同位素稀释-亲水作用色谱串联质谱快速测定尿液中8-羟基脱氧鸟苷和可替宁的研究

  目的  建立尿液中8-羟基脱氧鸟苷和可替宁的同位素稀释-亲水作用色谱串联质谱的快速测定方法。  方法  离心后的尿样上清液加入15N₅-8-羟基脱氧鸟苷、D₃-可替宁两种内标,以3 mmol/L甲酸铵水溶液稀释5倍,经0.22 μm水系滤器过滤后,引入液相色谱-串联质谱法（ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS）分析。以ACQUITY UPLC? BEH HILIC色谱柱（50 mm×3.0 mm, 1.7 μm）分离,3 mmol/L甲酸铵水溶液与乙腈为流动相(10∶90) 等度洗脱,柱温40 ℃,流速0.3 mL/min;质谱以电喷雾电离源（electrospray ionization, ESI）+扫描多反应监测模式检测,内标法定量。  结果  8-羟基脱氧鸟苷和可替宁在各自线性范围内线性良好,方法检出限分别为0.064 μg/L和0.035 μg/L;定量限分别为0.21 μg/L和0.12 μg/L;加标回收率分别为92.6%～102.0%和102.0%～106.0%。采用所建立的方法测定实际尿样,并通过40例样本统计分析发现,主、被动吸烟者的烟草烟气暴露量、烟草特有亚硝胺摄入量存在差异（P<0.05）,NNAL和可替宁含量在主动吸烟者尿样中含量更高;主、被动吸烟者的烟草烟气暴露与烟草特有亚硝胺暴露呈正相关（其相关系数r分别为0.487和0.786,P<0.05）。  结论  本研究成功建立同时测定尿液中8-羟基脱氧鸟苷和可替宁含量的同位素稀释-亲水作用色谱串联质谱法,该方法前处理简单、快速,通过同位素内标校正,定量灵敏准确,能够满足批量分析的需求。     

鸡胚脊髓背角神经营养物质的HPLC纯化分析

目的　纯化鸡胚脊髓背角内的神经营养物质。方法　采用 Sephadex G- 2 0 0凝胶过滤层析法分离鸡胚脊髓背角内的神经营养物质 ,以鸡胚背根神经节细胞培养结合 MTT法检测各洗脱峰液的神经营养活性。所得活性组分用高效液相色谱技术 (HPL C)进一步分离 ,同前用 MTT法检测各洗脱峰液的神经营养活性。结果　经层析获得三个洗脱峰 ,其中第 2洗脱峰液促进培养神经细胞生长的活性最强 (P<0 .0 1) ,提示 2峰洗脱液含有神经营养物质。 HPL C后获得 7个洗脱峰。经 MTT法测定各峰洗脱液对鸡胚 DRG神经细胞的生长活性发现 F峰有明显的神经营养活性 (P<0 .0 5 )。结论　通过分离纯化获得了有较强活性的神经营养物质。     

制作肾冰冻切片时琥珀酸脱氢酶的显色

琥珀酸脱氢酶能使琥珀酸钠脱Ｈ+ ,而使孵育液中的四氮盐接受此Ｈ+ 后还原成有色的二甲月赞〔1〕。恒冷箱切片机 ,是组织化学研究室和组织学实验室的重要常规设备〔2〕。也是酶组化最常用的重要技术。由于其操作简便、迅速 ,近年来已被越来越广泛地应用。下面就冰冻切片用于琥珀酸脱氢酶显示报告如下。1　实验部分1 1　仪器　ＬＥＩＣＡＣＭ 180 0型恒冷箱切片机。1 2　方法及取材　成年大白鼠 1只 ,体重 2 0 0ｇ ,不计雌雄。10 %水合氯醛麻醉后迅速剖腹取出肾脏 ,修成110 5ｃｍ3 的小块 ,立即投入液氮罐中骤冷 ,10秒后取出 ,置于冰冻切片机…     

饮食疗法控制糖尿病体会

糖尿病是一组病因和发病机理尚未完全阐明的内分泌代谢疾病 ,以高血糖为共同主要标志。因胰岛素绝对或相对不足致临床上出现烦渴、多尿、多饮、多食、疲乏、消瘦等表现。糖尿病祖国医学理论归“消渴”病范畴。根据本病的“三多”症状的孰轻孰重为主次分为“上、中、下三消”。渴而多饮为“上消” ;消谷善饥为“中消” ;渴而便数有膏为“下消”。笔者根据中西医理论在临床上主要以饮食疗法 ,辅以药物治疗来控制糖尿病发展同时提高生存质量和延长寿命。1　一般资料自 1996年以来共收集Ⅱ型糖尿病人 5 0例 ,男性 2 9例 ,女性 2 1例。年龄 4 5～…     

血清和尿液中22种真菌毒素的高效液相色谱——四极杆轨道阱质谱筛查方法建立

目的 建立血液、尿液中22种常见真菌毒素的液液萃取-高效液相色谱四极杆轨道阱质谱测定方法。方法 基于高效液相色谱-四极杆轨道阱质谱技术,首先建立22种常见真菌毒素的色谱质谱数据库。然后取血清和尿液样品,用0.10 mol/L NaOH 溶液调节至碱性,加入乙酸乙酯涡旋混合萃取,萃取液用弱的氮气吹至近干,残渣加甲醇水溶液（50∶50,v/v）复溶,经过滤后进 LC - MS/MS 分析。在一定识别标准下与数据库比对进行定性筛查。结果 尿液和血液检出限（limit of detection,LOD）分别为2.61×10 - 3～50.0 ng/ml和2.07×10 - 3～50.0 ng/ml,定量限（limit of quantitation,LOQ）分别为8.70×10 - 3～1.67×102 ng/ml和 6.91×10 - 3～1.67×102 ng/ml。尿液测定日内相对标准偏差（relative standard derivations, RSDs）为2.34%～8.40%,日间RSDs为4.80%～10.9%;血液测定日内RSDs为2.10%～10.6%,日间RSDs为3.07%～11.6%。结论 建立的快速筛查方法操作简单,具有高通量、高灵敏度和高准确性的特点,符合生物样品中毒物分析鉴定的要求,同时可以更好地发现新型毒物和未知毒物。     

气相色谱-串联质谱法测定血清中的16种多环芳烃

目的 建立血清中16种多环芳烃的气相色谱-串联质谱测定方法。方法 血清样经甲醇沉淀蛋白,加入正己烷与二氯甲烷混合溶剂萃取,萃取物氮吹至近干后,正己烷和二氯甲烷混合溶剂复溶,取1 μl上清液进样分析。16种待测多环芳烃经DB-5色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm)分离,多反应监测模式监测,内标法定量。结果 本法在1.0 μg/L～2.0×10² μg/L范围内线性良好,方法检出限为4.20×10^-2 μg/L～0.27 μg/L,加标回收率为79.7%～108.0%,精密度为2.57%～6.76%。结论 本方法具有灵敏、快速、回收率和重复性好等优点,满足人血清中多种多环芳烃测定的要求。     

知识技能竞赛在卫生检验与检疫专业人才培养中的效果及思考

目的 总结四川大学举办的3届省级卫生检验与检疫知识技能竞赛的经验,探索知识技能竞赛在卫生检验与检疫专业人才培养中的重要作用。方法 举办3届知识技能竞赛, 分析竞赛的策划、实施、影响等。结果 打造了近年来西南地区影响力最高的卫检知识技能竞赛。3年的竞赛共有28支队伍参赛,共决出了团队一等奖3名（1名/届）,二等奖9名（2～4名/届）,三等奖15名（3～6名/届）。开展知识技能竞赛,通过以赛促训、赛训结合的方式,对规范学生基本实验操作,强化学生实践动手能力,培养学生分析解决问题的综合能力,提高学生的综合素质及就业竞争力起到积极作用。结论 知识技能竞赛是卫生检验与检疫专业人才培养的重要手段。     

中药消毒剂中熊果酸的高效液相色谱分析

[目的]建立中药消毒剂中熊果酸的高效液相色谱法. [方法]样品经乙醚提取,氮气吹干,流动相定容后,高效液相色谱测定. [结果]熊果酸含量在1.0～50.0μg/ml线性良好,检出限为0.2μg/ml,标准峰面积相对标准偏差(relative standard derivation,RSD)为7.88%,样品峰面积RSD为9.06%.用于中药消毒剂样品测定,加标回收率在89.0%～104.0%.[结论]方法简便灵敏,适用于中药消毒剂的分析.     

气相色谱-电子捕获检测测定环境样品中的硫酸二甲酯含量

目的 建立分析环境样品中硫酸二甲酯含量的气相色谱-电子捕获检测法.方法 样品经过丙酮溶解提取后,其中的硫酸二甲酯经碘化钾衍生生成碘甲烷,以正己烷萃取碘甲烷,经气相色谱柱分离,电子捕获检测器检测.HP-5毛细管色谱柱(30.0 m×0.32 mm×0.25 μm)为分离柱,以高纯氮为载气,柱温60℃,进样口和检测器温度240℃,分流进样,分流比为5:1.结果 硫酸二甲酯在0.05～2.μg/mL的浓度范围内具有良好的线性关系;检出限为0.0011μg/mL;标准溶液测定的峰面积和保留时间的日内精密度[以相对标准偏差(relative standard derivation,RSD)表示]分别为4.95%和0.15%;日间精密度分别为5.99%和0.83%.方法 用于水和土壤等环境样品的分析,取得较为满意的结果,样品测定精密度分别为9.6%和7.5%,加标回收率分别为76.0%～85.0%和82.0%～110.0 %.结论 本法简便、准确、灵敏,适于环境样品中硫酸二甲酯的测定.     

气相色谱-质谱法测定白酒中3种吡嗪类化合物

摘要:目的　建立白酒中3种吡嗪类化合物的气相色谱-质谱测定方法。方法　采用直接进样和二氯甲烷提取浓缩后进样,以DB-WAX毛细管柱为分离柱,SIM模式质谱检测,内标标准曲线法定量。结果　直接进样,方法的检出限为8 μg/L;样品经浓缩后进样,方法的检出限为0.4 μg/L。方法的相对标准偏差为1.58%～2.56%,回收率为84.0%～110%。结论　方法简便快捷,灵敏准确,可用于白酒中吡嗪类化合物含量的测定。实际样品测定结果表明,不同白酒中的吡嗪类化合物含量有较大差异,与香型无关。