重叠延伸PCR技术定点突变TFEB原核表达载体的构建及体外诱导表达和纯化

目的 基于重叠延伸PCR（SOE PCR）技术构建转录因子EB（TFEB）丝氨酸114位点突变体原核表达质粒,并进行体外诱导表达和纯化。 方法 根据SOE PCR技术原理设计突变引物,以pGEX-6p-1-TFEB质粒为模板,分别采用外侧引物F和R及突变引物F_n和R_n进行第1步PCR扩增,获得含突变位点的产物1和产物2。经第2步PCR退火延伸对产物1和产物2进行重叠拼接,以拼接后DNA片段为模板,采用外侧引物F和R进行第3步PCR扩增获得含突变位点的目的DNA;将其克隆至pGEX-6p-1载体,采用BamH Ⅰ和Sal Ⅰ进行酶切鉴定,DNA测序验证突变结果。于大肠杆菌（E.coli）中分别采用不同浓度异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）在不同条件下诱导TFEB及其突变体重组蛋白表达。Glutathione-Sepharose 4B琼脂糖凝珠分离纯化蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳检测纯化产物蛋白浓度和相对分子质量。 结果 第1步PCR扩增获得均含有突变位点的2条DNA片段,经第2步PCR退火延伸和第3步PCR扩增后获得大量含有突变位点的完整DNA片段。双酶切鉴定,连接的DNA片段与目的片段大小一致。DNA测序显示TFEB的114位丝氨酸（TCT）成功突变为丙氨酸（GCT）。在0.5?mmol·L^－1 IPTG、16?℃诱导过夜条件下获得TFEB及其突变体的可溶性蛋白表达。SDS-PAGE凝胶电泳,纯化后蛋白浓度较高,分子大小正确。 结论 利用SOE PCR技术成功实现了TFEB丝氨酸114位点的定点突变,并且TFEB及其突变体基因在E.coli中成功表达。     

布拉酵母菌联合蒙脱石散治疗小儿急性腹泻疗效观察

目的观察布拉酵母菌联合蒙脱石散治疗小儿急性腹泻的临床疗效。方法将97例急性腹泻患儿随机分为观察组49例和对照组48例。对照组单用双八面体蒙脱石治疗，治疗组在对照组基础上联合布拉酵母菌治疗，观察2组临床疗效和腹泻频率。结果观察组总有效率为95．92％高于对照组的81．25％，差异有统计学意义（P〈0．05）。2组治疗后腹泻频率均低于治疗前，且观察组低于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论布拉酵母菌联合蒙脱石散治疗小儿急性腹泻效果确切，能通过调节肠道菌群平衡和保持肠道菌群重建等机制改善临床症状与体征，在提高小儿生存质量和促进患儿早期康复等方面具有非常重要的作用，值得临床推广应用。     

以溶血性贫血为首发症状的肝豆状核变性2例报告

患儿女，6岁。皮肤黄染、小便黄半月，浮肿4天。半月前无明显诱因出现皮肤黄染，小便呈浓茶色，渐加重，伴腹痛、呕吐，无发热、咳嗽、腹泻等不适。曾在当地医院就诊，示血Hb最低达58g／L，网织红细胞26．97％，黄疸，白蛋白低，予护肝对症治疗，黄疸好转，白蛋白仍下降，于4天前出现颜面、腹部、双下肢水肿，为求进一步诊治来我院。     

高职高专院校护生职业生涯规划教育现状及对策研究

针对高职高专护生职业生涯规划教育现状及存在问题,提出建立职业生涯规划教育体系的对策,以期对护生的职业发展有所帮助。     

氟乙酰胺中毒62例

目的总结氟乙酰胺中毒的临床及治疗特点。方法氟乙酰胺中毒62例,结合临床表现、实验室检查,进行诊断。并予洗胃、导泻等处理,应用特效解毒剂乙酰胺注射液0.1~0.3 g/(kg.d),肌肉注射。结果本组氟乙酰胺中毒临床以神经系统及心血管系统症状为主要表现。经综合治疗,治愈58例,死亡、自动出院各2例。住院时间5~15 d。1例遗留智力低下,2例继发癫。结论乙酰胺为氟乙酰胺的特效解毒剂,应尽早、足量、足疗程应用,配合使用钙剂效果更好。     

以腹痛为主的小儿肾盂积水10例误诊分析

目的提高对临床症状不典型的小儿肾盂积水的诊断水平,减少误诊误治。方法分析10例以腹痛为主要表现的小儿肾盂积水的临床资料。结果10例中误诊为肠炎2例,肠痉挛2例,肠易激综合征1例,腹型癫痫2例,腹部占位2例,其它1例。误诊时间2~14个月。10例中手术9例,其中肾切除3例,其它方式手术6例,另外1例泌尿系结石行碎石,经治疗后腹痛未再复发。结论反复腹痛患儿仅考虑胃肠道疾患而忽略泌尿系检查是造成临床误诊的主要原因。     

儿童不典型肺结核1例

患儿男，6月。因“间断发热伴腹泻1月”入院。患儿于1月前无明显诱因出现间断发热，体温最高达41℃，用退热栓后体温可降至正常，伴腹泻，为黄色稀水便，无咳嗽、盗汗、抽搐、呼吸困难等。当地医院胸片示“右侧肺炎”，予抗感染治疗，效果差，遂来我院。     

维生素E辅助治疗HSP的效果及对患儿氧化应激水平、炎症水平的影响

目的研究维生素E辅助治疗过敏性紫癜(HSP)的效果及对患儿氧化应激水平、炎症水平的影响。方法选取2018年2月至2019年2月在浚县人民医院治疗的72例HSP患儿,采用随机数字表法分为观察组和对照组,每组36例。对照组行常规综合治疗;观察组在对照组的基础上行维生素E治疗。比较两组临床效果、血浆丙二醛(MDA)、过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)、白细胞介素-8 (IL-8)、白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及复发率等情况。结果观察组治疗后临床效果优于对照组(P<0.05)。观察组治疗后SOD、GSH-Px水平高于对照组,而MDA水平低于对照组(P<0.05)。观察组IL-8、IL-6及TNF-α水平低于对照组(P<0.05)。观察组复发率低于对照组(8.33%vs. 27.78%)(P<0.05)。结论 HSP患儿应用维生素E辅助治疗效果佳,且能够有效缓解患儿的氧化应激和炎症水平,减少复发情况的发生。     

某高校学生的膳食营养状况调查

目的:了解某高校学生膳食营养状况,为科学指导营养与合理膳食提供理论科学依据。方法:采用整群抽样方法,对某高校196名学生进行连续3d的24h膳食回顾调查。结果:男生谷类、豆类、蛋类食物摄入量均高于全国平均水平,蔬菜、禽肉类食物摄入量低于全国水平;女生谷类、豆类食物摄入量均高于全国平均水平,禽肉类食物摄入量低于全国水平。结论:大学生膳食结构不合理,有必要对大学生开展膳食营养教育,提高其健康水平。