L-精氨酸与小剂量阿司匹林共同使用增强抑制血小板聚集功效以及对胃粘膜保护作用的研究

目的评价L精氨酸(LArg)与小剂量阿司匹林(ASA)共同使用是否能够增强抑制血小板聚集的作用以及对胃粘膜的保护效果。方法体外实验用枸橼酸抗凝法提取新西兰大白兔富血小板血浆(PRP),用透光度法测定血小板聚集。体内实验使用Wistar大鼠和昆明小鼠,用水浸实验以及注射利血平制作动物胃溃疡模型。给予LArg和ASA后7d后处死动物,观察胃粘膜损伤程度。结果3mmol·L-1LArg与小剂量阿司匹林同时使用时,抑制血小板聚集的作用明显增强,血小板聚集率为6.6%。同样浓度的LArg单独使用时,血小板聚集率为93.9%。二者之间存在明显差异。对胃粘膜保护作用的研究,水浸和利血平两种动物模型均显示LArg给药明显抑制了胃粘膜损伤,对胃粘膜的保护效果与抗溃疡药物法莫替丁几乎相同。结论LArg与小剂量ASA联合使用能够增强抗血小板聚集的效果,同时能够对抗ASA胃粘膜损伤的副作用。     

TGF-β1/Smad3参与调节氧化型低密度脂蛋白刺激的内皮细胞炎症蛋白表达

目的探讨转化生长因子β1/Smad(TGF-β1/Smad)信号通路参与氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的分子机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,加入ox-LDL(0.1 g/L)刺激细胞,用Western blot检测TGF-β1、Smad3磷酸化、VCAM-1和ICAM-1的表达。结果 ox-LDL明显增加人脐静脉内皮细胞VCAM-1和ICAM-1的表达(P<0.05)。ox-LDL激活人脐静脉内皮细胞TGF-β1/Smad信号通路,TGF-β1表达明显增加,Smad3磷酸化明显增强。细胞核提取物分析表明,磷酸化的Smad3在细胞核表达增加。特异性Smad3磷酸化抑制剂SIS3以浓度依赖方式抑制ox-LDL刺激的Smad3磷酸化(P<0.05),且VCAM-1和ICAM-1的表达增加(P<0.05)。结论 TGF-β1/Smad信号通路参与调节氧化型低密度脂蛋白刺激的内皮细胞炎症蛋白表达,抑制Smad3磷酸化反而增加炎症蛋白表达,提示TGF-β1/Smad3通道活化具有抑制ox-LDL刺激的内皮细胞炎症蛋白表达的影响。     

2型糖尿病患者血小板聚集、粘附、ATP释放及血小板平均体积变化的研究

目的　评价 2型糖尿病患者血小板功能变化。方法　用血小板功能分析仪测定血小板聚集、ATP释放 ,用胶原珠法测定血小板粘附。结果　糖尿病患者血小板聚集率、ATP释放均较健康人增高 (P<0 .0 5) ;糖尿病患者血小板体积明显增大 ,与健康人比较有明显差异 (P<0 .0 0 5) ;血小板粘附率两者之间无明显差异。结论　糖尿病患者血小板功能亢进表现为血小板聚集、ATP释放反应增强 ,平均体积变大 ,但没有见到血小板粘附功能的亢进。这些指标可作为糖尿病患者并发血栓性疾病的检测指标。     

银杏内酯B对内皮细胞的保护作用及分子机制研究

目的探讨银杏内酯B对氧化型低密度脂蛋白刺激脐静脉内皮细胞保护作用的分子机制。方法分别用银杏内酯B 0.2、0.4、0.6 g.L-1预孵育内皮细胞1 h,再加入ox-LDL(0.1 g.L-1)刺激细胞。用Western blot检测Lectin-likeoxidized LDL receptor-1(LOX-1)、PI3K、Nrf2、SIRT1表达及Akt磷酸化。结果 1.ox-LDL刺激内皮细胞LOX-1表达增加,银杏内酯B以剂量依赖方式抑制了LOX-1表达。2.银杏内酯B有效地抑制了ox-LDL刺激的Akt磷酸化,但对PI3K的表达无影响。3.ox-LDL刺激内皮细胞SIRT1表达降低,银杏内酯B有意义地增加了细胞SIRT1表达。4.ox-LDL刺激细胞抗氧化应激蛋白Nrf2表达明显增加,银杏内酯B下调了Nrf2的表达。结论银杏内酯B对内皮细胞保护作用与抑制LOX-1表达、Akt磷酸化,启动细胞内源性保护机制相关。     

酶联免疫吸附法测定血小板反应素1及其对前列腺癌诊断价值的研究

目的 采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血小板反应素-1(TSP-1),并分析TSP-1对前列腺癌的诊断价值.方法 用ELISA斑点法测定TSP-1,研制了3种具有分离特异抗原功能的试剂,研发了一项具有纯化蛋白能力的技术,解决非特异蛋白的交叉反应问题,建立测定TSP-1的ELISA常规方法.并用该方法测定14例良性前...     

Trizol法提取大鼠耳蜗髓磷脂P0蛋白质

目的用Trizol法提取大鼠耳蜗髓磷脂P0蛋白质(myelin protein P0,P0蛋白),与传统的蛋白裂解液裂解法比较蛋白提取效果,分析Trizol法的优势.方法Trizol法和传统的蛋白裂解液裂解法分别提取200 g～250 g Wistar大鼠(雌雄不限)耳蜗P0蛋白,用Western Blot法及考马斯亮兰(Bradford)法比较两种方法提取P0蛋白含量及效果.结果Trizol法提取的大鼠耳蜗P0蛋白与传统的蛋白裂解液裂解法提取的含量相当,效果肯定.结论 Trizol法与传统的蛋白裂解液裂解法提取的蛋白效果相当,但Trizol法简化了操作步骤,节省了单独提取蛋白质所需的蛋白酶抑制剂,节约样本,节省时间,提高工作效率,减少了蛋白和核酸降解的机会,有着更好的前景.     

硝普钠对过氧化氢诱导增龄大鼠血小板活化影响

目的:探讨过氧化氢对增龄大鼠血小板活化及NO(nitric oxide)供体硝普钠,对过氧化氢诱导下血小板活化的影响。方法:使用8个月龄、13个月龄Wistar大鼠血小板悬浮液,测定一氧化氮(nitricoxide,NO)、环磷鸟苷(cGMP)含量、血管舒张因子刺激的磷酸蛋白(vasodilator-stimulated phosphoprotein,VASP)磷酸化以及活性氧族(reactive oxygen species,ROS)水平。结果:过氧化氢刺激血小板活化时,8个月龄、13个月龄大鼠的血小板NO含量均有降低,硝普钠以剂量依赖的方式增加了大鼠血小板内的NO含量,但2组之间差异无统计学意义;硝普钠能明显增强8个月龄大鼠过氧化氢刺激的血小板VASP磷酸化水平,但对13个月龄大鼠血小板的VASP磷酸化无明显影响;硝普钠明显增加了8个月龄大鼠细胞内cGMP含量,但对13个月龄大鼠cGMP的产生无明显影响;硝普钠对2组大鼠血小板ROS产生没有抑制作用。结论:硝普钠明显增加8个月龄大鼠过氧化氢刺激血小板的cGMP含量以及VASP磷酸化,但硝普钠对8个月龄和13个月龄大鼠血小板NO产生的影响差异无统计学意义。硝普钠对13个月龄大鼠血小板VASP磷酸化以及cGMP产生的影响较小。提示老龄机体血小板功能改变与cGMP活性下降、VASP磷酸化水平降低相关。这一结果为今后抗血栓药物研究提供了新的思路靶点。     

银杏内酯B对胶原或二磷酸腺苷刺激血小板活化后一氧化氮含量及血管舒张因子刺激磷酸蛋白磷酸化的影响

背景：研究表明,增龄机体血小板一氧化氮合成能力下降,导致环磷鸟苷水平降低,进而使血小板功能亢进,成为血栓易感状态。 目的：探讨胶原或二磷酸腺苷不同血小板刺激剂诱导后,银杏内酯B对增龄机体血小板一氧化氮含量、血管舒张因子刺激的磷酸蛋白磷酸化的影响。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2006-08/2007-12在卫生部老年医学重点实验室完成。 材料：13月龄Wistar大鼠5只,36月龄新西兰白兔5只,均由中国科学院动物所提供。银杏内酯B购自徐州大观园有限公司,批号BN52021,其中银杏内酯B含量为92%,其他8%为银杏内酯A,C,M,J成分。 方法：用3.8%枸橼酸抗凝抽取全血,离心分离富血小板血浆。分别将不同浓度的银杏内酯B加入到富血小板血浆中孵育5 min,再加入10 mg/L胶原或5 μmol/L二磷酸腺苷刺激血小板5 min。 主要观察指标：使用一氧化氮试剂盒测定一氧化氮含量,Western blot法分析血小板血管舒张因子刺激的磷酸蛋白磷酸化水平,血小板聚集仪测定银杏内酯B对胶原或二磷酸腺苷诱导血小板聚集的抑制效果。 结果：800 mg/L银杏内酯B预处理的血小板经胶原刺激活化后,血小板内一氧化氮含量增加62.3%;经二磷酸腺苷刺激活化后一氧化氮含量增加24%。胶原刺激血小板活化时,银杏内酯B可明显提高血管舒张因子刺激的磷酸蛋白的磷酸化水平;二磷酸腺苷刺激血小板活化时,银杏内酯B亦可提高血管舒张因子刺激的磷酸蛋白磷酸化水平,但增加幅度不如前者明显。800 mg/L银杏内酯B几乎完全抑制了胶原诱导的血小板聚集,血小板聚集率仅为2%;但其对二磷酸腺苷诱导的血小板聚集抑制效果较弱,血小板聚集率达64%。 结论：银杏内酯B对胶原刺激血小板活化的抑制作用与一氧化氮/环磷鸟苷通道相关,能够完全阻止胶原刺激的血小板聚集,对二磷酸腺苷刺激血小板活化的抑制效果较差,提示银杏内酯B对胶原、二磷酸腺苷诱导的血小板活化有不同的调节机制。     

阿司匹林抑制ox-LDL诱导内皮细胞炎症分子表达的研究

目的评价阿司匹林对ox-LDL刺激内皮细胞炎症蛋白表达的影响。方法使用培养人脐带内皮细胞,用氧化型低密度脂蛋白刺激内皮细胞16h,终止反应后用SDS-PAGE分离蛋白,使用Western Blot分析蛋白表达的变化。ROS测定使用DCFH-DA荧光标记,用流式细胞仪测定荧光强度。结果①阿司匹林抑制ox-LDL诱导内皮细胞COX-2表达。使用ox-LDL刺激内皮细胞16h,COX-2表达增加,分别用2.5mmol·L-1和5mmol·L-1阿司匹林处理内皮细胞30min后,COX-2表达明显降低。②阿司匹林降低ox-LDL诱导的内皮细胞ICAM-1表达。ox-LDL刺激内皮细胞16h后,Western Blot结果显示ICAM-1内皮细胞表达明显增加。用免疫荧光染色的方法观察细胞获得了同样的结果,ox-LDL刺激后ICAM-1在内皮细胞膜上表达明显增加,阿司匹林处理后减少了ICAM-1在膜上的表达。③阿司匹林轻度抑制ox-LDL诱导内皮细胞ROS产生。0.3g·L-1ox-LDL刺激内皮细胞16h后细胞内ROS明显增高,但阿司匹林仅部分阻止ROS的产生。结论非甾体类抗炎药物阿司匹林对ox-LDL诱导COX-2、ICAM-1有明显的抑制作用,但不能完全阻止ox-LDL诱导的ROS产生。这些结果表明阿司匹林能够减轻氧化脂质诱导的内皮细胞炎症损伤反应。