TGF-β1/Smad3参与调节氧化型低密度脂蛋白刺激的内皮细胞炎症蛋白表达

目的探讨转化生长因子β1/Smad(TGF-β1/Smad)信号通路参与氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的分子机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,加入ox-LDL(0.1 g/L)刺激细胞,用Western blot检测TGF-β1、Smad3磷酸化、VCAM-1和ICAM-1的表达。结果 ox-LDL明显增加人脐静脉内皮细胞VCAM-1和ICAM-1的表达(P<0.05)。ox-LDL激活人脐静脉内皮细胞TGF-β1/Smad信号通路,TGF-β1表达明显增加,Smad3磷酸化明显增强。细胞核提取物分析表明,磷酸化的Smad3在细胞核表达增加。特异性Smad3磷酸化抑制剂SIS3以浓度依赖方式抑制ox-LDL刺激的Smad3磷酸化(P<0.05),且VCAM-1和ICAM-1的表达增加(P<0.05)。结论 TGF-β1/Smad信号通路参与调节氧化型低密度脂蛋白刺激的内皮细胞炎症蛋白表达,抑制Smad3磷酸化反而增加炎症蛋白表达,提示TGF-β1/Smad3通道活化具有抑制ox-LDL刺激的内皮细胞炎症蛋白表达的影响。     

银杏内酯B对内皮细胞的保护作用及分子机制研究

目的探讨银杏内酯B对氧化型低密度脂蛋白刺激脐静脉内皮细胞保护作用的分子机制。方法分别用银杏内酯B 0.2、0.4、0.6 g.L-1预孵育内皮细胞1 h,再加入ox-LDL(0.1 g.L-1)刺激细胞。用Western blot检测Lectin-likeoxidized LDL receptor-1(LOX-1)、PI3K、Nrf2、SIRT1表达及Akt磷酸化。结果 1.ox-LDL刺激内皮细胞LOX-1表达增加,银杏内酯B以剂量依赖方式抑制了LOX-1表达。2.银杏内酯B有效地抑制了ox-LDL刺激的Akt磷酸化,但对PI3K的表达无影响。3.ox-LDL刺激内皮细胞SIRT1表达降低,银杏内酯B有意义地增加了细胞SIRT1表达。4.ox-LDL刺激细胞抗氧化应激蛋白Nrf2表达明显增加,银杏内酯B下调了Nrf2的表达。结论银杏内酯B对内皮细胞保护作用与抑制LOX-1表达、Akt磷酸化,启动细胞内源性保护机制相关。     

肿瘤坏死因子α对血管平滑肌基质Gla蛋白表达的调节作用

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)如何通过核因子κB(NF-κB)信号通路调节血管平滑肌基质Gla蛋白(MGP)的表达。方法给予人主动脉平滑肌细胞(HVSMCs)TNF-α(10μg/L)刺激,或者借助于病毒载体过表达或敲低NF-κB水平,通过实时PCR分析MGP mRNA水平,克隆人MGP基因启动子,以荧光素酶作为报告基因,观察TNF-α对MGP启动子的调节作用。结果 TNF-α和NF-κB的p65亚基过表达都明显下调MGP表达,而p65-shRNA可阻断TNF-α对MGP的抑制作用,此外TNF-α通过抑制MGP基因启动子活性,在转录水平调节MGP表达。过表达MGP抑制平滑肌细胞骨形态发生蛋白2(BMP-2)的表达。结论炎症因子TNF-α通过激活NF-κB信号抑制钙化保护因子MGP的表达,并促进BMP-2表达,调节细胞的成骨分化。     

硝普钠对过氧化氢诱导增龄大鼠血小板活化影响

目的:探讨过氧化氢对增龄大鼠血小板活化及NO(nitric oxide)供体硝普钠,对过氧化氢诱导下血小板活化的影响。方法:使用8个月龄、13个月龄Wistar大鼠血小板悬浮液,测定一氧化氮(nitricoxide,NO)、环磷鸟苷(cGMP)含量、血管舒张因子刺激的磷酸蛋白(vasodilator-stimulated phosphoprotein,VASP)磷酸化以及活性氧族(reactive oxygen species,ROS)水平。结果:过氧化氢刺激血小板活化时,8个月龄、13个月龄大鼠的血小板NO含量均有降低,硝普钠以剂量依赖的方式增加了大鼠血小板内的NO含量,但2组之间差异无统计学意义;硝普钠能明显增强8个月龄大鼠过氧化氢刺激的血小板VASP磷酸化水平,但对13个月龄大鼠血小板的VASP磷酸化无明显影响;硝普钠明显增加了8个月龄大鼠细胞内cGMP含量,但对13个月龄大鼠cGMP的产生无明显影响;硝普钠对2组大鼠血小板ROS产生没有抑制作用。结论:硝普钠明显增加8个月龄大鼠过氧化氢刺激血小板的cGMP含量以及VASP磷酸化,但硝普钠对8个月龄和13个月龄大鼠血小板NO产生的影响差异无统计学意义。硝普钠对13个月龄大鼠血小板VASP磷酸化以及cGMP产生的影响较小。提示老龄机体血小板功能改变与cGMP活性下降、VASP磷酸化水平降低相关。这一结果为今后抗血栓药物研究提供了新的思路靶点。     

氯化锂通过上调焦磷酸水平抑制血管平滑肌细胞钙化

目的探讨氯化锂对血管平滑肌细胞钙化的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人主动脉血管平滑肌细胞,用钙化培养基(无机磷浓度为3 mmol/L)建立平滑肌细胞钙化模型。药物处理组用氯化锂(10 mmol/L)预处理细胞4 h后加入3 mmol/L的无机磷,继续培养细胞数天后用茜素红染色检测细胞钙盐沉积水平,同时应用焦磷酸偶联酶反应底物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)消耗法,酶标仪(OD340)检测细胞外焦磷酸的分泌;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测细胞中ankh基因的表达;采用慢病毒感染人主动脉平滑肌细胞的方法,建立对照细胞组和ankh敲低的实验细胞组,并观察其对细胞钙化的影响。结果高磷细胞组钙化检测值为(65.00±2.11)ng/g,较对照细胞组(12.39±0.38)ng/g钙化水平明显升高(P<0.01)。氯化锂预处理细胞的钙化检测值为(24.92±1.87)ng/g,与高磷对照组(60.94±4.51)ng/g比较能显著抑制高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化(P<0.01);氯化锂预处理明显上调细胞外液中焦磷酸的含量,基础条件下预处理组为(51.70±7.26)×10^-3 mmol/g,对照组为(28.71±2.55)×10^-3mmol/g(P<0.01);高磷刺激下预处理组为(34.35±4.27)×10^-3mmol/g,对照组为(20.89±4.93)×10^-3mmol/g(P<0.05),同时氯化锂预处理显著升高细胞ankh表达水平(P<0.01);而敲低ankh使无机磷诱导的血管平滑肌细胞钙化程度显著加重,敲低ankh细胞钙化检测值为(71.73±2.45)ng/g,对照组为(56.19±3.59)ng/g(P<0.01)。结论氯化锂通过上调平滑肌ANKH的表达,升高细胞外液中的焦磷酸水平,抑制高磷诱导下血管平滑肌细胞的钙化。     

银杏内酯B对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响。方法 12只8周龄C57BL/6J小鼠为正常组,24只8周龄♂ApoE-/-小鼠为阳性模型组以及药物组;药物组每天给予GB 0.6 mg灌胃。8周后处死小鼠,用病理学方法观察小鼠动脉斑块、脂质沉积以及巨噬细胞表达。用ELISA方法测定血浆RAN-TES含量。结果电镜结果显示模型组动脉斑块较大,血管内膜损伤明显,而GB组小鼠动脉内表面损伤明显减轻,斑块较小。HE染色显示了同样的结果,模型组斑块较大,GB组斑块较小。血浆RANTES测定正常组为123.81 ng.L-1,模型组为359.16 ng.L-1,GB组为193.36 ng.L-1,各组之间差异存在统计学意义(P<0.01)。结论 GB能有效地减轻ApoE-/-小鼠的动脉粥样硬化损伤,并降低血浆RANTES含量,其药理学机制可能与抑制血小板功能相关。     

银杏内酯B抑制血小板CD40Ligand表达的分子机制研究

目的探讨银杏内酯B(ginkgolide B)对活化血小板CD40 Ligand(CD40L)的影响以及相关的分子机制。方法取正常人血分离血小板,用不同浓度银杏内酯B孵育血小板5 min,然后用胶原(collagen)刺激血小板活化。用Westernblot分析PI3K表达,Akt磷酸化,CD40L的变化。结果①用collagen刺激血小板聚集,银杏内酯B(0.2、0.4、0.6 g.L-1)预处理血小板5 min,血小板聚集率明显降低,聚集率分别为77%,60%和48%。②Western blot结果显示胶原刺激血小板活化后CD40L表达明显增加,银杏内酯B以剂量依赖方式抑制了CD40L表达。③银杏内酯B对胶原刺激的血小板PI3K表达无明显影响。④collagen刺激血小板活化后Akt的磷酸化增加,银杏内酯B抑制了Akt磷酸化。结论银杏内酯B能够有效抑制collagen诱导的血小板聚集以及CD40L的表达,并明显抑制了Akt磷酸化,表明银杏内酯B能够通过PI3K/Akt信号传导通路抑制血小板活化。     

茶多酚抑制人血管内皮细胞分泌单核细胞趋化蛋白1的研究

目的通过对人血管内皮细胞炎性分子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的检测,评价茶多酚在血脂异常中对血管内皮的保护作用及其作用机制。方法应用人血管内皮细胞为研究模型,在基础或者氧化型低密度脂蛋白刺激的条件下,给予不同剂量的茶多酚,并与其他抗氧化剂水溶性维生素E(Trolox)、银杏提取物(EGb761)相比较,检测不同时间点细胞培养基当中的MCP-1含量。结果 24 h内浓度小于200μmol/L的茶多酚对内皮细胞没有明显的毒性作用,并且可以剂量依赖性地抑制内皮MCP-1的分泌(均为P<0.05)。与未处理组及其他抗氧化剂组相比,茶多酚处理组显著地降低了MCP-1的基因表达和蛋白分泌水平,并呈剂量依赖性,表现出较好的内皮保护及抗炎作用。结论与其他抗氧化剂相比,茶多酚可以在脂质氧化的条件下更好地通过抑制炎性因子的表达和分泌来保护内皮细胞。     

白藜芦醇改善高脂诱导老龄小鼠肥厚性肥胖作用的研究

目的探讨白藜芦醇对老龄小鼠肥胖的影响及其可能的作用机制.方法分别将32周龄和48周龄小鼠随机分为3组:正常对照组进食普通饲料,每天灌胃1次0.3 ml生理盐水;高脂饮食处理组进食高脂饲料(含有21%脂肪和1.25%胆固醇),每天灌胃1次0.3 ml生理盐水;高脂饮食加白藜芦醇组进食高脂饲料,每天灌胃1次白藜芦醇(22.4 mg/kg,分散于0.3 ml生理盐水中).12周后称量各组小鼠体重,并进行脂肪组织取材及称重;采用酶联免疫吸附试验检测小鼠血浆瘦素浓度;通过实时荧光定量聚合酶链式反应方法检测小鼠肥厚性肥胖相关指标.结果高脂饮食加白藜芦醇组老龄小鼠体重及皮下脂肪含量分别为(34.43±3.23)g和(3.21±1.58)%,较高脂饮食组老龄小鼠(53.16±2.16)g和(4.86±0.64)%有明显下降(均P<0.01),并与普通饮食中年小鼠数据接近;与中年小鼠比较,白藜芦醇对高脂饮食老龄小鼠瘦素的抑制作用更为显著,高脂饮食加白藜芦醇组老龄小鼠血浆瘦素浓度(0.015±0.009)g/L,较高脂饮食组老龄小鼠(0.100±0.027)g/L明显下降,且低于普通饮食的老龄小鼠(F=19.85,P=0.001),与普通饮食中年小鼠相接近;白藜芦醇可以显著增加高脂饮食老龄小鼠皮下脂肪组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达,并降低肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达(F=10.79、9.31、7.02,P=0.003、0.006,0.010).结论白藜芦醇可以显著改善老龄小鼠肥厚性肥胖,抑制瘦素分泌和上调PPARγ表达可能是其作用的关键机制.