粉防己碱对人视网膜母细胞瘤细胞株S0-Rb50 增殖凋亡影响的可能机制研究

目的 观察粉防己碱(tetrandrine,Tet)通过磷脂酰肌醇-3激酶(PI₃K)/蛋白激酶B(Akt)通路对人视网膜母细胞瘤细胞株S0-Rb50增殖及凋亡的影响。方法 对数期生长S0-Rb50细胞分为4组,即对照组、Tet低、中、高剂量组,分别用0、2.5、5.0、10.0μmol/L Tet处理,观察干预24h细胞形态学变化;MTT法检测干预24、48、72h时各组吸光度(A)值;流式细胞术检测干预24h各组细胞周期及细胞凋亡率;实时荧光定量PCR及Western blot法检测干预24h各组细胞PI₃K、Akt、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA和蛋白表达量及裂解的含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达量。结果 倒置相差显微镜观察发现,对照组细胞形态规则、融合成片,不同干预组细胞随Tet浓度升高细胞体积逐渐减小、核质比例减小,不能融合成片,视野内漂浮细胞或细胞崩解碎片增多。与对照组比较,Tet高剂量组干预24h时A值较低,差异有统计学意义(P＜0.05),Tet各剂量组干预48、72h时A值均较低,且随干预剂量升高呈降低趋势,差异均有统计学意义(P＜0.05)。对照组MTT试验A值随干预时间的延长呈升高趋势(P＜0.05),Tet高剂量组MTT试验A值随干预时间的延长无明显变化(P＞0.05)。与对照组比较,Tet各剂量组G₀/G₁、S期细胞占比、PI₃K、Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量及pAkt/Akt较低,且随干预剂量升高呈降低趋势,差异均有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,Tet各剂量组G₂/M期细胞占比、凋亡率、Bax mRNA和蛋白相对表达量及cleaved caspase-3蛋白相对表达量较高,且随干预剂量升高呈降低趋势,差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 Tet可抑制人视网膜母细胞瘤细胞株S0-Rb50增殖、促进凋亡,可能与抑制PI₃K/Akt信号通路、下调Bcl-2 mRNA和蛋白、上调Bax mRNA和蛋白及cleaved caspase-3蛋白表达相关。     

食管黏膜上皮癌变过程中与细胞骨架蛋白tensin同源的磷酸酯酶基因的表达及意义

目的探讨与细胞骨架蛋白tensin同源的磷酸酯酶基因(PTEN)在食管黏膜上皮癌变过程中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测20例正常食管黏膜、20例食管上皮非典型增生、24例原位癌、44例食管鳞癌组织中PTEN表达情况,并探讨PTEN与食管鳞癌病理分级的关系。结果正常食管黏膜、非典型增生、原位癌及食管鳞癌组织中PTEN蛋白阳性表达率分别为100%、85.00%、70.83%和45.45%,原位癌、食管鳞癌组织中PTEN蛋白阳性率低于正常食管黏膜(P<0.05),食管鳞癌组织中PTEN蛋白阳性率低于原位癌和食管上皮非典型增生组织(P<0.05)。高分化、中分化及低分化食管鳞癌组织中在患者中PTEN蛋白阳性表达率分别为75.00%(15/20)、21.43%(3/14)、20.00%(2/10),高分化食管鳞癌组织中PTEN蛋白阳性表达率显著高于中分化和低分化食管鳞癌组织中(P<0.05),中分化和低分化食管鳞癌组织中PTEN蛋白阳性表达率无明显差异(P>0.05)。结论PTEN表达降低可能与食管鳞状上皮癌变有关,并可能在食管癌早期形成与发展中起有重要的作用。     

磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B抑制剂对人脑胶质瘤细胞株U251增殖的影响

目的研究磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)特异性抑制剂LY294002对人脑胶质瘤细胞株U251增殖的影响。方法采用免疫细胞化学S-P法检测LY294002对U251细胞磷酸化蛋白激酶B(P-PKB)蛋白的表达,噻唑蓝(MTT)法检测LY294002(LY2940025、10、20、40μmol·L-1)干预24、48、72h后U251细胞增殖的抑制率。结果 LY294002以剂量、时间依赖性方式抑制U251细胞的生长,LY294002组中不同剂量的干预组与对照组相比P-PKB蛋白的表达降低,差别均有统计学意义(P<0.05);LY294002组中随着剂量的增加,其对U251细胞生长抑制率增加,不同剂量干预组间比较差别有统计学意义(P<0.01)。结论 LY294002对人脑胶质瘤U251细胞有抑制生长的作用。LY294002对P-PKB表达的抑制可能是细胞增殖受抑的重要原因。     

食管鳞癌中CD44H、P-选择素和血管内皮生长因子的表达与淋巴结转移的关系

目的探讨CD44H、P-选择素(P-selectin)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达与食管鳞癌淋巴结转移的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测60例食管鳞癌组织中CD44H、P-selectin和VEGF的表达。结果淋巴结转移组CD44H、P-selectin和VEGF的表达增强,与无淋巴结转移组的表达差异有显著性意义(P<0.05),P-selectin和VEGF在淋巴结转移组的表达呈正相关(P<0.05)。结论CD44H、P-selectin和VEGF的表达与食管鳞癌淋巴结的转移密切相关,P-selectin和VEGF存在协同关系,可作为评估食管鳞癌预后的生物学标志。     

Nestin在食管癌变过程中的表达及意义

目的 通过检测巢蛋白(Nestin)在食管正常上皮及不同病变组织中的表达及与血管内皮生长因子(VEGF)的关系,探讨巢蛋白在食管癌的发生、浸润和转移中的作用.方法 正常食管断端组织40例、非典型增生42例、原位癌30例、食管浸润癌127例,免疫组织化学及实时定量RT-PCR检测Nestin的表达并分析其与VEGF的协同关系.结果 Nestin的阳性表达率随病变的进展逐步增高,转移组的阳性表达率(96.61%)显著高于未转移组(89.66%)(P<0.05),而转移组内不同分化程度间的表达率无显著差别;Nestin与VEGF在浸润癌组织中的表达具有显著相关性(χ2=8.326,P<0.05,c=0.2578).结论 Nestin表达提示食管上皮发生了癌变以及癌细胞获得了远处转移的能力,食管鳞癌去分化及浸润、转移能力的增强与Nestin及VEGF高表达有关.     

体外转染KISS-1基因对BGC-823细胞增殖能力的影响

目的观察KISS-1基因对人胃腺癌细胞株BGC-823增殖能力的影响,探讨KISS-1基因作为胃癌基因治疗靶点的可行性。方法利用脂质体介导在体外将KISS-1基因转染人胃腺癌BGC-823细胞,经G418筛选,建立稳定高表达KISS-1蛋白的细胞系,蛋白印迹(Western blotting)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法证实转染成功,四甲基偶氮唑盐比色(MTT)实验探讨KISS-1对胃癌细胞株BGC-823增殖能力的影响。结果 Western blotting和RT-PCR结果显示KISS-1蛋白和mRNA在转基因组的表达均高于转空质粒组和对照组(P<0.05);MTT检测结果显示转基因组细胞在转染48 h和72 h后细胞增殖能力与转空质粒组和对照组相比,细胞生长受到明显抑制(P<0.05)。结论 KISS-1基因可抑制人胃腺癌细胞株BGC-823细胞的增殖能力。     

叶酸对高同型半胱氨酸血症诱发大鼠动脉粥样硬化的干预研究

目的 探讨叶酸对高同型半胱氨酸血症(HHxy)诱发大鼠动脉粥样硬化的干预效果.方法 健康8周龄雄性SD大鼠26只,体重(200±20)g,适应性喂养一周后随机分为对照组(6只)、模型组(10只)和叶酸干预组(10只).对照组给予普通饲料喂养,模型组在普通饲料喂养的基础上加2%的蛋氨酸,叶酸干预组在普通饲料的基础上加2%的蛋氨酸及0.0003%叶酸.12周后,心脏取血测定血浆同型半胱氨酸(Hcy)浓度,取胸主动脉进行电镜观察和苏木素-伊红(HE)染色、油红O染色.结果 模型组血浆Hcy水平明显高于对照组(P<0.01),叶酸干预组Hcy水平明显低于模型组(P<0.01).电镜观察和HE、油红O染色均可见模型组主动脉内皮下脂质和泡沫细胞沉积,亦即动脉粥样硬化脂纹形成.叶酸干预组与对照组相比无明显改变.结论 HHcy可诱发大鼠主动脉粥样硬化早期病变的形成,叶酸干预可有效预防HHcy引起的血管损伤.     

E26转录因子-1和信号转导与转录激活因子6在食管病变组织中的表达及临床意义

目的探讨E26转录因子-1(Ets-1)和信号转导与转录激活因子6(STAT6)在食管病变组织中的表达,并分析其相关性与临床意义。方法应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法和反转录聚合酶链反应法检测36例食管鳞癌、36例癌旁非典型增生及18例正常食管黏膜组织中Ets-1、STAT6的表达。结果 Ets-1、STAT6蛋白在正常食管黏膜、癌旁非典型增生及食管鳞癌组织中阳性表达率均依次升高,组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05),且二者呈正相关关系(r=0.447,P<0.05)。Ets-1、STAT6 mRNA在正常食管黏膜、癌旁非典型增生及食管鳞癌组织中相对含量依次升高,组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。Ets-1及STAT6异常表达与食管癌的分级、浸润深度及淋巴结转移均密切相关(P<0.05)。结论 Ets-1和STAT6异常表达与食管上皮癌变有关,二者可能具有协同作用,并可作为判断患者预后的分子指标。     

hMLH1、转化生长因子β受体Ⅱ在食管癌中的表达及意义

目的：探讨hMLH1、转化生长因子β受体Ⅱ在食管黏膜上皮癌变过程中的意义及相关性。方法采用免疫组织化学方法,检测正常食管黏膜上皮及食管不同病变组织中hMLH1、转化生长因子β受体Ⅱ的表达情况, 并分析其与临床病理参数的相关性。结果：hMLH1在食管鳞状细胞癌中的阳性表达率（14.92%）显著低于正常食管黏膜组织(95.00%)、非典型增生组织（71.43%）、原位癌组织（68.00%）,组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）。转化生长因子β受体Ⅱ在食管鳞状细胞癌中的阳性表达率（9.52%）显著低于正常食管黏膜组（85.00%）非典型增生组织（61.90%）、原位癌组织（64.00%）组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）。hMLH1和转化生长因子β受体Ⅱ阳性表达率与肿瘤的分化程度密切相关;且两者在食管癌组织中的表达具有相关性。结论：hMLH1和转化生长因子β受体Ⅱ的异常表达与食管鳞状上皮癌变有关;转化生长因子β受体Ⅱ可能是hMLH1的靶基因。