人sCD40L-Ig重组腺病毒载体的构建、表达及功能检测

目的:构建含有分泌型人胞外区CD40L融合蛋白(sCD40L-Ig)基因的重组腺病毒载体,确定其表达和功能学意义。方法:通过PCR获得人源IgGFc和sCD40L基因并予以连接,将其插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,构建重组质粒pAdTrack-sCD40L-Ig。将其与pAdEasy-1-BJ5183菌行同源重组后,用293细胞包装,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)和Western blot分析等方法鉴定重组腺病毒,并进行双向混合淋巴细胞反应(MLR)以确定其功能。结果:所构建的sCD40L-Ig基因的重组腺病毒,经酶切和PCR鉴定正确。原代腺病毒的滴度达到2.69×1011pfu/L,并有相对分子质量(Mr)为61×103的目的蛋白表达。MLR显示,重组腺病毒对淋巴细胞的增殖有抑制作用。结论:成功地构建了含有sCD40L-Ig基因的重组腺病毒,并对MLR有抑制作用。     

重组hCGPx腺病毒对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧再复氧损伤的保护作用

目的:研究重组腺病毒介导的人胞质型谷胱甘肽过氧化物酶(hCGPx)转染对人肾小管上皮细胞缺氧再复氧损伤的保护作用。方法:将含hCGPXcDNA的质粒pGEM-T-hCG-Px和重组腺病毒穿梭质粒pACCMV-pLpA重组,构建pACC-MV-hCGPx穿梭质粒后,与包装质粒pJM17共转染293细胞,构建重组腺病毒AdCMV-hCGPx。以重组腺病毒载体AdCMV-hCGPx转染体外培养的人肾小管上皮细胞株HK-2,以转染空载体的HK-2细胞为对照组,检测转染细胞中CGPx的表达水平。将HK-2细胞经缺氧再复氧损伤处理后,分别检测细胞的存活率、凋亡率及死亡率。结果:各转染组细胞中CGPx的表达率显著高于对照组(P<0.01)。经缺氧再复氧损伤处理后,AdCMV-hCGPx转染组细胞的存活率较对照组明显增强,死亡细胞明显减少,细胞凋亡明显受到抑制。结论:重组腺病毒介导的hCGPx转染人肾小管上皮细胞可保护缺氧再复氧引起的损伤。     

多因素作用对肾移植效果的影响

目的：探讨肾移植术后早期排斥反应、肾功能延迟恢复的高危因素及其机理。方法：分析167例次肾移植患者的年龄、性别、透析时间、移植史、输血次数、孕次、冷缺血时间、热缺血时间、HLA体液致敏及HLA错配数与术后早期排斥反应、肾功能延迟恢复发生的关系。结果：多因分析提示致敏与肾移植术后肾功能延迟恢复的发生相关,致敏及HLA错配数与早期排斥反应相关。结论：致敏及HLA错配影响是肾移植效果的主要危险因素。     

护肾固精方预防大鼠同种慢性移植物肾病的研究

目的:探讨护肾固精方对慢性移植物肾病的影响.方法:以Fisher大鼠作供者,Lewis大鼠作受者进行同种肾移植.移植后治疗组大鼠隔日给予护肾固精方饲喂.移植后16周作肾功能、移植肾组织学检测,测定肾组织中转化生长因子mRNA的表达.结果:与对照组比较,移植后治疗组24h尿蛋白持续保持较低的水平(P＜0.01),血清肌酐水平较低(P＜0.01),肌酐清除率高(P＜0.01);移植肾肾小球硬化程度轻(P＜0.01),Banff评分低(P＜0.01);转化生长因子β1(TGF-β1)的mRNA表达减少(P＜0.01).结论:护肾固精方对移植肾功能有保护作用,其机制与影响TGFβ1在移植肾的表达有密切关系.     

他克莫司对肾移植受者外周血NK和NKT细胞比例的影响及临床意义

他克莫司(Tacrolimus)是一种强效免疫抑制剂,现已广泛应用于肾脏、肝脏及心脏移植,有效减低了排异反应的发生,提高了移植受者的存活率.但是他克莫司个体药代动力学差异大,不同个体对其血药浓度的敏感性及耐受性有差异,故单纯依靠血药浓度监测不能有效反映移植受者的免疫状态.因此如何了解移植受者的免疫状态,指导免疫抑制剂的个体化应用,在免疫抑制不足及免疫过度之间寻找平衡,成为困扰移植医生的问题.NK细胞(natrural killer cell)是天然免疫系统的主要效应细胞.     

心脏死亡器官捐献供肾移植单中心60例经验总结

目的 探讨单中心DCD供肾移植的临床效果,总结DCD供肾移植的经验.方法 回顾性分析2011年12月至2013年4月间60例DCD和112例DCD供肾移植的临床资料.结果 依据《中国心脏死亡器官捐献指南》,实施DCD 60例,共捐献肾脏118个,实施肾移植112例.14例受者术后发生移植肾功能延迟恢复(DGF),发生率12.5％,其中未使用LifePort机械灌注冷保存DGF发生率23.1％ (6/26),使用LifePort移植肾DGF发生率9.3％(8/86).14例DGF受者4例切除移植肾,10例肾功能术后16～52 d恢复正常.急性排斥反应发生率6.3％(7/112),其中1例术后第12天移植肾破裂切除肾脏,其余经治疗后逆转.1例受者术后第15天因急性心肌梗死亡,1例术后第7天发生急性心功能衰竭死亡.移植肾存活的105例受者,随访1～15个月,移植肾功能正常.结论 在我国实施DCD切实可行,是符合伦理和我国国情的器官来源根本途径.DCD供肾移植临床效果良好,Lifeport具有清除肾脏残余微血栓、疏通肾脏微血管、评估肾脏功能及预防DGF的良好作用.     

基于人工血管置换术治疗肾移植术中髂外动脉夹层的临床效果研究

目的探究通过人工血管置换术治疗肾移植术中髂外动脉夹层的临床效果。方法选取2015年1月至2021年5月西安交通大学第一附属医院肾移植科应用人工血管置换术治疗肾移植术中髂外动脉夹层4例, 男性3例, 女性1例, 年龄28～55岁。4例肾移植受者均为术中突发髂外动脉夹层, 拆除血管缝合线发现动脉内膜剥脱堵塞髂外动脉3例, 堵塞移植肾动脉1例, 使用膨体聚四氟乙烯(ePTFE)制成的人工血管, 行髂外动脉的人工血管置换术。4例受者移植肾行二次灌注, 改与髂内动脉吻合。结果 1例受者术后1周肾功血肌酐恢复正常, 2例发生移植肾功能延迟恢复, 1例发生移植肾功能延迟合并急性排斥反应, 给予血液透析治疗, 术后2～3周血肌酐恢复正常。随访时间0.5～5.0年, 移植肾功能稳定, 术侧下肢血供及皮温正常, 活动有力自如。结论肾移植术中髂外动脉血管夹层发生率不高, 但病情进展迅速且凶险, 如不及时处理后果严重, 通过人工血管置换术治疗肾移植术中髂外动脉夹层可取得比较满意的临床效果。     

重组腺病毒介导hCGPx转染致血管内皮细胞产生抗氧化损伤作用的研究

目的 研究重组腺病毒介导的人胞浆型谷胱甘肽过氧化物酶（hCGPx）转染对血管内皮细胞ECV304氧化损伤保护作用。方法 将含hCGPx cDNA的质粒pGEM-T-hCGPx和重组腺病毒载体pACCMV-pLpA穿梭质粒进行基因重组，构建成pACCMV-hCGPx穿梭质粒后，与包装质粒pJM17共转染293细胞，构建成重组腺病毒AdCMV-hCGPx。用AdCMV—hCGPx转染体外培养的ECV304细胞并分为转染24、48和72h组，以转染空载体的细胞为对照组，检测转染细胞的基因表达水平。各组ECV304细胞经H2O2氧化损伤处理后，分别对细胞的活力和凋亡进行检测分析。结果 各转染组细胞转染基因表达率均显著高于对照组（P〈0．01）。经H2O2氧化损伤处理后，AdCMV-hCGPx转染组细胞活力较对照组明显增强，凋亡受到抑制。结论 重组腺病毒介导的hCGPx转染可保护ECV304细胞抵抗氧化损伤，具有明确的细胞保护作用，其具体保护机制可能与抗氧化和抑制细胞凋亡有关。     

肾移植患者sCD30检测的临床意义

采用 ELISA法对 87例肾移植患者在术前及术后都测定 s CD30。分析 s CD30在肾移植患者中对排斥反应的预测及诊断意义。结果表明 s CD30术前、术后均为阳性的患者 ,术后发生急性排斥反应的为 35 .7% ,高致敏组人群检测结果阳性率较高。移植前评估血清s CD30 ,为临床考虑随后的肾移植排斥反应危险性提供了相关信息。