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目的构建高效表达菌株,以大量表达大肠杆菌T蛋白的预苯酸脱氢酶(PDH),为研究T蛋白双功能结构域CM和PDH的相互协同作用以及T蛋白抑制剂对其影响提供活性蛋白材料。方法利用pGEX高效融合表达系统将PDH与谷光甘肽疏基转移酶(GST)编码序列在表达宿主BL21实现高效表达,并利用对GST具有亲和作用的GlutathioneSepharose4B琼脂糖珠进行亲和层析以对其分离纯化。结果表达产物达菌体总蛋白的40%,可溶性目的产物得量为240mg·L-1,利用亲和层析法纯化后纯度达92.5%,GSTPDH融合蛋白的PDH的比活为38U·mg-1。结论本法成功构建高效表达PDH菌株,表达量高,纯化度高,GST-PDH酶活性正常,为进一步研究奠定基础。 相似文献
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摘 要 目的: 建立顶空进样气相色谱法检测比卡鲁胺原料药中7种有机残留溶剂二氯甲烷、正己烷、四氢呋喃、乙醇、乙醚、丙酮和乙酸乙酯的方法。方法: 色谱柱为Agilent DB 624弹性石英毛细管柱(30.0 m×0.25 mm×1.4 μm);进样口温度:200℃;氢火焰离子化检测器(FID)温度:250℃;柱温:程序升温,初始温度35℃,保持13 min,再以100℃/min的速率升至180℃,维持5 min;载气:氮气;流速:1.2 ml·min-1。顶空进样,顶空平衡温度:90℃,顶空平衡时间:30 min;进样体积:1.0 ml;以二甲基亚砜为溶解介质,测定比卡鲁胺中7种溶剂的残留量。结果: 各被测溶剂均能良好分离,各溶剂峰面积与浓度均呈良好的线性关系,回收率均较为理想。 结论:该法适用于比卡鲁胺原料药中残留溶剂的测定。 相似文献
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生物相关性溶出度方法研究进展 总被引:1,自引:1,他引:0
摘要:建立具有生物相关性的溶出度方法目的在于通过理想的体外溶出试验预测体内药代动力学过程。近年来,研究表明在生物相关性溶出介质中选择合适的溶出装置进行溶出试验得到的溶出曲线能较好地反映其在体内的溶出行为,计算机模拟软件可为建立合理的体外溶出度方法提供指导和依据。通过采用合适的生物相关性溶出介质、溶出装置,结合计算机模拟软件可建立A级水平的IVIVC(in vitro-in vivo correlation),可能代替生物等效性研究。 相似文献
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目的 试从mRNA表达水平阐明地非三唑对鼠肝微粒体中细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导机制。方法 给SD大鼠腹腔注射地非三唑,采用Trizol法提取大鼠肝脏RNA,用RT-PCR测定经地非三唑处理1, 2及4 d的鼠肝中细胞色素P450 CYP1A1, CYP1A2 mRNA的表达水平。结果 地非三唑处理不同时间的鼠肝细胞中细胞色素P450 CYP1A1, CYP1A2 mRNA的表达水平比空白对照组明显增加,空白对照组CYP1A1吸光度比值为0.270±0.040, 诱导1, 2及4 d的吸光度比值分别为0.343±0.055, 0.417±0.045及0.603±0.083;空白对照组的CYP1A2吸光度比值为0.613±0.189, 而诱导1,2及4 d的吸光度比值分别为1.510±0.226, 3.057±0.518及4.120±0.458。随着诱导时间的增加,细胞色素P450 CYP1A1及CYP1A2 mRNA的表达也逐步增加,诱导时间与表达水平之间存在一定的线性关系,相关系数分别为0.9984和0.9563。结论 地非三唑对细胞色素P450 CYP1A1/2 mRNA表达具有诱导作用。 相似文献
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目的:探讨小扁豆凝集素结合型甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在良恶性肝病鉴别诊断中的临床价值。方法:应用装有耦联了小扁豆凝集素(LCA)的微量离心柱分离131例肝病患者的AFP-L3,用化学发光免疫检测血清AFP和AFP-L3含量,计算AFP-L3占AFP总量的百分比(AFP-L3%)。结果:与肝硬化(LC)和慢性肝炎(CH)组相比,肝癌(HCC)组中患者血清AFP、AFP-L3与AFP-L3%均升高,经Kruskal-Wallis秩和检验有统计学意义(χ2=31.457,41.983,41.377;P=0.000,0.000,0.000)。AFP、AFP-L3和AFP-L3%相应ROC曲线下面积(AUC)分别为0.628、0.718和0.795,其差异均有统计学意义(P<0.05)。以AFP-L3%≥6.90%判断为阳性,AFP-L3%诊断肝细胞癌敏感性和特异性分别为66.7%和82.4%。结论:AFP-L3对肝细胞癌诊断准确度明显高于AFP,微量离心柱法检测AFP-L3在良恶性肝脏病变鉴别诊断中具有重要临床价值。 相似文献
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目的建立注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠中高分子聚合物的测定方法。方法采用Sephadex G-10凝胶色谱柱(15.0mm×300mm),以pH 7.0的0.05mol.L 1磷酸盐缓冲液[0.05mol.L-1磷酸氢二钠溶液-0.05mol.L-1磷酸二氢钠溶液(61∶39)]为流动相A,以水为流动相B,流速为1.2 mL.min 1,检测波长为254 nm。结果头孢哌酮高分子聚合物与头孢哌酮药物单体能较好分离,头孢哌酮自身对照的线性范围为5.01~250.71μg.mL-1(r=0.9999);在10.13~30.24 mg.mL 1内,供试品溶液浓度与聚合物峰面积呈良好线性关系(r=0.9999);定量限为0.14μg;方法精密度良好(RSD=0.50%,n=5);样品测定重复性与重现性好(RSD=0.82%,n=5;RSD=3.4%,n=3)。结论所建方法操作简便、结果可靠,可用于注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠中高分子聚合物的检测。 相似文献
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目的 利用图像数据化软件读取日本橙皮书中或FDA固体制剂溶出曲线数据库中溶出曲线数据,再用f2相似因子计算公式计算,用于国产仿制药与原研药的体外溶出曲线一致性评价的预试验。方法 按软件使用说明,设置坐标原点和纵坐标、横坐标最大值。利用截图软件获取参比制剂的溶出曲线图,保存为图像文件。确定溶出曲线上需要获取数据的点,经软件分析即可获得各个点的累积溶出量。再用f2相似因子计算公式计算,得到的f2值用于仿制药与参比制剂溶出曲线一致性判断。结果 以盐酸雷尼替丁片为例,通过图像分析软件可以获得日本橙皮书溶出数据库中参比制剂的累积溶出量数据,用于仿制药与参比制剂体外溶出曲线一致性评价的预试验。结论 图像分析软件可以通过数据化处理,得到文献上参比制剂的溶出量数据,用于仿制药体外溶出曲线一致性的预试验。 相似文献
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