芫根调节免疫功能的小肠转录组学研究

利用生物信息学技术初步探索芫根调控肠道免疫功能的分子生物学机制。方法 选择雄性SPF级BALB/c小鼠18只，随机分为3组，每组6只。SC1组小鼠每只每次灌胃芫根提取液150 μL，SC2组小鼠每只每次灌胃绞碎芫根原浆悬液150 μL，NC组小鼠每只每次灌胃生理盐水150 μL，连续7 d每日灌胃一次。分别取每组小鼠小肠组织样品提取RNA，总RNA的质检合格后，进行转录组测序。按GO功能和KEGG信号通路对差异表达基因聚类分析揭示差异表达高度富集的免疫相关通路。从免疫角度分析芫根灌胃小鼠小肠组织的基因表达变化情况。结果 转录组测序共检测到27733条 mRNA的表达，SC1组与NC组比较，显著差异表达基因1635个，其中上调差异表达基因1236个，下调差异表达基因399个；SC2组与NC组比较，显著差异表达基因2872个，其中上调差异表达基因2233个，下调差异表达基因639个（P＜0.05）。按GO功能和KEGG信号通路聚类分析显示差异表达基因在白介素分泌、干扰素反应、T细胞受体信号通路及维生素和脂肪消化吸收等途径的富集度在两个芫根组中均居于前20位（P＜0.01），肠黏膜趋化因子CCL20和巨噬细胞极化标志物CD274等免疫蛋白编码基因差异表达显著且同属于上述多个免疫通路。结论 芫根灌胃小鼠小肠的差异表达基因在白介素分泌、干扰素反应、T细胞受体信号通路、营养物质消化吸收等途径高度富集，提示芫根对肠道免疫系统及肠黏膜功能的调节，其中CD274的表达上调和CCL20的表达下调提示诱导M1型巨噬细胞极化和T细胞活化可能是芫根调控免疫和维护肠道正常结构功能的重要途径。     

新型可视前列腺症状评分在基层医院对良性前列腺增生症的临床应用研究

目的 研究新型可视前列腺症状评分(VPSS)在基层医院对良性前列腺增生症(BPH)的临床应用。方法 选取2018年1月—2019年6月增城区人民医院泌尿外科住院BPH患者200例,分别对患者实施VPSS、国际前列腺症状评分(IPSS),比较不同受教育程度患者完成IPSS、VPSS需要帮助率、所需时间,并采用Spearman相关分析患者VPSS、IPSS评分与最大尿流率(Qmax)、平均尿流率(Qave)的相关性。结果 受教育年限<9年、≥9年的BPH患者需要在医护人员帮助下完成VPSS的比率分别为30.28%、15.52%,均小于完成IPSS需要帮助的比率(75.35%、36.21%),差异均有统计学意义(P<0.05);受教育年限<9年、≥9年的BPH患者完成VPSS所需时间分别为(109.62±47.33)s、(71.60±22.68)s,均明显小于完成IPSS所需时间[(282.67±89.46)s、(202.55±53.65)s],差异均有统计学意义(P<0.05);VPSS评分与Qmax、Qave,IPSS评分与Qmax、Qave呈明显负相关(P<0.01),VPSS评分与IPSS评分呈明显正相关(P<0.01)。结论 VPSS评分与Qmax、Qave、IPSS评分具有明显相关性,且VPSS更适用于读写能力与受教育水平较低的BPH患者,尤其在基层医院具有一定的应用价值。     

模拟微重力对NIH-3T3细胞clock及bmal1基因表达的影响

目的探讨模拟微重力对NIH-3T3细胞节律基因clock与bmal1 mRNA表达的影响。方法 NIH-3T3细胞采用回转器分别回转培养6 h,12 h,18 h,24 h,30 h,36 h,42 h和48 h,同时设置1 G静置培养为对照组。Trizol试剂提取细胞总RNA,实时定量PCR法检测节律基因clock及bmal1 mRNA在各时间点的相对表达量。通过余弦法获取节律参数,并经振幅检验分析是否存在昼夜节律。结果 clock及bmal1基因mRNA的表达趋势相近。对照组clock与bmal1 mRNA相对水平呈现节律性表达,而回转组表达无节律性。回转组mRNA相对水平最大值出现于约6 h时间点,最小值出现在约18 h,而对照组分别出现于约18 h与24 h。与对照组比回转组的周期延长了约16 h。回转后clock与bmal1的峰值相位前移。结论 NIH-3T3细胞中clock与bmal1的表达存在同步化的转录特征。模拟微重力可影响clock与bmal1节律的周期长度及峰值相位。     

孤立肾条件下肾输尿管结石的ESWL治疗

我院自1989年3月～1995年7月采用国产JT—ESWL—Ⅲ型碎石机治疗孤立肾条件下肾、输尿管结石15例,取得良好效果,现报告如下。 1 临床资料 1.1 一般资料:男11例,女4例。年龄28～65岁。右侧6例,左侧9例。肾结石10例,输尿管结石5例(上端3例,远端2例)。单发性结石11例,多发性肾结石4例。结石直径大于2.5cm3例。1例因肾肿瘤而行一侧肾切除术,2例因肾结核无功能而行一侧     

心可舒胶囊中葛根素含量的HPLC测定法

目的:建立以HPLC法测定心可舒胶囊中葛根素含量的方法.方法:色谱柱为C18硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-1.5%冰醋酸-氯仿(25:74:1),流速为1.1ml/min,检测波长为250nm.结果:葛根素平均回收率为99.2%,RSD为0.87%(n=5).结论:本方法准确、快捷、灵敏度高,重现性好,可用于心可舒胶囊质量控制.     

SERPINA3K原核表达系统的构建及其表达

目的：通过构建丝氨酸蛋白酶抑制因子SERPINA3K的原核表达载体,并将其转化到Rosetta-g ami2感受态细胞中,表达重组SERPINA3K,从而为对其功能的深入研究奠定了基础.方法：以小鼠MS-1细胞cDNA为模板通过PCR的方法扩增Serpina 3k基因的表达全片段,再将其插入到原核表达载体pET-41a中,酶切并测序鉴定重组体.将构建好的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta-gami2感受态细胞,表达产物用Western blot鉴定.结果：原核表达载体pET-4 1a-Serpina 3k成功构建,可在大肠杆菌Rosetta-gami2中高效表达,得到重组蛋白SERPINA3K,经Western blot鉴定正确.结论：成功构建SERPINA3K原核表达载体且获得表达,为研究SERPINA3K生物学活性及产品开发提供了实验基础.     

不同光暗循环周期对小鼠学习记忆的影响

目的：研究不同光暗循环周期对小鼠学习记忆的影响。方法：控制环境因素，小鼠在不同周期光暗循环的条件下，饲养6周。连续观测小鼠的活动性，通过Morris水迷宫测试小鼠的学习记忆能力。结果：小鼠活动性周期与光暗循环周期一致，短周期光暗循环能够提高小鼠的学习记忆能力。结论：短周期光暗循环能够影响小鼠的学习记忆能力，为研究学习记忆机制提供线索。     

Tat蛋白对节律基因表达的影响

【摘要】目的 探讨HIV Tat 蛋白是否可以在细胞内影响主要节律基因Clock,Cry,Bmal1,Per的表达。方法 用lipofectamineTM2000将HIVat表达质粒转入PC12细胞,使Tat在PC12细胞中表达。转染48h后提取mRNA和蛋白,分别通过实时荧光定量PCR技术和Western blot技术检测节律基因在mRNA和蛋白水平表达的变化。结果 研究结果显示,与未处理组和空质粒组相比,转染组Cry1的表达水平显著升高（P＜0.05）;Clock的表达水平显著降低（P＜0.05）;Bmal1和Per的表达水平无明显变化（P＞0.05）。 结论 HIV Tat影响了近日节律基因Cry1和Clock的表达,表现为Cry1表达水平升高,Clock表达水平下降,提示TAT蛋白可以影响节律基因的表达并且可能通过对近日节律的影响调节细胞生理功能。     

节律蛋白mPER1在NIH3T3细胞增殖和迁移中的作用

目的 研究PER1蛋白对NIH3T3细胞增殖和迁移的影响.方法 将重组表达质粒pcDNA3.1/mPER1转染入NIH3T3细胞中,并以未转染的NIH3T3细胞为对照,利用MTT法检测细胞增殖的改变.利用RT-PCR技术和Western blot检测节律蛋白mPER1对细胞迁移关键性蛋白基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响.结果 MITT法显示PER1表达上调可以抑制NIH3T3细胞增殖,RT-PCR技术和Western blot检测显示在NIH3T3细胞中,当节律蛋白mPER1表达上调时,细胞迁移关键性蛋白MMP-2在RNA和蛋白水平的表达较对照组降低.结论 上调NIH3T3细胞内的PER1蛋白表达能抑制细胞增殖以及细胞迁移的关键性MMP-2在RNA和蛋白水平的表达.