一次性无菌转移系统在人凝血因子Ⅷ生产中的应用

目的  评价一次性无菌转移系统（Allegro系统）用于人凝血因子Ⅷ（human coagulation factor Ⅷ,FⅧ）生产的可行性。方法  设计基于Allegro系统的一次性无菌转移系统,并对该系统进行各项验证。将该系统用于FⅧ生产并检测FⅧ的各项质量指标和稳定性。结果  Allegro系统的各项验证结果均符合规定的要求,且Allegro系统对制品的理化性质没有影响。Allegro系统的主要溶出物为叔丁醇和三甲基硅醇,溶出物含量分别为<3.0 mg/袋和<4.5 mg/袋,符合规定的安全性要求。采用Allegro系统生产的3批FⅧ的各项质量指标符合规定的标准,且FⅧ的稳定性良好。结论  一次性无菌转移系统（Allegro系统）可用于FⅧ生产。     

一种用于血液制品的病毒灭活剂——辛酸盐

本文介绍一种新型病毒灭活剂——辛酸钠，可用于血液制品的病毒灭活。其优点是辛酸钠长期以来用作血液制品的稳定剂，已被证明是安全可靠的。与传统的S／D灭活剂相比，辛酸钠灭活病毒的作用时间短、效果好，故不影响蛋白质的生物活性，因此产品的回收率较高。     

人血白蛋热原去除工艺的实验

在热原不合格的白蛋白制品中，加入血浆蛋白Ｃｏｈｎ分部ＩＶ－１，ＩＶ－４组份进行热变性沉淀去除热原，经处理后，热原检测（兔法）表明，４批平均降温０．４７℃，回收率为７２．５％白蛋白５７℃，５０ｈ的热稳定性试验合格，其它常规格检测项目均符合生物制品规程要求。     

一种用于血液制品的病毒灭活剂——辛酸盐

本文介绍一种新型病毒灭活剂--辛酸钠,可用于血液制品的病毒灭活.其优点是辛酸钠长期以来用作血液制品的稳定剂,已被证明是安全可靠的.与传统的S/D灭活剂相比,辛酸钠灭活病毒的作用时间短、效果好,故不影响蛋白质的生物活性,因此产品的回收率较高.       

重组人载脂蛋白AⅠ的原核表达及活性检测初探

目的原核表达人载脂蛋白AⅠ(ApoAⅠ),对其表达进行优化,同时对ApoAⅠ活性检测方法进行初步研究。方法通过构建3种不同的重组质粒来研究以组氨酸(His)6融合蛋白表达、(His)6-pro(前肽)融合蛋白与单目的基因表达之间的差别,其中(His)6-pro-ApoAⅠ质粒中目的基因第3、4、7位密码子进行无义突变。随后采用镍离子柱纯化重组蛋白,间接法测定ApoAⅠ对被内毒素(LPS)攻击的细胞的保护效果来检测其生物活性。结果单目的基因(pET28a-ApoAⅠ)、组氨酸标记的融合蛋白(pET28a-(His)6-ApoAⅠ)以及(His)6-pro(前肽)融合蛋白(pET28a-(His)6-pro-ApoAⅠ)表达量分别为17、40、95mg/L,经镍柱纯化后的重组蛋白经Western blot、分子筛层析以及生物活性检测,表明原核表达的ApoAⅠ为单体蛋白且具有相应的生物学活性。结论原核表达的ApoAⅠ与人血浆提纯的天然ApoAⅠ分子生物性状无明显差异。     

一种国产人凝血因子Ⅷ制剂上市后的安全性观察

目的 对上海生物制品研究所有限责任公司(上海公司)采用二次病毒灭活工艺生产的人凝血因子Ⅷ(human coagulation factorⅧ,FⅧ)进行上市后安全性观察和分析.方法 采用双中心、开放、单组设计进行FⅧ上市后安全性观察:符合入选条件的247例血友病A患者接受1次FⅧ输注,以问卷调查的方式收集FⅧ输注后30 min和1个月的不良反应,包括体温变化、过敏反应、输液反应等临床安全性指标.结果 FⅧ输注后30 min,无一患者报告发生过敏和输液反应,仅4例患者(2.26％)报告出现短时37.1～37.5℃的轻度发热.FⅧ输注后1个月,所有患者均未报告有新出现的相关不良反应.结论 上海公司采用二次病毒灭活工艺生产的FⅧ上市产品具有良好的安全性.     

人凝血因子制品稳定剂赖氨酸含量测定方法的建立

目的   建立一种检测人凝血因子制品中游离氨基酸含量的方法。方法 采用茚三酮显色法结合三氯醋酸去蛋白质方法,利用分光光度计建立标准曲线,定量测定制品中的赖氨酸含量。结果   用该方法绘制的标准曲线具有很好的相关性,相关系数(r)为0.9994±0.0004,线性范围为5.2～26.0 mg／L,试验内和试验间的变异系数分别为1.07％和3.06％,回收率为94.60％～97.60％。与氨基酸分析仪测定法比较,结果相近。结论   本方法简便快速,灵敏度和准确度高,重复性好,适用于人凝血因子制品的生产质控。     

人血浆载脂蛋白AⅠ的纯化

 目的  初探大规模纯化人血浆载脂蛋白AⅠ(apolipoprotein AⅠ,ApoAⅠ）的低成本生产工艺。方法  以人血浆组分Ⅳ为原料,通过等电点沉淀、阴离子层析、低温乙醇沉淀和超滤等步骤纯化ApoAⅠ蛋白,并放大实验室纯化方法来纯化ApoAⅠ。结果  放大的纯化方法生产的ApoAⅠ的得率和纯度分别为59.0%和85.6%,经相关方法验证为人血浆ApoAⅠ。结论  实验室方法放大的纯化工艺可纯化ApoAⅠ。     

应用明矾吸附法去除人血免疫球蛋白原液中的热原质

人血免疫球蛋白在制备过程中,由于种种因素常会污染上热原质,致使制品的生物学检验不合格,造成血源的极大浪费和经济损失.为了找到一种比较理想的、较为经济的、适用于大规模处理的去除热原质的方法,以便使这一类制品重新利用,国内有关人士进行了许多实验,并且已有不少报道[1 ～ 5],这些方法各有特点.笔者在综合了各种去除热原质报道的基础上,选用了在一定条件下的明矾吸附法去除人血免疫球蛋白原液中的热原质,并取得较好效果和较高回收率,现报告如下.