肿瘤转移与转移抑制基因

伴随抗癌基因的发现及研究的深入,又发现一类与抑制肿瘤细胞转移表型相关的基因,这类基因被命名为转移抑制基因。其发现对于肿瘤转移过程的分子机制研究无疑是令人鼓舞的。本文对近年来发现的两种侵袭和转移抑制基因nm23和TIMP的研究现状进行了介绍。     

应用RNAi技术沉默survivin基因对肺腺癌A549细胞的影响

目的 探讨RNA干扰(RNAi)沉默survivin基因对肺腺癌A549细胞的影响.方法 应用RNAi技术,以化学合成的survivin小干扰RNA(siRNA)体外转染A549细胞,采用MTT法及流式细胞仪检测转染前后A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的变化,通过RT-PCR及Western blot分析survivin mRNA和蛋白的表达情况.结果 survivin siRNA对A549的生长抑制作用呈浓度依赖性(P＜0.05),并能引起G1期细胞比率的增加和S期细胞相应的减少,诱导一定数量的细胞凋亡,转染后36、60、84、108、132h的IC50值分别为152.4、151.2、136.0、144.0、150.4nmol/L.100～200nmol/L siRNA转染组细胞的survivin表达在蛋白及RNA水平都显著低于对照组(P＜0.01),但空白对照组与空质粒组间无明显差异(P＞0.05).结论 应用siRNA沉默survivin基因可以下调肺腺癌A549细胞survivin的表达,进而抑制细胞生长、增殖并诱导细胞凋亡.RNAi的抑制效果具有特异、高效和持久的特点.     

体外长期培养对人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)具有体外增殖能力强及多向分化潜能,是目前临床应用的重要组织工程种子细胞.MSC经体外培养后干细胞生物学特性是否发生改变,是临床应用中亟待了解的问题.本实验以正常成人骨髓源MSC为研究对象,应用流式细胞学、细胞化学和染色体显带技术,观察了体外不同传代次数的MSC表面表型、分化能力和核型改变.结果显示:随着传代次数的增加,培养的MSC向软骨细胞、成骨细胞和脂肪细胞分化的能力依次减弱,但并不伴有细胞表面标志和核型的改变.这一结果提示,尽管体外培养的MSC遗传稳定性好,但高度增殖使细胞多向分化能力非同步逐渐丧失.因此在以MSC作为种子细胞构建不同的组织时,应注意选择适宜的扩增培养代数以便获得理想的细胞数目扩增同时保留细胞最佳分化能力.     

胃康颗粒抗消化性溃疡的动物实验研究

胃康颗粒是我院在多年临床经验的基础上 ,制成的口服纯中药制剂 ,现将动物实验研究结果报道如下。1　动物与材料实验动物 :昆明种小白鼠 ,Wistar大白鼠 ,由山东中医药大学实验动物中心提供。主要药品、试剂 :胃康颗粒 (烟台毓璜顶医院提供 ,批号 ,980 2 3 0 ) ,药物组成 :黄连、白芍、吴茱萸、三七、白芨 ,每包 1 0 g。临床用量 ,每次 2 0 g,1日 3次 ;将胃康颗粒制成 1 0 0 % ( g/ml)浓度 ,冰箱4℃贮存备用。甲氰咪胍 0 .2 g× 50片 (青岛制药厂 ,批号 :951 0 0 2 )。无水乙酸分析纯 (山东单县有机化工厂 ,批号 :93 0 52 0 )。醋酸化学片 (…     

曲古抑菌素A对前列腺癌LNCaP细胞雄激素受体的清除作用

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatinA,TSA)对前列腺癌细胞的抑制作用机理。方法:四甲基偶唑氮蓝(MTT)检测药物对肿瘤细胞增殖的影响;Hochest33342染色观察细胞凋亡的形态学变化;Western印迹分析雄激素受体(AR)蛋白的表达;反转录PCR检测AR转录水平的变化。结果:TSA在较低浓度即能有效抑制LNCaP细胞的增殖,EC50为125.9nmol·L-1,并诱导肿瘤细胞凋亡;药物处理后细胞周期依赖性蛋白激酶抑制剂p21表达增高,AR呈时间及剂量依赖性被清除。TSA对AR的清除是发生在蛋白水平的降解,而不影响其转录。结论:TSA能够清除对细胞生长具有重要作用的AR细胞信号通路,从而对前列腺癌LNCaP细胞发挥抑制作用。     

基于方剂数据分析的中药用量历史变迁规律研究

目的：分析不同朝代方剂中药剂量单位及其用量的历史演变规律，为中药临床用量提供参考。方法：对《中医方剂大辞典》中收载的九万余首方剂信息进行结构化和标准化处理，构建方剂数据库，并参考文献，对不同年代的用量单位按照现代单位进行了换算，采用断代史研究方法，分析方剂中药用量的演变规律。结果：筛选有中药组成的方剂8万4千余首，涉及用量单位375个，体积单位包括升、合等149种；数量单位86种；重量单位有两、钱等63种；长度单位包括寸、尺等7种，面积单位3种；历代使用频数最多的用量单位是“两”，达一半以上，其次是钱，以清代和民国时期使用频率最高。为了探究中药每日内服用量的规律，我们筛选了13,834首能代表每日服用剂量的内服方剂，有确切用量记载的药物频次81 830次，其中以长度为单位的中药平均长度为10.19 cm；以体积为单位的中药平均体积为753.24 mL；以重量为单位的中药频次是80 135次，平均重量为21.46 g。不同朝代内服方剂单味药一日平均用量唐朝最大，达到82.53 g，其后用量减少，至明以后用量与现代相差不大，多为10 g左右。结论：本研究首次基于大样本量的方剂数据，采用剂量换算和断代史研究方法，分析了不同历史时期中药用量的概貌和演变规律，发现了历代中药用量差异很大，是受诸多因素的影响。现代临床的中药用量，不应局限于古代文献记载，而应根据当前药物的特点，药材性效毒性的变化以及病人的病情、体质等灵活运用，方能达到药到病除，发挥中药的原创优势。     

前胡丙素对大鼠缺血-再灌注心肌肌浆网钙泵功能及其蛋白水平的影响

目的研究前胡丙素对大鼠缺血-再灌注(I-R)心肌肌浆网钙泵(SERCA)的影响及机制。方法 24只雄性SD大鼠随机均分为正常对照组、I-R组、前胡丙素+I-R组和聚乙二醇400+I-R组。检测再灌注15min时冠状动脉流出量(CF)和冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,采用改良对硝基苯酚棕榈酸酯(p-NPP)法和Millipore过滤技术测定SERCA的活性和三磷酸腺苷依赖的SERCA45 Ca2+摄取率,Western blot法检测心肌细胞SERCA蛋白表达水平。结果与I-R组相比,前胡丙素+I-R组CF、SERCA蛋白表达量、SERCA的活性和45 Ca2+摄取率增高(P<0.01),LDH漏出量降低(P<0.01)。结论前胡丙素对离体大鼠心脏I-R损伤有保护作用,可能与其减轻I-R损伤引起的心肌SERCA功能和蛋白表达抑制有关。     

急性缺血性脑卒中病人早期实施综合性康复护理效果的研究

[目的]探讨早期综合性康复护理对急性缺血性脑卒中病人日常生活能力和神经功能恢复的影响。[方法]将64例首次发病的急性缺血性脑卒中病人随机分为两组，两组病人均给予神经内科常规治疗和护理，实验组病人另外进行早期综合性康复护理并持续至出院后12周。两组于入院当时、出院时、出院后6周、出院后12周用日常生活能力评估量表（RNADL）和简易智能量表（MMSE）进行效果评价。[结果]实验组病人RNADL、MMSE评分出院时即有提高，出院后12周有明显提高；出院时、出院6周、出院12周RNAPL、MMSE评分两组比较均有统计学意义（P〈0．05）。[结论]早期综合性康复护理可有效提高急性缺血性脑卒中病人的日常生活能力，并改善其神经功能。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228通过阻断Hsp90功能杀伤乳腺癌MCF-7细胞

背景与目的：雌激素受体α（estrogen receptor α,ERα）与乳腺癌发生,发展及耐药密切相关,促进ERα降解可能成为解决乳腺癌耐药的一种新策略.本研究旨在观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor,HDACi）FK228对乳腺癌MCF-7细胞系ERα的清除作用,并对其抗肿瘤作用机制进行深入研究.方法：MTF比色法测定FK228对MCF-7细胞杀伤的剂量-时间-效应关系;流式细胞仪分析细胞周期的改变;蛋白印迹及免疫共沉淀实验检测细胞内蛋白表达水平及翻译后修饰的变化.结果：FK228呈时间依赖性杀伤MCF-7细胞,阻断细胞周期于G2/M期,增强Hsp90乙酰化修饰,清除ERα及其他Hsp90底物蛋白,阻断Ras/Raf/MEK/ERK及PI3K/Akt信号通路,诱导细胞凋亡.结论：FK228通过乙酰化修饰影响Hsp90分子伴侣功能,介导ERα及其他Hsp90底物蛋白降解是其有效杀伤乳腺癌细胞的分子机制.FK228有可能成为乳腺癌治疗的新型药物.     

曲古菌素A诱导前列腺癌DU-145细胞有丝分裂的灾变

目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor,HDACi）曲古菌素（trichostatina A,TSA）对前列腺癌DU145细胞有丝分裂的影响,探讨HDACi杀伤肿瘤细胞的新机制。方法：将前列腺癌DC-145细胞分成不加药对照组和不同剂量（100、200、300、400nmol/L）TSA加药组,药物作用一定时间后,MTT法检测TSA对DU145细胞的杀伤效应,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态的变化,流式细胞术分析细胞周期的改变,免疫荧光染色观察DU145细胞异常的有丝分裂现象,Western blotting检测TSA处理对DU145细胞某些调控蛋白表达的影响。结果：TSA处理诱导DU145细胞发生有丝分裂,TSA处理24h后多核细胞数目由0.24%增加至1.21%。细胞周期计数结果显示,TSA处理后有丝分裂各期细胞比例发生明显改变,表现为有丝分裂前中期细胞所占比例增加,后末期细胞所占比例减少。免疫荧光染色显示,细胞出现多极纺锤体、染色体分离滞后等异常有丝分裂现象。TSA作用于DU145细胞后,能明显抑制Survivin蛋白的表达,增强细胞骨架蛋白Tubulin的乙酰化,并诱导P21蛋白高表达。结论：TSA能够诱使DU145细胞发生有丝分裂灾变,其机制可能与TSA降低Survivin蛋白的表达以及增强微管蛋白的乙酰化有关。