梅毒螺旋体外膜蛋白Gpd的基因型分析及其重组蛋白的免疫原性鉴定

目的　构建梅毒螺旋体 (Treponemapallidum ,Tp)外膜蛋白Gpd基因的原核表达载体 ,检测其表达产物的免疫原性 ,并比较梅毒螺旋体各菌株Gpd基因序列的同源度。方法　从TpNichols株基因组模板中PCR扩增Gpd基因 ,与GenBank登录的序列做blast比较 ,定向克隆构建原核表达重组体pET2 8b( + ) -Gpd ,转入大肠杆菌ril表达菌 ,SDS -PAGE分析重组蛋白的表达 ,Western -blot检测重组蛋白的免疫原性。结果　载体上所连目的基因片段序列与GenBank登录的Nichols株Gpd基因序列完全一致 ,同其他病原性密螺旋体菌株登陆序列比较同源度为 98%～ 1 0 0 %。SDS -PAGE检测诱导产物显示有一Mr约为 41kDa的特异蛋白带 ,免疫印迹技术检测其能与梅毒阳性标准血清反应。结论　Tp原核表达重组体pET2 8b( + ) -Gpd成功构建 ,且能够在ril表达菌中融合表达 ,为进一步研究该蛋白的生物学功能奠定了一定的实验基础。     

SARS病毒S蛋白部分片段B-细胞表位的多参数预测

目的预测SARS病毒S蛋白(spike glycoprotein)部分片段(aa No.400～600 & aa No.1 100～1 195)的B-细胞表位.方法应用多种参数和方法进行综合分析,包括跨膜分析、保守区分析、同源性比较、Hopp ＆ Woods亲水性参数、抗原性参数、可及性参数、β-转角、万氏法等综合预测方法.结果显示B-细胞识别的表位可能在436～456和1 136～1 146残基或其附近,这两个被预测的表位均含有β-转角和不规则卷曲结构.结论本研究为应用合成肽抗原制备抗SARS病毒S蛋白抗体、诊断非典型肺炎(severe acute respiratory syndrome, SARS)提供了依据.     

Construction of the Eukaryotic Expression Vector for Outer Membrane Protein Tp92 from Treponema pallidum and Its Preliminary Study on the Immune Responses in New Zealand Rabbits

Treponema pallidum subsp. pallidum is the causative a gents of syphilis. Presently, the annual infection rate ofdomestic and international syphilis remains rather high [1,2]. Apart from the serious nature of the disease itself, anumber of studies sugg…     

梅毒螺旋体膜蛋白Tp92真核表达重组体的构建及其表达鉴定

目的 以梅毒螺旋体(Trepondmapallidum，Tp)外膜蛋白基因Tp92为目的基因，构建Tp真核表达重组体pcDNA3．1( )-Tp92，并鉴定其在Hela细胞能否正确表达，为进一步开展TpDNA疫苗动物实验打下基础。方法 应用PCR技术从TpNichols株基因组模板中扩增Tp92基因，定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3．1( )-Tp92，脂质体介导将pcDNA3．1( )-Tp92转染入Hela细胞，以免疫酶标法和一步法RT～PCR检测pcDNA3．1( )Tp92在Hela细胞中的表达情况。结果 双酶切及测序鉴定证明成功构建Tp真核表达重组体pcDNA3．1( )-Tp92，DNA测序显示重组质粒含有2103bp的目的基因片段，读码框架正确，无碱基错配及移码突变。测序后结果经与GenBank登录的序列做blast比较，载体上所连目的基因片段序列与GenBank登录的Nichols株Tp92基因序列完全一致，同其他病原性密螺旋体菌株登陆序列比较同源度为95．5％～100％，证实本研究所得到的基因为所需基因，同时也表明该基因为Tp的保守性基因。免疫酶标法结果显示该重组体在Hela细胞能有效表达目的蛋白与梅毒阳性标准血清中相应抗体反应；RT-PCR检测结果显示RT-PCR扩增产物与Tp92基因片段大小相符，确实源于重组质粒转录后的mRNA。结论 TD真核表达重组体pcDNA3．1( )-Tp92的成功构建及在体外真核细胞中的有效表达，为进一步研制梅毒DNA疫苗及其生物学功能的研究奠定了一定的实验基础。     

梅毒螺旋体Tp0844重组蛋白的表达、纯化及免疫反应性研究

目的 克隆、表达梅毒螺旋体重组蛋白Tp0844,纯化表达产物并进行免疫反应性分析,筛选与宿主具有高反应性的Tp主要蛋白。 方法 通过生物信息学分析,获取Tp0844基因序列,构建原核载体进行诱导表达;Ni-NTA亲合层析柱纯化重组蛋白,Western印迹法检测其重组蛋白与梅毒阴阳性血清的反应情况。结果 成功构建PET-30a（+）-Tp0844原核表达重组体,经诱导表达后发现该重组体可高表达出可溶性的重组蛋白,经亲和层析纯化后获得了相对分子质量为43 000的重组蛋白;以梅毒IgG抗体阴、阳性血清为一抗,采用Western印迹法检测发现,Tp0844重组蛋白与梅毒阳性血清能发生明显特异反应,而与健康阴性血清未出现反应条带。 结论 可溶性重组表达的Tp0844蛋白具有较好的免疫反应性,可作为梅毒发病机制研究的候选抗原。     

老年女性泌尿系感染病原菌分布及耐药性监测

目的了解老年女性泌尿系感染病原菌的分布及耐药情况,指导临床合理用药。方法对医院2010～2012年泌尿系感染的老年女性患者中段尿进行细菌培养及药敏分析。结果医院老年女性泌尿系感染的细菌以革兰氏阴性菌为主,占59.2%,常见致病菌有大肠埃希菌、粪肠球菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌。真菌感染比例较高,为23.1%.大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对亚胺培南敏感,对头孢哌酮/舒巴坦和阿米卡星的耐药率较低,为4.8%～23.8%,而对其它抗菌药物耐药率较高;革兰阳性球菌对万古霉素敏感,对阿米卡星和呋喃妥因的耐药率低,为2.6%～17.9%。结论泌尿系感染病原菌的培养和耐药性监测,对临床合理用药具有重要意义。     

2010年～2011年衡阳地区泌尿系感染病原菌调查和药敏谱分析

目的探讨衡阳地区泌尿系感染病原菌的分布及其对抗菌药物的耐药性,以指导临床合理用药。方法对2010年1月～2011年12月两年间泌尿系感染的中段尿进行细菌培养、分离鉴定,并进行药敏试验。结果共有尿培养5 013例,检出1 505株病原菌,检出率为30.0%。尿路感染中最常见的病原菌是大肠埃希氏菌,占52.1%,其次是肠球菌属,占11.5%,真菌占10.3%;泌尿系感染病原菌革兰阴性杆菌对亚胺培南、美罗培南较为敏感,葡萄球菌和肠球菌属对万古霉素、呋喃妥因较为敏感,其它菌株对常用抗菌药物均产生了一定的耐药性。结论泌尿系感染病原菌的耐药严重,临床应尽早进行细菌培养和药敏试验,合理选择抗菌药物。     

铜绿假单胞菌医院感染流行病学分子研究及基因分型

目的 建立随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法检测铜绿假单胞菌(PA),调查铜绿假单胞菌医院感染流行病学的情况,为控制院内感染提供直接可靠的参考依据.方法 对2008～2009年分离的180株铜绿假单胞菌进行统计分析其临床分布;通过抗生素敏感性试验进行抗菌谱分型;再采用PAPD基因分型方法进行分析.结果 标本主要来自ICU、烧伤科、呼吸内科等.从痰液标本中分离的铜绿假单胞菌占58.9％,其次伤口分泌物标本占18.9％、中段尿16.7％,其它类型标本占5.5％.抗菌谱分型分为5型.180株铜绿假单胞菌用RAPD分型共得178株,分型率98.9％(178/180),分为9种类型:Ⅰ～Ⅸ.结论 RAPD分型技术对铜绿假单胞菌临床分离株分型率较高;同一抗菌谱型的基因型可能不同,同一基因型的抗菌谱也可能不同.     

下呼吸道感染病原菌分布及耐药性监测

目的了解医院下呼吸道感染患者的病原学特点及病原菌耐药情况,为临床合理用药提供依据。方法回顾性分析2009年1月—2010年12月本院住院呼吸道感染患者痰培养结果。结果 4380例痰培养标本中检出1326株致病菌,阳性率为30.3%,其中G-菌占76.9%、G+菌占11.1%、真菌占12.0%。耐药性分析:革兰氏阴性杆菌对阿米卡星、头孢他啶、美洛培南耐药率较低。革兰氏阳性球菌对万古霉素、米诺环素、替考拉宁耐药率较低。结论下呼吸道感染的病原菌仍以G-为主,但多药耐药的细菌及真菌的分离率呈上升趋势。在治疗时应依据药敏试验结果合理使用抗生素,以减少耐药菌株的产生。     

6 069份临床标本细菌培养结果与药敏分析

目的 总结本院2010年1～6月6 069份临床标本细菌培养结果及药敏状况,以指导临床合理使用抗生素.方法 对临床送检6 069份标本中分离出1 372株病原菌分类、药敏试验结果进行回顾分析.结果 1 372株病原菌中革兰阳性球菌196株占14.3%,革兰阴性杆菌945株占68.9%,真菌227株占16.5%,其它4株占0.3%.铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、金黄色葡萄球菌为主要细菌,感染部位以呼吸道、血液及皮肤软组织为多.常见病原菌的耐药性有上升趋势,且具有多重耐药性.结论 治疗感染性疾病时应进行病原学检查,依据药敏试验结果合理使用抗生素,以减少耐药菌株产生.