高效薄层色谱分离苦豆子生物碱的体系优化

苦豆子Sophora alopecuroides L.为我国西北常见的野生植物,其主要成分生物碱品种多、含量高,而且具有广泛而显著的药理作用[1].由于毛细管色谱只能用于个别生物碱的分析[2],而高效薄层色谱由于苦豆子生物碱分离须二次展开[3],不仅繁琐,更重要的是重现性差.     

高效薄层色谱分离苦豆子生物碱的体系优化

苦豆子Sophora alopecuroides L.为我国西北常见的野生植物,其主要成分生物碱品种多、含量高,而且具有广泛而显著的药理作用[1].由于毛细管色谱只能用于个别生物碱的分析[2],而高效薄层色谱由于苦豆子生物碱分离须二次展开[3],不仅繁琐,更重要的是重现性差.     

分子生物学技术在苦参碱抗癌机制研究中的应用

苦参碱（matrine）是我国传统中药苦参的多种活性成分中较为重要的一种生物碱，具有明显的抗肿瘤作用，临床应用价值极高。由于其抗癌机制复杂，至今仍有较多不明之处。然而，随着研究的不断深入，无创伤性的分子生物学技术日益受到人们的重视，这些技术的运用为进一步推动中医中药临床治疗肿瘤的快速发展起到了不可替代的作用。笔者拟对近年来苦参碱抗癌机制研究中所运用到的分子生物学技术作一综述，为进一步研究提供有价值的信息。     

羊胎盘肽对小鼠非特异性免疫功能的影响

目的探讨羊胎盘肽对小鼠非特异性免疫功能的影响。方法采用60Coγ射线照射的方法建立免疫抑制小鼠动物模型,利用巨噬细胞吞噬鸡红细胞和小鼠碳粒廓清实验,评价羊胎盘肽对免疫抑制状态小鼠非特异性免疫功能的影响。结果羊胎盘肽有促进巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能的作用(P<0.05),并能显著提高机体碳粒廓清的能力(P<0.01)。结论羊胎盘肽对小鼠具有一定非特异性免疫增强作用。     

以X-5型大孔树脂吸附分离苦参生物碱的实验研究

目的:研究一种环保、高效的苦参生物碱分离技术。方法:以苦参总碱吸附量和解吸率为指标,从大范围筛选树脂,并以选出的树脂进一步优化其吸附与解吸的条件。结果:所选出的树脂为X-5型非极性大孔树脂;优化的吸附条件为上柱液pH10、盐离子浓度1mol·L-1,吸附流速6BV·h-1,总生物碱的吸附量可达9.74mg·mL-1;优化的洗脱条件为60%乙醇(pH1)洗脱,解吸率可达95.5%。结论:X-5型树脂能直接从苦参渗漉液中快速吸附分离生物碱,吸附量大、解吸容易,并对环境、产品无污染,极具开发成绿色工艺潜力。     

正交试验法优选HepG2细胞最佳培养条件

目的 优选HepG2细胞最佳培养条件.方法 分别以培养基、细胞接种密度、血清含量、双抗浓度、pH、Hanks清洗次数、胰酶浓度和消化时间为量化指标设计正交试验,SPSS11.0统计软件分析,得方差分析及多重比较结果.结果 含15%胎牛血清的DMEM培养基,接种密度为4×104个/mL,双抗浓度为0.5%,pH为7.2;在汇合度达95～100%时,Hanks洗3次,0.05%胰酶-EDTA-Na2H2O消化1 min,传代效果最好,条件易于控制,且细胞能顺利生长.结论 本法为HepG2细胞最佳培养条件的确定提供了可靠的实验数据.     

羊胎盘肽的提取及质量标准的初步研究

目的:从健康山羊胎盘中分离提取具有生物学活性的羊胎盘肽,并初步确定其质量标准.方法:采用超微粉碎、反复冻融、离心和超滤的工艺分离提取羊胎盘肽,测定pH、分子量,并进行紫外扫描.结果:成功分离提取羊胎盘肽, pH在6.2～6.8,分子量主要集中35KDa附近和50～66.2KDa,双缩脲反应和茚三酮反应显示其主要成分含有蛋白质多肽,最大紫外吸峰260～280nm.结论:本生产工艺可用于羊胎盘肽的制备.     

二次回归正交旋转组合设计优化苦参生物碱渗漉提取条件

苦参Sophora flavescens Ait.系我国传统中药，为豆科槐属植物的干燥根，主要活性物质为生物碱［1］。提取生物碱的方法主要有煎煮、浸渍、回流、渗漉［2］。其中煎煮法能耗高，提取的杂质多，而生物碱提取率并不高，因为较高温度反使苦参生物碱的溶解度降低；浸渍为静态提取，故浸出率亦不高；回流提取通常可获得较高的提取率，但既能耗较高，又不便于规模化生产，且对本物系因较高温度同样提取率不高；而渗漉法为常温常压动态提取，其提取过程相当于多次逆流萃取，能以较少的提取剂获得较高的提取率，且杂质少，故提取液总碱浓度高，可为后继的分离过程打下良好基础［3］，因此本实验选用渗漉法。二次回归正交旋转组合设计是一种具有正交、回归、均匀和较高饱和程度的一种试验设计方法，属更高级的试验设计技术。二次回归正交旋转组合设计通过较少的实验提供大量的信息。模型建立之后，可以从许多角度对模型进行模拟分析，以充分发掘模型所提供的信息。如模拟寻优，从回归模型中推导、筛选出最佳的措施和策略；因子作用(效应)分析，即当其他因子为零水平时，分析某1个或2个因子对试验结果的影响等［4］。它一方面基本保留了回归正交设计的优点，如试验次数少、计算简单以及部分地消除了回归系数间的相关性；另一方面，有助于克服在回归正交设计中二次回归预测值的方差依赖于试验点在因子空间中位置的缺点［5］。它克服了正交试验只能给出最佳因素水平组合，而无法找出整个区域上因素的最佳组合和试验结果的最优值的缺陷。而对于均匀设计，是处理多因素多水平试验设计的首选方法，当描述复杂自然现象和探讨复杂的规律，实验因素和水平在5个以上时才多用此法。因此本试验选择二次回归正交旋转组合设计。近年来很多学者将二次回归正交旋转组合设计应用于生物领域研究，取得了较好的效果，然而用于天然药物提取实验的报道并不多。     

用大孔吸附树脂吸附分离苦豆子生物碱

目的 :开发一种高效、实用的提取分离苦豆子生物碱技术。方法 :以总生物碱吸附量和解吸率为指标 ,从大范围筛选树脂 ,并研究吸附与解吸优化条件。结果 :所选出的非极性大孔树脂DF01,在实验条件下对苦豆子总生物碱的吸附量和解吸率可依次达到 17mg·mL^-1和 96%。结论 :DF01型树脂能直接从苦豆籽浸取液中吸附分离生物碱 ,并且吸附快、解吸易、液体流动性好、树脂寿命长 ,具有良好的产业化前景。     

小鼠腹腔巨噬细胞的分离培养与吞噬功能测定

目的:建立小鼠腹腔巨噬细胞体外分离培养的方法,并测定其体内吞噬功能.方法:0.5%淀粉生理盐水诱导小鼠腹腔产生巨噬细胞,体外分离培养并观察细胞形态;体内吞噬5%鸡红细胞悬液,测定细胞吞噬百分数和吞噬指数.结果:小鼠腹腔巨噬细胞活率＞95%,形态典型,形成良好细胞单层;平均吞噬百分率和吞噬指数分别为26%和0.28.结论:本方法可用于小鼠腹腔巨噬细胞培养研究.