Esat-6蛋白在结核病诊断中的研究进展

Esat-6蛋白是结核杆菌RD1区基因编码的一种早期分泌蛋白,具有较好的特异性和免疫活性。本文对其在结核病诊断和结核杆菌潜伏感染筛查中的研究进展作一综述。     

结核病疫苗的免疫学基础研究进展

根据WHO统计,2004年全世界有900万活动性结核病患者,200万人死于结核病,结核病所导致的死亡率位居世界第2位[1].疫苗是战胜传染病最经济、最有效的手段,但目前惟一可用的卡介苗(BCG)保护效果不尽人意,新型疫苗的研究迫在眉睫.     

国内外结核菌聚合酶链反应试剂盒的临床检测结果比较

目的用相同标本比较国内外结核菌聚合酶链反应诊断试剂盒的临床检测效果,并初步探讨结核菌聚合酶链反应荧光诊断试剂盒在临床应用中定量检测结核菌数量的可行性。方法用聚合酶链反应技术,荧光探针杂交技术、酶联免疫反应技术以及常规细菌学方法检测并经双盲编号的84份临床痰标本和8份含痰结核菌标准品。结果在59例结核病患者痰标本中,国产PCR-酶联免疫检测试剂盒与PCR荧光试剂盒分别检出26例阳性和24例阳性,国外试剂盒检出24例阳性;在25例非结核病患者痰标本中,国产PCR-酶联免疫检测试剂盒与PCR荧光试剂盒分别检出21例真阴性和24例真阴性,国外试剂盒检出23例真阴性;细菌学各级别检查结果与PCR荧光检测CT值不呈递减关系。结论国内外结核菌聚合酶链反应诊断试剂盒对临床标本的检测结果无显著性差异;结核菌聚合酶链反应荧光诊断试剂盒尚不能定量检测痰标本中的结核菌数量,有待更多的临床数据加以证实。     

皮内注射布氏杆菌活疫苗毒理学评价

目的研究人用皮内注射布氏菌活疫苗拟取代目前我国人用皮上划痕布氏菌活疫苗。方法对菌种进行了全面检定合格后，进行菌苗制备及实验室动物毒理、药效学方面的系列研究包括小白鼠急性毒性试验、局部刺激试验、全身过敏试验、长期毒性试验、用细胞免疫诊断制剂布氏菌素对皮内免疫12周的豚鼠做背部皮肤变态反应试验。结果小鼠皮内注射布氏菌活疫苗的最大耐受量为10亿个菌，用布氏菌素注射足底，可引起明显迟发型变态反应。局部刺激试验只有注射10亿菌的部位会在48h后化脓，但在1-2周内可自愈。全身过敏试验，皮内免疫布氏菌疫苗组及阴性对照组对豚鼠进行攻击后，均未出现任何异常反应，而阳性对照组豚鼠全部死亡。毒性试验，布氏活疫苗皮内免疫组与盐水对照组经6周和12周后各项血常规、血生化检查均未见异常，各脏器组织的病理学检查亦未见病理改变，免疫12周后对豚鼠骨髓造血细胞亦无影响，对皮内免疫12周的豚鼠做背部皮肤变态反应试验，24-48h结果为阳性。结论动物实验结果显示，布氏菌活疫苗用皮内注射的途径进行免疫是可行的。     

母牛分支杆菌制剂对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮水平的影响

一氧化氮（ＮＯ）在活化巨噬细胞抗某些肿瘤细胞和微生物上起重要作用。用不同剂量的母牛分支杆菌制剂免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，检测小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的水平，结果显示受免疫小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮水平明显高于未免疫小鼠（Ｐ＜０．０１－０．００１）。不同剂量母牛分支杆菌制剂免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，腹腔巨噬细胞产生的一氧化氮水平差别不显著（Ｐ＞０．０５）。因此认为，母牛分支杆菌制剂作为结核病免疫治疗剂其作用之一是活化巨噬细胞产生一氧化氮，从而达到杀菌的目的。     

母牛分支杆菌制剂通过一氧化氮进行免疫调节的作用

目的用母牛分支杆菌制剂作用于不同状态的动物，通过产生一氧化氮（ＮＯ）而达到不同的效果。方法在第一组实验中，用不同剂量的母牛分支杆菌制剂免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过检测ＮＯ－２间接反映ＮＯ的变化。在第二组实验中，用结核杆菌Ｈ３７Ｒｖ感染豚鼠，１０天后给受染豚鼠注射母牛分支杆菌制剂。结果受免疫小鼠腹腔巨噬细胞产生ＮＯ－２水平明显高于未免疫小鼠（Ｐ＜０．０１）。不同剂量母牛分支杆菌制剂免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠间腹腔巨噬细胞产生ＮＯ－２水平差别不显著（Ｐ＞０．０５）。受染豚鼠注射母牛分支杆菌制剂后，ＮＯ－２产生水平明显低于单纯结核杆菌Ｈ３７Ｒｖ感染组。结论母牛分支杆菌制剂不但能提高机体免疫水平，而且可以在结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ感染造成组织细胞破坏的条件下，调整免疫反应，进而减少组织损伤。     

利用噬菌体杀灭巨噬细胞内耻垢分枝杆菌的实验研究

目的探讨噬菌体能否杀灭巨噬细胞内耻垢分枝杆菌,并成为减少细胞内活菌量的手段。方法将体外培养的已感染耻垢分枝杆菌的小鼠腹腔巨噬细胞随机分为4组生理盐水组,噬菌体高剂量组、中剂量组和低剂量组。分别加入生理盐水0.1ml、10#噬菌体2.1×107噬菌斑形成单位(PFU)、2.1×106PFU和2.1×105PFU。通过洗涤去除细胞外的噬菌体与耻垢分枝杆菌,观察加入噬菌体24h后巨噬细胞内耻垢分枝杆菌活菌数量变化情况。并在电子显微镜下观察巨噬细胞吞噬噬菌体前后胞内改变情况。结果24h后生理盐水组巨噬细胞内活菌数的对数值为5.74±0.18,噬菌体高、中、低剂量组的活菌数对数值分别为4.77±0.08、4.97±0.17、5.33±0.13。生理盐水组的活菌数高于噬菌体高、中、低剂量组,其中生理盐水组与噬菌体高、中剂量组之间比较差异有统计学意义(P<0.01)。高、中剂量组间差异无统计学意义(P>0.05),高、低剂量组间差异有统计学意义(P<0.01)。电子显微镜显示噬菌体能感染细胞内的耻垢分枝杆菌,合成子代噬菌体。结论感染了分枝杆菌的巨噬细胞可以同时吞噬10#噬菌体,进入细胞内的噬菌体能感染裂解胞内分枝杆菌使活菌量减少,使噬菌体治疗分枝杆菌感染成为可能。     

无细胞M.Smegmatis 菌苗的研究与应用

结核病是世界卫生组织(WHO)公布的危害人类健康的十大疾病之一.我国目前同样面临结核病的严峻挑战,2000年全国结核病流行病学调查结果表明,我国目前有近半人口(约5.5亿)感染了结核菌,其中有5000多万人为结核菌素实验强反应者(硬结直径≥15m或有水泡、坏死),因其结核发病率极高,被称为结核感染高危人群.如何控制这些人潜在的内源性复发、外源性再感染和发病,是结核病控制的重点.     

酶斑免疫结合技术检测脑脊液中结核杆菌抗原及诊断价值的探讨

用酶斑免疫结合技术(Dot-Immuno-Binding Technique,DIBT)建立敏感的脑脊液中检测结核杆菌抗原方法,早期诊断结核性脑膜炎.15例结核性脑膜炎患者不同期42份脑脊液中38份呈阳性反应.此法可测最低抗原量为10ng/ml.并用结核杆菌A60为抗原检测脑脊液中相应抗体作对照。1例患者于发病5天即发现抗原。此法不需特殊仪器,适合早期、快速诊断。     

原核高效制备人乳头瘤病毒16型L1病毒样颗粒

目的通过原核表达系统高效制备人乳头瘤病毒(HPV)16晚期蛋白L1病毒样颗粒(VLPs)。方法构建HPV16L1基因序列优化前后的PET30aHPV16L1重组质粒,转化大肠杆菌Rosetta(DE3);用IPTG诱导目的基因表达,两步层析方法纯化HPV16L1蛋白;电镜下观察纯化产物形成VLPs的情况。结果成功构建大肠杆菌工程菌,高效可溶表达(目的蛋白约占总蛋白的38%)并纯化HPV16L1蛋白,纯度达95%以上,电镜下观察,发现纯化后的目的蛋白为直径50 nm左右,形态与天然病毒颗粒高度相似。结论在大肠杆菌原核系统中高效、简易地制备了HPV16L1VLPs,为诊断试剂和疫苗的研制奠定基础。