海洋弧菌QY105中褐藻胶寡糖酶OalA的基因克隆、重组表达与性质研究?

目的 褐藻胶寡糖酶可将褐藻胶多糖和寡糖降解为单糖,但现有的褐藻胶寡糖酶数量极少且活力较差。本文旨在从海洋弧菌QY105中克隆寡糖酶OalA的编码基因,重组表达并研究其酶学性质。方法 利用简并PCR和SiteFinding-PCR从海洋弧菌QY105中克隆得到褐藻胶寡糖酶OalA的编码基因,在大肠杆菌中进行重组表达,对重组酶进行分离纯化及酶学性质研究。结果 褐藻胶寡糖酶OalA基因全长2082 bp,编码一条含有693个氨基酸残基的多肽链,理论分子量为79.17 kDa,理论等电点为4.98,属于多糖裂解酶第15家族（PL-15）。重组OalA比活力为9.2 U?mg?1,最适温度30 ℃,在10 ℃的酶活力达到最高酶活的45%,最适pH7.6,在低于30 ℃和pH6~10范围内稳定,偏好降解polyM。结论 OalA具有低温酶的特点,且对polyM具有偏好性,可用于褐藻胶单糖制备、PL-15家族结构与功能相互关系研究等领域。