芫根调节免疫功能的小肠转录组学研究

利用生物信息学技术初步探索芫根调控肠道免疫功能的分子生物学机制。方法 选择雄性SPF级BALB/c小鼠18只，随机分为3组，每组6只。SC1组小鼠每只每次灌胃芫根提取液150 μL，SC2组小鼠每只每次灌胃绞碎芫根原浆悬液150 μL，NC组小鼠每只每次灌胃生理盐水150 μL，连续7 d每日灌胃一次。分别取每组小鼠小肠组织样品提取RNA，总RNA的质检合格后，进行转录组测序。按GO功能和KEGG信号通路对差异表达基因聚类分析揭示差异表达高度富集的免疫相关通路。从免疫角度分析芫根灌胃小鼠小肠组织的基因表达变化情况。结果 转录组测序共检测到27733条 mRNA的表达，SC1组与NC组比较，显著差异表达基因1635个，其中上调差异表达基因1236个，下调差异表达基因399个；SC2组与NC组比较，显著差异表达基因2872个，其中上调差异表达基因2233个，下调差异表达基因639个（P＜0.05）。按GO功能和KEGG信号通路聚类分析显示差异表达基因在白介素分泌、干扰素反应、T细胞受体信号通路及维生素和脂肪消化吸收等途径的富集度在两个芫根组中均居于前20位（P＜0.01），肠黏膜趋化因子CCL20和巨噬细胞极化标志物CD274等免疫蛋白编码基因差异表达显著且同属于上述多个免疫通路。结论 芫根灌胃小鼠小肠的差异表达基因在白介素分泌、干扰素反应、T细胞受体信号通路、营养物质消化吸收等途径高度富集，提示芫根对肠道免疫系统及肠黏膜功能的调节，其中CD274的表达上调和CCL20的表达下调提示诱导M1型巨噬细胞极化和T细胞活化可能是芫根调控免疫和维护肠道正常结构功能的重要途径。     

跟骨骨折手术治疗及保守治疗效果评价

目的对比分析手术与保守方式治疗跟骨骨折的临床疗效。方法将88例跟骨骨折患者分为观察组和对照组,各44例,对照组行保守治疗,观察组行手术治疗,比较两组的临床疗效。结果观察组治疗优良率明显高于对照组(P0.05);观察组治疗后Bohler角、Gissane角及跟骨宽度均优于对照组(P0.05)。结论手术方式在跟骨骨折治疗方面价值较高。     

吗啡成瘾小鼠对正常小鼠学习记忆力能力的影响

目的:用BALB/C小鼠建立动物模型,观察吗啡成瘾戒断小鼠对其周围的正常小鼠学习记忆能力的影响。方法:将吗啡成瘾戒断小鼠与正常小鼠同笼饲养,然后用Morris水迷宫实验测定正常小鼠的学习记忆能力,应用RT-PCR的方法检测正常小鼠海马中PKCa、GABA分子表达的变化。结果:水迷宫实验证明,与生理盐水组相比,实验组小鼠的学习记忆能力明显降低(P<0.05),海马中PKCa和DABA的表达都明显升高(P<0.05)。     

节律基因mPeriod2对Lewis肺癌细胞生长的影响

目的 研究节律基因mPeriod2(mPer2)对肿瘤细胞的生长抑制及诱导分化凋亡的作用。方法 体外培养Lewis肺癌细胞,使用脂质体包裹法将真核表达质粒pcDNA3．1为基础的mPer2表达质粒(pcDNA3．1-mPer2)转导入Lewis肺癌细胞内;以免疫组化及流式细胞技术检测mPer2表达;通过流式细胞技术检测稳定转染的mPer2阳性表达的Lewis肺癌细胞的生长及凋亡。结果 mPer2表达质粒(pcDNA3．1-mPer2)转染的Lewis肺癌细胞表达PERIOD2蛋白;与对照组比较,其增殖指数下降及凋亡率增加。结论 节律基因mPer2可以抑制肿瘤细胞的生长,增加肿瘤细胞的凋亡率。     

节律基因mClock在肿瘤实验化疗中的作用

目的 研究节律基因mClock在顺铂诱导小鼠Lewis肺癌细胞(LLC)凋亡中的作用.方法 体外采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(PMA)诱导LLC细胞近日节律,荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测细胞mClock基因的节律性表达.于诱导后不同时间点,顺铂(CDDP)处理细胞,24 h后四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法和流式细胞术检测(FCM)其对细胞的增殖与凋亡的影响.采用脂质体介导方法将mClock基因转染至LLC细胞,顺铂处理细胞,24 h后MTT法和流式细胞术检测其对细胞的增殖与凋亡的影响.结果 PMA作用LLC后,mClock基因呈现节律性表达.PMA诱导LLC节律表达的不同时间点,细胞对顺铂的敏感性不同.mClock过表达使顺铂作用后LLC凋亡率下降,细胞增殖明显.结论 mClock能够抑制顺铂诱导LLC的凋亡.     

太空环境对人体近日节律的影响

近日节律是生物体适应外周环境产生的最重要的生物节律之一.太空环境影响人体的近日节律,进而引发睡眠障碍等一系列健康问题,影响宇航员高质量的执行太空任务.本文对太空环境如何影响近日节律以及采取措施改善近日节律紊乱进行述评,以供今后研究与探讨.     

中国汉族人群近日钟基因与高脂血症的关联

目的 针对中国汉族人群,开展Clock、Clif节律基因多态性与高脂血症间关联研究,以进一步探讨近日节律对高脂血症的影响与作用,为基于易感基因的靶向药物治疗提供新思路.方法 采用病例-对照关联分析（casecontrol association study）,以明确诊断的205例高脂血症患者和281例健康对照者为研究对象,研究节律基因相关的基因位点与高脂血症易感性、疾病严重程度等临床表型之间的关系并阐明其机制.根据选取的节律基因位点Clock（rs3840267,rs3749474,rs10529257）和Clif（rs2289709）,确定相关位点的基因型,采用遗传统计学分析确定基因型与临床表型之间的关联性.结果 通过Clock、Clif基因多态性与高脂血症的病例-对照分析,发现Clock rs 10529257等位基因显著增加了高脂血症的患病风险（8.51％ vs 13.95％,Paalleo=0.003,ORalle.=0.529,95％CI=0.346,0.809）;Clockrs3840267、rs3749474和Clifrs2289709在病例组和对照组中无显著差异（P＞0.05）.通过高脂血症分型后病例-对照分析,发现Clock rs 10529257在Ⅳ型高脂蛋白血症亚型病例组和对照组之间有显著差异（9.72％vs 13.95％,Palleo-Ⅳ=0.043,ORalleoⅣ =0.525,95％CI=0.278,0.991）;Clif rs2289709在Ⅱb型高脂蛋白血症亚型病例组和对照组之间亦有显著差异（19.23％vs8.72％,Palleo-Ⅱb=4.738±10-4,ORalleo-Ⅱb=2.959,95％CI=1.645,5.322）.通过病例组中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平与两个阳性位点Clock rs 10529257、Clif rs2289709不同基因型比较发现,Clock rs10529257中-/A杂合子携带者与A/A纯合子基因型携带者的甘油三酯水平存在显著差异[（1.27±0.69） vs（1.76±1.22）,P=0.01];Clif rs2289709中A/G杂合子携带者与G/G纯合子基因型携带者的甘油三酯、低密度脂蛋白分别存在显著差异[（2.31±1.81） vs （1.11±0.32）,P=2.33×10^-8;（2.83±0.98） vs （1.63±0.69）,P=5.83×10^-15）.结论 本研究结果发现,节律基?     

SERPINA3K原核表达系统的构建及其表达

目的：通过构建丝氨酸蛋白酶抑制因子SERPINA3K的原核表达载体,并将其转化到Rosetta-g ami2感受态细胞中,表达重组SERPINA3K,从而为对其功能的深入研究奠定了基础.方法：以小鼠MS-1细胞cDNA为模板通过PCR的方法扩增Serpina 3k基因的表达全片段,再将其插入到原核表达载体pET-41a中,酶切并测序鉴定重组体.将构建好的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta-gami2感受态细胞,表达产物用Western blot鉴定.结果：原核表达载体pET-4 1a-Serpina 3k成功构建,可在大肠杆菌Rosetta-gami2中高效表达,得到重组蛋白SERPINA3K,经Western blot鉴定正确.结论：成功构建SERPINA3K原核表达载体且获得表达,为研究SERPINA3K生物学活性及产品开发提供了实验基础.     

不同光暗循环周期对小鼠学习记忆的影响

目的：研究不同光暗循环周期对小鼠学习记忆的影响。方法：控制环境因素，小鼠在不同周期光暗循环的条件下，饲养6周。连续观测小鼠的活动性，通过Morris水迷宫测试小鼠的学习记忆能力。结果：小鼠活动性周期与光暗循环周期一致，短周期光暗循环能够提高小鼠的学习记忆能力。结论：短周期光暗循环能够影响小鼠的学习记忆能力，为研究学习记忆机制提供线索。     

Tat蛋白对节律基因表达的影响

【摘要】目的 探讨HIV Tat 蛋白是否可以在细胞内影响主要节律基因Clock,Cry,Bmal1,Per的表达。方法 用lipofectamineTM2000将HIVat表达质粒转入PC12细胞,使Tat在PC12细胞中表达。转染48h后提取mRNA和蛋白,分别通过实时荧光定量PCR技术和Western blot技术检测节律基因在mRNA和蛋白水平表达的变化。结果 研究结果显示,与未处理组和空质粒组相比,转染组Cry1的表达水平显著升高（P＜0.05）;Clock的表达水平显著降低（P＜0.05）;Bmal1和Per的表达水平无明显变化（P＞0.05）。 结论 HIV Tat影响了近日节律基因Cry1和Clock的表达,表现为Cry1表达水平升高,Clock表达水平下降,提示TAT蛋白可以影响节律基因的表达并且可能通过对近日节律的影响调节细胞生理功能。