天花粉蛋白突变体的构建及其与重组天花粉在原核系统中的表达和纯化

目的:对天花粉蛋白(TCS)的第120-123位氨基酸进行缺失突变,并在原核系统中对其进行表达和纯化。方法:利用重叠延伸PCR的方法得到TCS突变体cDNA,并克隆入原核表达载体pET-28(a+)。酶切和测序鉴定后,将突变体质粒pET-28(a+)-mTCS转化BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导表达后,对表达产物用Ni2+-NTA亲和层析柱进行纯化和Western-blot鉴定。结果:利用重叠延伸PCR成功获得突变天花粉蛋白的编码序列,并构建pET-28(a+)-mTCS原核表达质粒。在BL21(DE3)菌中,突变体蛋白(mTCS)可被IPTG诱导性表达,并被Ni2+-NTA树脂有效纯化。结论:本实验成功获得一种突变体TCS,并建立该突变TCS的原核表达和纯化的实验方法。     

重组天花粉蛋白的真核表达及其对人宫颈癌 Caski细胞增殖的影响

目的:观察重组天花粉蛋白(recombinant trichosanthin,rTCS)高表达对人宫颈癌Caski细胞增殖的影响.方法:构建真核表达质粒pcDNA3.1(- )/6His-TCS,稳定转染Caski细胞后,RT-PCR,Western-blot筛选rTCS高表达细胞株.以转染空载质粒pcDNA3.1(一)细胞株作为对照组,MTT法检测2组细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期变化.结果:成功获得高表达rTCS的Caski细胞株,rTCS高表达能够显著抑制Caski细胞增殖(P＜0.01),并能将细胞抑制在G1和G2期(P＜0.05).结论:rTCS在细胞内高表达具有抗人宫颈癌细胞生长的作用,该研究为宫颈癌治疗提供了新的思路.     

水中分娩对低风险产妇围产期妊娠结局的影响

目的本研究旨在探讨水中分娩对低风险产妇围产期妊娠结局的影响。方法回顾性分析2010年1月至2016年12月在湖北省妇幼保健院分娩的50 574例健康初产妇的临床资料。其中,5 420例受试者接受了水中分娩(水中分娩组),45 154例受试者接受了常规分娩(常规分娩组)。收集和分析了新生儿结局和产妇结局,进行母体阴道细菌培养试验。还收集并分析了医疗干预的患者的临床数据。结果水中分娩组新生儿窒息发生率明显低于常规分娩组(P=0.025)。常规分娩组宫颈扩张3 cm后30及60 min的VAS疼痛评分显著高于水中分娩组(均P 0.001)。水中分娩组会阴裂伤(Ⅱ度,Ⅲ度)和产后尿潴留的发生率明显低于常规分娩组(均P 0.05)。此外,与传统分娩组相比,水中分娩组接受医疗干预的患者较少(均P 0.05)。结论水中分娩可以减少产妇疼痛,Ⅱ度和Ⅲ度会阴撕裂伤、产后尿潴留、新生儿窒息的发生率以及对医疗干预的需求。     

天花粉蛋白对宫颈癌Caski细胞DNMT1基因的表达和酶活性的影响

目的研究天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)对宫颈癌Caski细胞DNMT1基因的表达和酶活性的影响,并探讨天花粉蛋白抗宫颈癌及去甲基化机制,寻找新型去甲基化药物。方法应用RT-PCR、实时荧光定量PCR和Western免疫印迹分析检测天花粉蛋白对宫颈癌Caski细胞DNMTI基因表达的影响;应用DNMT1酶活性试剂盒检测天花粉蛋白对DNMT1酶活性的影响。结果经天花粉蛋白处理后,Caski细胞中DNM1基因mRNA及蛋白表达水平降低,体外酶活性分析发现,TCS对DNMT1酶活性有直接抑制作用。结论天花粉蛋白去甲基化的作用可能是通过抑制DNMTs的活性而实现的;天花粉蛋白有可能是新型的DNMTs抑制剂,具有潜在的临床应用价值。     

哺乳动物DNA甲基转移酶家族的研究进展

哺乳动物 DNA 甲基化是基因组DNA的一种主要表观遗传修饰形式,在基因的表达与调控中起重要作用,亦与哺乳动物细胞的生长和发育以及肿瘤的发生与发展密切相关.     

新型透明质酸凝胶预防妊娠中期清宫术后宫腔粘连的研究

目的评估一种新型的透明质酸凝胶(宫安康)在妊娠中期清宫术后预防宫腔粘连的疗效。方法至2017年1月至2018年11月选择90例中期妊娠在三峡大学人民医院行药物流产或自然流产后有胎盘残留的患者作为研究对象。将患者随机分为两组,实验组患者行清宫术同时放置宫安康,对照组仅作清宫术。术后3～6个月用宫腔镜检查随访宫腔粘连的发生率及严重程度。结果实验组40例,对照组42例行宫腔镜检查,结果发现实验组无宫腔粘连,对照组有8例宫腔粘连(P=0. 011)。其中有5例轻度粘连(11. 9%),3例中重度粘连(7. 1%)。结论妊娠中期清宫术中放置宫安康可以预防宫腔粘连的发生。