一株新轮状病毒引起河北省石家庄市成人腹泻爆发流行

1997年 4月 10～ 2 8日 ,在河北省石家庄市某高校发生一起成人急性腹泻的爆发流行 ,累积10 0 0多名大学生发病。经不连续聚丙烯酰胺凝胶 (PAGE)电泳检查腹泻病人粪便标本核酸图谱一致呈4 - 2 - 1- 1- 1- 1- 1排列的新轮状病毒 (新RV) 14份 ,阳性率占 4 7% (共检标本 30份 ) ,且未见其它带型的轮状病毒。提示该核酸图谱的轮状病毒是此次成人急性腹泻爆发流行的主要病原。用已知ADRV第 5及第 9基因片段末端引物进行逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR) ,结果阳性对照ADRV的扩增结果都为阳性 ,而新RV的扩增结果都为阴性。这些结果表明该新RV不属于B组轮状病毒 ,是与成人腹泻轮状病毒 (ADRV)完全不同的新RV。非ADRV的轮状病毒引起成人腹泻爆发流行在河北省尚属首次。     

应用全血滤纸条法检测鼠类流行性出血热病毒抗体的探讨

本文研究了全血滤纸条法检测鼠类抗EHF病毒抗体的可靠性。并对不同时间鼠尸的全血滤纸条法结果进行比较,效果基本一致。证实此法简便、可靠,适用于广泛的鼠间疫情监测。     

新的成人腹泻轮状病毒J19株NSP4和NSP5基因克隆和序列分析

目的克隆新的成人腹泻轮状病毒J19株NSP4和NSP5基因,并分析其基因序列.方法利用一种改进的非依赖核酸序列的单引物扩增方法扩增J19株NSP4和NSP5基因,克隆到pMD18-T载体中并进行测序.在此基础上,将J19株NSP4和NSP5的蛋白序列与其他轮状病毒蛋白序列进行比较分析和种系进化分析.结果J19株NSP4和NSP5基因为基因10和11,全长为739 bp和649 bp,它们分别编码213个和176个氨基酸.与J19株NSP4和NSP5蛋白序列一致性较高的分别是B组成人腹泻轮状病毒Bang373株（20.3%）和B组猪轮状病毒db101株（29.5%）.对J19株的NSP4和NSP5的遗传进化分析表明,J19株在进化树上的位置都靠近A、B和C组轮状病毒分支的根部,而且它比较偏向B组轮状病毒的分支.结论J19株的NSP4和NSP5与其他轮状病毒的相应蛋白序列存在显著差异.J19株NSP4和NSP5的蛋白序列比较和遗传进化分析表明新的成人腹泻轮状病毒与成人腹泻轮状病毒可能有共同起源;但是新的成人腹泻轮状病毒与成人腹泻轮状病毒存在显著差异.     

新成人腹泻轮状病毒J19株NSP1、NSP2和NSP3基因序列分析

目的 克隆新成人腹泻轮状病毒J19株三个非结构蛋白NSP1、NSP2和NSP3基因，并分析其基因序列。方法 利用一种改进的非依赖核酸序列的单引物扩增方法扩增J19株三个基因，克隆到pMD18-T载体中并进行测序。在此基础上，将J19株的NSP1、NSP2和NSP3的蛋白序列与其他轮状病毒蛋白序列进行比较分析和种系进化分析。结果J19株的NSP1、NSP2和NSP3基因为基因5、7和8，它们的全长1307个、1004个和932个核苷酸，编码395个、297个和262个氨基酸。与J19株的NSP1、NSP2和NSP3蛋白序列一致性较高的分别是B组轮状病毒KB63株（26．3％）、WH1株（46．6％）和IDIR株（29．6％）。对J19株的NSP1、NSP2和NSP3的遗传进化分析表明，J19株在进化树上的位置都靠近A、B和C组轮状病毒分支的根部，而且它比较偏向于B组轮状病毒的分支。结论 J19株的NSPI、NSP2和NSP3与其他轮状病毒的相应蛋白序列存在显著差异。J19株NSP1、NSP2、NSP3的蛋白序列比较和遗传进化分析表明新成人腹泻轮状病毒与成人腹泻轮状病毒可能有共同起源；但是新成人腹泻轮状病毒与成人腹泻轮状病毒存在显著差异。     

一种改良方法克隆新的成人腹泻轮状病毒J19株的大片段基因

目的扩增、克隆新的成人腹泻轮状病毒J19株的大片段基因。方法以新成人腹泻轮状病毒J19株的病毒核酸为材料，利用非依赖核酸序列的单引物扩增方法，扩增新的成人腹泻轮状病毒J19株的第5～11基因；根据第5～11基因序列设计7对抑制性引物，通过在PCR扩增体系中添加小片段基因的抑制性引物来提高大片段基因的PCR产量。结果当在PCR反应体系中添加2对抑制性引物时，大于2kb的大片段基因的PCR产量得到显著提高。将扩增的基因片段克隆至pMD18-T后进行测序，最后得到J19株第2、3、4基因的全长cDNA克隆。结论这种改良的非依赖核酸序列的单引物扩增方法可以用于对轮状病毒大片段基因的扩增和克隆。     

B 组轮状病毒ADRV 与RDRV 主要基因的克隆及其相关性的初步研究

目的　对２ 株 Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 图型相似的 Ｂ 组轮状病毒———成人腹泻轮状病毒（ａｄｕｌｔ ｄｉａｒｒｈｅａｒｏｔａｖｉｒｕｓ， Ａ Ｄ Ｒ Ｖ） 和大白鼠乳鼠腹泻轮状病毒（ｒａｔ ｄｉａｒｒｈｅａ ｒｏｔａｖｉｒｕｓ， Ｒ Ｄ Ｒ Ｖ） 主要基因的相关性进行研究。方法　 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 扩增 Ａ Ｄ Ｒ Ｖ 第４ 、５ 、９ 三个基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 全长拷贝，并获其ｃ Ｄ Ｎ Ａ 克隆。用 Ａ Ｄ Ｒ Ｖ第９ 基因末端引物 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 成功扩增了 Ｒ Ｄ Ｒ Ｖｄｓ Ｒ Ｎ Ａ，获得相对分子质量与 Ａ Ｄ Ｒ Ｖ 第９ 基因 Ｐ Ｃ Ｒ产物８１４ｂｐ 相等条带（ 暂称该 Ｒ Ｎ Ａ 模板为 Ｒ Ｄ Ｒ Ｖ 第９ 片段） 及其克隆。经 Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ 标记制备 Ａ Ｄ Ｒ Ｖ 第４ 、５ 、９ 及 Ｒ Ｄ Ｒ Ｖ 第９ 基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针。用核酸点杂交、 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交进行同源性比较。结果　获得 Ａ Ｄ Ｒ Ｖ 第４ 、５ 、９ 三个基因及 Ｒ Ｄ Ｒ Ｖ 第９ 基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 克隆；用 Ａ Ｄ Ｒ Ｖ 第４ 、５ 、９ 及 Ｒ Ｄ Ｒ Ｖ第９ 基因４ 个ｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针进行的点杂交和 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交结果显示，在两病毒 Ｒ Ｎ Ａ 相应点和相应片段的位置上杂交信号都为阳性，阴性对照都为阴性。     

生物素SpA对布鲁氏菌病血清检测的初步应用

本文报道了生物素葡萄球菌甲蛋白(Biotin staphy coccal Protein A,B-SPA)结合物的制备方法。建立了生物素、葡萄球菌甲蛋白、亲和素酶联免疫吸附试验(BA ELISA)方法的适宜条件,并用此法测定了B-SPA的效价,其灵敏度高达1:40万。用BA ELISA法检测了兔抗布氏菌的免疫血清,抗体滴度比常规ELISA法可高达8倍。检测布氏菌病血清中的抗原,用此法比ELISA更灵敏。为流行病学、血清学调查提供了一个非常灵敏的方法。