大鼠原代肝细胞药物相互作用模型的建立

目的 建立并考察适用于药物相互作用研究的体外大鼠原代肝细胞模型。方法 用改良Seglen两步灌流法分离肝细胞,以高糖DMEM为基础培养基培养细胞。通过检测细胞上清液中白蛋白(ALB)和尿素氮(BUN)水平、用底物探针法检测大鼠原代肝细胞中5种细胞色素P450(rCYP450)和葡萄糖醛酸转移酶(rUGT)代谢活性,考察培养时长对肝细胞功能和代谢酶活性水平的影响。原代肝细胞与利福平(RIF)、奥美拉唑(OMP)、β-萘黄酮(BNF)、苯巴比妥钠(PB)和地塞米松(DMS)共培养60 h,通过底物探针法检测代谢物的变化,用实时荧光聚合酶链反应法检测各组细胞代谢酶mRNA的表达水平,筛选多种代谢酶的阳性诱导剂。结果 改良后的分离方法可得到活率大于90%,能正常分泌ALB和BUN的原代肝细胞,培养至第9天仍可维持基本功能和正常形态。rCYP1A2、rCYP2B1和rCYP3A1随培养时长活性下降迅速,48和72 h下降至20.54%～23.15%和0～7.80%。rCYP2D2和rUGT酶活性下降较缓,48和72 h可维持在57.41%～76.77%和25.25%～35.24%。诱导剂筛选结果...     

红景天苷对脑缺血再灌注模型大鼠的治疗作用及其在脑组织中的动态含量研究

目的探究红景天苷在缺血再灌注大鼠脑组织及血浆中的分布规律，阐明并验证红景天苷可能的起效部 位。方法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型，分为红景天苷高、中、低剂量（10、5、2.5 mg·kg-1）药效实验组及 红景天苷药代实验组（15 mg·kg-1）。药代组于缺血后15、40、120 min 3 个时间点分别取血并灌注取脑，LC-MS 检测脑组织及血浆中红景天苷的含量。药效实验各组于缺血24 h 后取脑，氯化三苯基四氮唑（TTC）法检测脑 梗死面积；ELISA 法检测血浆中组织因子（TF）的表达。体外观察红景天苷对氧糖剥夺（OGD）后人脑微血管内 皮细胞（HCMEC）的保护作用，CCK-8 法检测细胞活力，试剂盒检测细胞上清中一氧化氮（NO）的含量。 结果与正常组比较，模型组大鼠出现明显的梗死灶（P＜0.01），红景天苷高、中、低剂量组可明显减少缺血 后的脑梗死面积（P＜0.05，P＜0.01），且各剂量的红景天苷可明显减轻氧糖剥夺造成的内皮损伤（P＜0.01）。 与正常组比较，模型组大鼠组织因子明显升高（P＜0.01）；而与模型组比，红景天苷高、低剂量组组织因子 表达明显降低（P＜0.01）。造模后脑组织与血浆中红景天苷于15 min 达到最高值，左、右脑组织中红景天苷 含量无明显差异，各时间点脑/血比值均低于0.1。结论红景天苷在缺血性中风急性期脑组织中的分布有限， 但红景天苷可能通过保护血液侧的内皮细胞而发挥脑保护作用。     

同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀及其活性和毒性代谢产物的方法建立与应用

目的 建立同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀（ATV）及其活性代谢产物2-羟基阿托伐他汀酸（2-HAT）、4-羟基阿托伐他汀酸（4-HAT）和毒性代谢产物阿托伐他汀内酯（ATL）的分析方法并应用于药代动力学研究。方法 采用液相色谱-串联质谱（LCMS/MS）法进行分析。采用一步沉淀法对血浆样品进行处理（血浆样品经酸化调节pH值防止构型转化），采用梯度洗脱分析样品，分析时间为5 min；采用电喷雾离子源，以多反应监测模式进行正离子检测，ATV及其代谢产物2-HAT、4-HAT、ATL及内标匹伐他汀的定量离子对的质荷比（m/z）分别为559.3→440.2、575.2→440.3、575.0→440.2、540.9→448.2和422.2→290.0。对分析方法进行全面的方法学考察后测定ATV及其代谢产物2-HAT、4-HAT、ATL的浓度，并采用WinNonlin 6.1的非房室模型计算ATV及其代谢产物的药代动力学参数。结果 方法学考察结果表明，空白血浆的内源性物质不干扰待测成分的测定，标准曲线线性关系良好，ATV、2-HAT、4-HAT和ATL的定量下限分别为0.5、0.5、0.25、0....