橙皮苷在低压低氧所致大鼠视网膜抗氧化能力和炎症介质调控改变中的作用

目的　探讨橙皮苷（HSD）在低压低氧所致大鼠视网膜抗氧化应激能力及炎性介质调控改变中的干预作用。方法　取健康雄性清洁级成年SD大鼠72只（144眼），随机分为对照组、低压低氧组及HSD干预组，每组24只（48眼）。对照组大鼠饲养于常氧环境，低压低氧组及HSD干预组大鼠放置于模拟海拔5000 m高度的低压氧舱内喂养。HSD干预组大鼠给予HSD灌胃，对照组和低压低氧组大鼠给予生理盐水，各组大鼠每天等量灌胃一次，连续7 d。通过HE染色光镜下观察大鼠视网膜组织形态变化；采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠视网膜谷胱甘肽(GSH)和半胱氨酸(Cys)蛋白浓度、丙二醛（MDA）含量以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）活性；Western-blot检测大鼠视网膜核因子-κB p65（NF-κB p65）和细胞色素C（Cyto-C)蛋白表达水平。结果　光镜下观察可见，与对照组相比，低压低氧组大鼠出现视网膜水肿，HSD干预组较低压低氧组大鼠视网膜水肿程度减轻。与对照组相比，低压低氧组大鼠视网膜中GSH蛋白浓度和Cys蛋白浓度降低，MDA含量升高，差异均有统计学意义（均为P<0.001）；与低压低氧组相比，HSD干预组提高了GSH蛋白浓度和Cys蛋白浓度，降低了MDA含量，GSH蛋白浓度和MDA含量两组相比差异均有统计学意义（均为P<0.001），Cys蛋白浓度两组相比差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组相比，低压低氧组大鼠视网膜中NF-κB p65蛋白表达水平和TNF-α活性升高，差异均有统计学意义（P<0.01、 P<0.001）；与低压低氧组相比，HSD干预组大鼠视网膜中NF-κB p65蛋白表达水平和TNF-α活性降低，差异均有统计学意义（P<0.05、P<0.001）。与对照组相比，低压低氧组大鼠视网膜Cyto-C蛋白表达水平明显升高，差异有统计学意义（P<0.01）；与低压低氧组相比，HSD干预组大鼠视网膜中Cyto-C蛋白表达水平降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论　HSD能够通过提高大鼠视网膜抗氧化应激能力、抑制炎症介质释放以及减少线粒体损伤而发挥保护视网膜功能的作用。     

缺氧对脑脊液-视神经屏障中脑膜上皮细胞ATP水平和细胞色素C表达的影响

背景脑膜上皮细胞（MECs）是构成脑脊液-视神经屏障的主要细胞成分。脑脊液-视神经屏障的损害可能会导致脑脊液组分的失衡,使视神经受到各种致病因素的攻击。目前对于MECs在视神经疾病中的病理作用研究甚少,机制尚不明确。目的探讨缺氧条件下人MECs的功能变化,为视神经疾病发病机制的研究提供新的线索。方法将培养的人MECs株分别制备成密度为2．5×10^3个／孔、5．0×10^3个／孔和1×10^4个／孔的细胞悬液,各取100μl分别接种于96孔板中,分别在常规培养基及体积分数21％O2（常氧组）和1％O2（缺氧组）环境下孵育2d,采用MTS法测定和比较不同氧环境下人MECs的吸光度（A490）值;采用CASY1法检测和比较不同氧环境下细胞体积及直径的变化;采用光度计测定MECs暴露不同氧环境下1d、2d后线粒体产生ATP量的变化;采用免疫荧光技术测定不同氧环境下细胞内细胞色素C的表达和定位。结果缺氧组2．5×10^3个／孔、5．0×10^3个／孔、1×10^4个／孔细胞密度组MECs的增生值（A490）分别为0．399±0．009、0．393±0．009和0．496±0．026,分别较相应的常氧组的0．424±0．131、0．413±0．111和0．537±0．021明显下降,差异均有统计学意义（t=3．777,P=0．004;t=3．251,P=0．009;t=3．037,P=0．013）。与常氧组细胞比较,缺氧组细胞的直径和体积均明显增加[（20．970±0．127）μm vs．（21．198±0．048）μm,t=-3．762,P=0．006;（5805±73）fl vs．（6026±106）fl,t=-4．124,P=0．002）]。缺氧组和缺氧＋底物组细胞分别培养2d后,细胞中ATP产生量分别为（0．900±0．225）mmol／（L·g）、（0．952±0．075）mmol／（L·g）,均明显低于常氧组的（1．389±0．145）mmol／（L·g）和常氧＋底物组的（1．401±0．122）mmol／（L·g）,差异均有统计学意义（P=0．001、0．002、0．001）。常氧组细胞中细胞色素C的绿色荧光主要分布于线粒体,而缺氧组MECs中细胞色素C的释放弥散分布于细胞质。结论缺氧环境下MECs的生理功能明显减退,推测MECs的功能损害是脑脊液和视神经之间的屏障完整性受到损害的主要机制。     

眼外伤继发性青光眼的临床分析

眼外伤在日常生活中极为常见 ,而眼外伤所致的继发性青光眼所造成的危害是不容忽视的。我院从 1993年至 1999年共收住眼外伤继发性青光眼 15 8例 15 8眼 ,现统计分析如下 :一般情况 :本组 15 8例 ,男 130例 ,女 2 8例 ,男远多于女 ,年龄最大 71岁 ,最小 3岁 ,平均 2 7岁。其中 2 0～ 40岁最多 ,为 86例(5 4 43 % ) ,其中 10～ 19岁 2 4例 (15 19% ) ,3～ 9岁为 2 0例(12 6 5 % ) ,其他年龄 2 8例 (17 73% )。工人 6 6例 (41 77% ) ,农民40例 (2 5 32 % ) ,干部 18例 (11 39% ) ,学生 2 2例 (13 92 % ) ,幼儿12例 (7 5 9% )。右眼 82例 ,…     

γ-干扰素对肿瘤坏死因子α促进牛晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的　观察γ-干扰素 (γ- interferon,γ- IFN )对肿瘤坏死因子α(tum or necrosisfactorα,TNF-α)所引起体外培养的牛晶状体上皮细胞增殖的抑制作用。方法　牛晶状体上皮细胞原代与传代培养。第 3代培养细胞中添加 TNF-α,浓度为 10 - 2 ～ 10 4μg· L- 1 ,通过甲基噻唑基四唑 (methyl thiazolyl tetrazolium ,MTT)测定法 ,观察 TNF-α对牛晶状体上皮细胞的影响 ,进一步测定γ- IFN对 TNF-α增殖影响的抑制作用。结果　 TNF-α在体外有促进牛晶状体上皮细胞增殖作用并与 TNF-α有关 ,10～ 10× 10 3μg· L- 1 OD值明显升高 ,并以 10 3μg· L- 1 最为明显 ,而γ- IFN可以抑制这一作用。结论　 TNF-α是促进晶状体上皮细胞增殖、参与后囊形成混浊的一个重要的细胞因子。γ- IFN可抑制 TNF-α促牛晶状体上皮细胞增殖作用 ,因而能抑制后发性白内障的形成     

白藜芦醇对急性低压缺氧诱导的大鼠视网膜损伤的保护作用

目的　探讨白藜芦醇对急性低压缺氧诱导的大鼠视网膜损伤的保护作用及机制。方法　将72只健康SD大鼠随机分成3组:常氧对照组、低氧模型组、低氧+白藜芦醇（resveratrol,RES）干预组（RES干预组）。常氧对照组大鼠在常氧环境下喂养,低氧模型组及RES干预组大鼠置于低压氧舱内（模拟5000 m的海拔高度）喂养,RES干预组每日并给予腹腔注射30 mg·kg^-1 RES 1次。各组大鼠在不同处理7 d后剥离视网膜,免疫组织化学法观察大鼠视网膜组织中胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）和缺氧诱导因子-1（hypoxia-inducible factor-1,HIF-1）的表达,RT-PCR检测核转录因子-kappaB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）和脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）mRNA的表达。结果　低氧模型组大鼠视网膜GFAP与HIF-1的表达较常氧对照组增加,BDNF mRNA（2.627±0.633）和NF-κB mRNA（1.712±0.198）的相对表达量较常氧对照组（2.000±0.518、1.053±0.483）上调（P= 0.013、0.008）。与低氧模型组对比,RES干预组视网膜受损程度减轻,GFAP与HIF-1的表达减少,BDNF mRNA相对表达量（2.053±0.938）显著下调,差异有统计学意义（P=0.024）,而NF-κB mRNA相对表达量（1.481±0.397）与低氧模型组相比,差异无统计学意义（P=0.455）。结论　RES对高海拔缺氧诱导的视网膜损伤有保护作用,其机制可能与调节GFAP、HIF-1、BDNF以及NF-κB的表达有关。     

缺氧对脑脊液-视神经屏障中脑膜上皮细胞内质网和线粒体膜电位的影响

目的　探讨脑膜上皮细胞（ｍｅｎｉｎｇｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ＭＥＣｓ）参与视神经疾病的发病机理,研究缺氧对ＭＥＣｓ功能变化的影响。方法　将培养的ＭＥＣｓ分别在体积分数２１％Ｏ２（对照组）和体积分数１％ Ｏ２（缺氧组）环境下孵育１ｄ和２ｄ,采用酶联免疫吸附实验测定和比较ＭＥＣｓ的总抗氧化能力（ｔｏｔａｌａｎｔｉ-ｏｘｉｄａｔｉｖｅｃａｐａｃｉｔｙ,Ｔ-ＡＯＣ）;采用ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒＲｅｄ检测和比较ＭＥＣｓ在正常氧和缺氧环境下作用２ｄ的线粒体膜电位的变化;通过测定钙联蛋白的荧光染色,以评价ＭＥＣｓ暴露于氧化应激环境后对内质网功能的影响。结果　与对照组相比,缺氧组的氧化应激能力降低,结果显示Ｔ-ＡＯＣ下降。对照组和缺氧组细胞分别培养１ｄ后,细胞中Ｔ-ＡＯＣ分别为（０．０１２４＋０．００１１）Ｕ?Ｌ－１和（０．０１１９＋０．００９０）Ｕ?Ｌ－１,差异无统计学意义（ｔ＝０．９１５、Ｐ＝０３８２）。分别培养２ｄ后,缺氧组细胞中Ｔ-ＡＯＣ（０．０１０７＋０．００８３）Ｕ?Ｌ－１低于对照组（０．０１２９＋０．００８７）Ｕ?Ｌ－１,差异有统计学意义（ｔ＝４．６１６、Ｐ＝０．００１）。不同氧环境作用于细胞２ｄ后,采用共焦显微镜荧光探针方法分析作用于对照组和缺氧组的ＭＥＣｓ线粒体膜电位的变化,结果发现缺氧组细胞荧光强度与对照组相比明显减低;同时通过荧光显微镜观察发现,缺氧组ＭＥＣｓ钙联蛋白绿色荧光强度较对照组明显增强。结论　缺氧通过影响ＭＥＣｓ内质网及线粒体功能而影响其氧化应激能力。     

谷氨酸对视神经脑膜上皮细胞的兴奋性毒性作用及其氧化应激机制

背景 作为脑脊液-视神经屏障的主要细胞成分,视神经脑膜上皮细胞(MECs)直接与脑脊液相接触,脑脊液中的组分改变可影响MECs的功能,进而对视神经的功能产生不利影响. 目的 探讨脑脊液中兴奋性神经递质谷氨酸对MECs功能的影响,为视神经疾病发病机制的研究提供新的线索. 方法 将培养的人MECs株制备成悬液并接种于96孔培养板中,密度为1×104/孔,分别在培养液中用添加100、200、400、600、800和1 000 μmol/L谷氨酸孵育12、24、36、48和72h,未添加谷氨酸者作为正常对照组,采用MTS法测定各组MECs的增生率(吸光度A490)值.采用600 μmol/L谷氨酸分别孵育MECs 24 h和48 h,未添加谷氨酸者作为正常对照组,采用实时定量PCR法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD) mRNA和热休克蛋白90(HSP90)mRNA的相对表达量;采用ELISA法检测细胞的总抗氧化能力(T-AOC),并通过荧光探针DCFH-DA观察细胞活性氧(ROS)的荧光强度. 结果 培养MECs生长良好,培养后72 h约80％细胞达到融合.不同浓度谷氨酸培养组随着谷氨酸浓度的增加及作用时间的延长细胞增生率逐渐下降,总体比较差异均有统计学意义(F浓度=52.501,P＜0.001;F时间=8.505,P＜0.001).实验后24 h和48 h谷氨酸处理组细胞中SOD mRNA相对表达量均明显低于同时间点正常对照组,差异均有统计学意义(t=20.278、t=16.724,均P＜0.001);谷氨酸作用MECs后24 h细胞中HSP90 mRNA相对表达量明显高于正常对照组,差异有统计学意义(t=5.065,P=0.002).实验后24 h谷氨酸处理组细胞中T-AOC活性为(30.835±2.094) nmol/(min·L),低于正常对照组的(32.873±2.317) nmol/(min·L),但差异无统计学意义(t=1.599,P=1.414);实验后48 h谷氨酸处理组细胞中T-AOC活性为(29.561±1.831)nmol/(min·L),低于正常对照组的(33.680±2.039) nmol/(min·L),差异有统计学意义(t=3.682,P=0.004).谷氨酸处理组细胞中ROS荧光强于正常对照组,谷氨酸处理组处理后24 h及48 h细胞中ROS含量分别为48.110±1.712和40.982±1.853,均明显高于正常对照组的36.608±1.009和37.153±1.424,差异均有统计学意义(t=14.178,P＜0.001;t=4.012,P=0.002). 结论 谷氨酸可抑制体外培养MECs的增生,其对MECs的兴奋毒性作用与氧化应激刺激作用有关.     

黄芪复方对急性低压低氧大鼠视网膜线粒体损伤的保护作用

目的　研究急性低压低氧环境对大鼠视网膜线粒体的影响及黄芪复方（radix astragali seu hedysari compound，RAHC) 的干预作用。方法　将42只健康SD大鼠随机分为正常氧含量对照组（常氧组）、低氧组、RAHC干预组。低氧组和RAHC干预组在低压氧舱中模拟5000 m海拔的喂养环境，RAHC组在喂养中每天予以RAHC汤药0.1 g·kg^-1灌胃，低氧组予以同等剂量生理盐水灌胃。各组在上述条件处理7 d后剥离视网膜，HE染色后光学显微镜下观察大鼠视网膜组织形态变化，RT-PCR法检测锰超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase，Mn-SOD）的表达，比色法测定琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase，SDH）水平，酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞色素C氧化酶（cytochrome c oxidase，COX）活性，免疫组化方法检测细胞色素C（cytochrome C，Cytc）的表达。结果　光学显微镜下观察发现，低氧组大鼠视网膜出现水肿，经RAHC干预后水肿减轻；低氧组Mn-SOD mRNA水平(0.811±0.057)U·mg^-1较常氧组(0.950±0.920)U·mg^-1下降（P<0.05），RAHC干预组Mn-SOD mRNA水平(0.884±0.101)U·mg^-1较低氧组高，差异有统计学意义（P<0.05）；低氧组SDH水平（22.009±0.384）U·mgprot^-1较常氧组（30.104±0.854）U·mgprot^-1低（P<0.05），且RAHC干预后无明显差异（P>0.05）；低氧组COX水平（0.632±0.031）ng·mL^-1较常氧组（2.461±0.097）ng·mL^-1低（P<0.01），RAHC干预组COX水平（1.204±0.037）ng·mL^-1较低氧组高，差异有统计学意义（P<0.01）。与常氧组相比，低氧组大鼠Cytc在视网膜神经节细胞层、神经纤维层、内丛状层及外丛状层中棕色染色阳性表达增强，但在RAHC干预组中的表达强度减弱。结论　急性低压低氧环境导致视网膜线粒体发生损伤，RAHC对急性低压低氧导致的视网膜损伤有保护作用，可能与上调Mn-SOD、COX活性及减少Cytc的释放有关。     

视神经脑膜上皮细胞研究进展

目前视神经疾病基础研究的热点大多侧重于神经胶质细胞、视网膜神经节细胞上,而对于包绕视神经的脑膜以及覆盖视神经脑膜的主要细胞成分———脑膜上皮细胞在视神经疾病中作用的研究甚少。脑膜上皮细胞直接与脑脊液相接触,在脑脊液和视神经之间参与屏障的形成,在保持屏障完整性上发挥重要作用。视神经脑膜上皮细胞在各种应激下可能发生结构和功能变化,从而影响脑脊液和视神经之间屏障的正常生理作用,可能成为导致视神经疾病的机制之一。本文综述了脑膜上皮细胞在维持脑脊液和视神经屏障中作用的最新研究进展,为进一步研究视神经疾病提供理论基础。