评价精液中干细胞因子（stem cell factor, SCF）及其受体（c-kit）在男性不育肾虚证中的临床诊断价值,为肾藏精主生殖的基本理论提供实验依据。方法选取45例肾虚不育型患者与30例正常生育者进行对照研究,用酶联免疫吸附试验（ELISA法）测定两组精浆中SCF含量,用实时荧光定量 PCR方法对精液离心沉淀物检测c-kit的ct值,并计算其相对表达量。结果两组患者SCF浓度比较无差异（P>0.05）,与正常生育组比较,肾虚不育患者前向运动精子数明显降低（P<0.01）、精液离心沉淀物c-kit相对表达量升高（P<0.05）。结论男性不育肾虚证与精子活动和精液中c-kit表达量密切相关,两者可以作为男性不育肾虚证辨证时重要的客观指标,同时为中医肾藏精主生殖理论提供科学依据。     

额力根-7抗肝纤维化作用机制研究及网络药理学分析

目的采用实验及网络药理学方法研究额力根-7抗肝纤维化的作用机制。方法将50只大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组及额力根-7低、中、高剂量组,每组10只。除空白组外,其余各组大鼠灌胃50%四氯化碳-花生油溶液制备肝纤维化模型。额力根-7低、中、高剂量组分别灌胃135、270、405 mg/kg额力根-7散剂0.5%羧甲基纤维素钠溶液(CMC-Na),1次/d,连续10周。采用赖氏法检测大鼠血清GPT、GOT含量,可见光比色法检测ALP含量,采用HE染色及Masson染色观察肝组织结构。提取肝星状细胞(HSCs)RNA及蛋白,采用q-PCR技术及Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ)mRNA、蛋白表达水平,流式细胞术检测HSC凋亡情况。通过TCMID、TCMSP数据库及文献检索获得药物有效成分及靶点,通过OMIM和PubMed:Geen数据库获得肝纤维化靶点,运用Cytoscape 3.7.2构建“药物-有效成分-靶点-疾病”网络,运用STRING构建蛋白质相互作用网络(PPI)筛选中心靶标,运用R语言在线检索Bioconductor平台对靶点进行GO功能富集和KEGG通路富集分析。结果与模型组比较,额力根-7高、中、低剂量组GPT、GOT、ALP水平降低(P<0.01)。与对照组比较,含药血清低、中、高剂量组α-SMA[(0.24±0.12)、(0.25±0.12)、(0.41±0.15)比(1.00±0.00)]、collagenⅠ[(0.64±0.24)、(0.33±0.13)、(0.28±0.11)比(1.00±0.00)]mRNA水平降低(P<0.05或P<0.01),含药血清低、中、高剂量组α-SMA[(0.03±0.01)、(0.01±0.00)、(0.01±0.00)比(0.04±0.00)]、collagenⅠ[(0.08±0.01)、(0.10±0.01)、(0.13±0.01)比(0.18±0.01)]蛋白水平降低(P<0.01)。PPI结果显示,共筛选出额力根-7中35个有效成分,196个药物靶点,3740个疾病靶点,药物疾病共同靶点170个。GO富集分析获得159个条目,其中主要的分子功能包括DNA结合转录激活活性、RNA聚合酶Ⅱ特异性、细胞因子受体结合等;KEGG富集分析获得43条信号通路,其中排在前3位的通路为PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、细胞凋亡。结论额力根-7可通过多成分、多靶点、多通路发挥抗肝纤维化作用。