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1.
目的 利用原核基因工程技术克隆表达梅毒螺旋体TP0772基因,探讨其在梅毒血清学诊断中的应用.方法 PCR扩增获得TP0772基因,构建pET-28b-TP0772重组质粒,转化到大肠杆菌BL21中,以IPTG诱导蛋白质表达,经镍柱纯化后通过质谱技术鉴定.采用免疫印迹法测定其与梅毒患者血清的免疫反应性.建立基于重组TP0772抗原的ELISA间接法并对30份TPPA阳性血清和25份TPP阴性血清进行方法学评价.结果 PCR扩增获得约850 bp的基因片段,成功构建原核表达载体pET-28b-TP0772.目的蛋白分子量约为32kDa,以包涵体的表达形式存在,约占菌体总蛋白的30%.经质谱技术和免疫印迹分析证实重组蛋白为TP0772蛋白,并能够与梅毒患者血清发生特异性结合反应.ELISA测定TPPA阳性血清和阴性血清的符合率分别为93%(28/30)和96%(24/25).结论 通过DNA重组技术成功获得了重组TP0772蛋白,其与梅毒阳性血清具有良好的免疫反应性,为优化梅毒的血清学诊断方法奠定基础. 相似文献
2.
目的:在昆虫细胞表达系统中表达蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域,并探讨其表达动力学和纯化条件。方法:以PCR扩增蝙蝠SARS样冠状病毒Spike基因的受体结合域片段,产物连接到pMD-T载体,再亚克隆至供体质粒pFAST—HTB,经序列测定确认基因正确克隆,进一步将其转座入Bacmid中,在昆虫细胞S西中进行表达,采用SDS—PAGE和Westernblotting对表达产物进行分析,并通过镍离子螯合树脂纯化重组蛋白。结果:在昆虫细胞表达系统中表达出蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域片段,当感染复数(multiplicityofinfectiin,MOI)为2时,重组病毒感染细胞56h后,重组蛋白的表达量达到峰值。结论:蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域片段在昆虫细胞表达系统中得到了有效表达,并可通过镍离子螯合树脂纯化重组蛋白。 相似文献
3.
目的:构建H5N1流感病毒基质蛋白M2基因的原核表达系统,为研究其在体液免疫中的作用奠定物质基础。方法:应用PCR方法从流感病毒H5N1cDNA中扩增出M2的全基因序列,插入至表达质粒载体pGEX6P-3上,构建重组原核表达质粒pGEX-6p-3/M2。重组质粒经测序分析确认后,转化感受态大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达M2蛋白后,对其表达产物进行SDS-PAGE和Western Bloting分析。结果:PCR扩增的M2基因长度为297bp,经酶切和测序分析,插入到载体的基因与GeneBank公布的序列相似性达100%;SDS-PAGE和Westem Bloting分析显示,经IPTG诱导出分子质量为37.2 KD的目的蛋白。结论:成功构建了H5N1流感病毒基质蛋白M2原核表达载体pGEX-6p-3/M2,并在大肠杆菌中获得表达。 相似文献
4.
目的:探讨甲状腺乳头状癌的彩色超声影像学特征及其与病理学基础的相关性。方法回顾性分析我院2014年1月至2015年5月45例经手术切除或细针穿刺后病理明确诊断的甲状腺乳头状癌患者的资料,分析其超声影像学表现与病理学基础的相关性。结果45例甲状腺乳头状癌患者共50个结节超声诊断阳性率为96%(48/50),46例(92%)表现为低回声结节,26例(52%)表现为边界不清,31例(62%)表现为回声不均匀,20例(40%)表现为无晕环,13例(26%)表现为晕环不完整或不规则,36例(72%)表现为纵横比>1,26例(52%)病变内部可发现斑点状或条状钙化,30例(60%)表现为内部血流丰富或周边条状血流,3例(6%)可探及周围异常肿大淋巴结。结论超声对甲状腺乳头状癌具有一定诊断价值。 相似文献
5.
目的:应用探针扩增阻滞突变系统聚合酶链反应( ARMS-PCR)检测晚期肺癌患者血清游离DNA和肿瘤组织中表皮生长因子受体( EGFR)基因突变,探索两者间的一致性。方法同时收集53例未经治疗的肺癌Ⅲb~Ⅳ期患者的原发灶肿瘤组织和外周血,分别提取DNA,采用ARMS-PCR扩增EGFR基因的第18、19、20和21外显子突变,对结果不一致的标本用微滴式数字PCR法对外周血标本进行验证。结果血浆EGFR基因突变检测的灵敏度为51.4%(17/33),特异度为100%;血浆EGFR基因的突变率为29.4%;16例血浆和组织结果不一致的标本,数字PCR检测的结果与血浆游离DNA检测的结果一致。结论血浆游离DNA为监测Ⅲb~Ⅳ期肺癌患者原发肿瘤中EGFR基因突变提供了新的来源, ARMS法是检测血浆游离DNA中EGFR基因突变的可靠有效方法。 相似文献
6.
目的 根据医学检验技术专业实践教学特点,建立一套合理有效的形成性评价体系用于评估实践教学效果,提升教学质量与水平。方法 采用调查研究方法,对本专业实践教学中形成性评价体系所需的要素进行筛选,以构建形成性评价体系的框架及评估指标;2016级学生进行实施形成性评价前后的效果评分,结果使用SPSS 20.0进行配对t检验。结果 统计了本专业共30名教师及专家和121名学生的调查结果,针对本专业的实践特点,构建了该评价体系,包含一级指标2个、二级指标5个以及相应的三级和四级指标;经统计学分析,实施形成性评价后学生学习兴趣、实践能力、自学能力、团队协助能力和知识拓展能力提升差异均有统计学意义(P<0.01~P<0.05),学生上课积极性增加(P<0.05)。结论 证明构建的形成性评价体系符合医学检验专业实践教学特点,有助于提升实践教学效果,为其应用于本专业课程实践教学奠定了基础。 相似文献
7.
目的了解本院临床分离多重耐药肺炎克雷伯菌qnrB基因的流行现状及其耐药特点。方法收集本社区卫生服务中心患者肺炎克雷伯菌标本412株,采用K-B法进行药敏试验;采用PCR法扩增qnrB基因并将阳性产物测序分析;采用双纸片协同试验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)。结果 412株肺炎克雷伯菌中,检测出31株含qnrB基因(7.52%);412株肺炎克雷伯菌耐药率达50%以上的有9种药物,达75%以上的有6种;ESBLs的检出率为43.45%。qnrB基因在环丙沙星(CIP)敏感株与耐药株中的分布分别为0和13.2%(χ2=25.27,P<0.01);ESBLs在qnrB基因阳性株和阴性株的分布分别为83.87%(26/31)和27.56%(105/381),差异有统计学意义(P<0.01)。结论本院肺炎克雷伯菌呈现多重耐药,qnrB基因在本院有流行,且与ESBLs阳性株有一定相关性。 相似文献
8.
目的比较冠心病患者和健康人血清中胎盘生长因子(PIGF)水平,探讨其与冠心病、冠脉病变程度、心肌损伤的相关性。方法采用ELISA法测定87例冠心病患者(冠心病组)及61例健康人(对照组)血清的PIGF水平,分析血清PIGF水平与冠心病的相关性;将冠状动脉造影结果与血清PIGF水平进行比较,分析血清PIGF水平与冠心病患者冠脉病变支数及Gensini冠脉病变积分之间的相关性;以cTnI0.03ng/ml和0.1ng/ml为分界值,将冠心病组分成冠心病Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组,比较各组之间血清PIGF水平。结果冠心病组血清PIGF水平为(11.55±3.10)ng/ml,高于对照组的(5.81±2.21)ng/ml,差异有统计学意义(P〈0.05)。血清PIGF水平与冠脉病变支数和Gensini冠脉病变积分均无相关性(P〉0.05)。冠心病Ⅱ组和冠心病Ⅲ组血清PIGF水平分别为(13.12±2.45)、(14.62±3.25)ng/ml,与冠心病Ⅰ组的(9.10±2.31)ng/ml比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论血清PIGF水平与冠心病、心肌受损之间存在相关性,PIGF水平与冠脉梗塞的严重程度的相关性需进一步研究。 相似文献
9.
目的 利用基因工程技术重组表达梅毒螺旋体Gpd蛋白,探讨其在梅毒血清学诊断中的应用.方法 PCR扩增Gpd基因序列,构建表达载体pET-28b-Gpd,将表达载体转化感受态细胞E.coli BL21(DE3)并以IPTG诱导蛋白表达,经镍柱亲和层析纯化后,利用质谱和免疫印迹法鉴定重组蛋白.以重组蛋白建立间接ELISA法,并检测20份TPPA阳性和20份TPPA阴性血清去评价其在梅毒血清学诊断中的应用.结果 PCR扩增出约1.1 kb的Gpd片段,成功构建重组质粒pET-28b-Gpd.表达的重组蛋白的相对分子质量约41×103,主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的40%.质谱和免疫印迹分析证实重组蛋白为Gpd蛋白,并能够与梅毒患者血清发生免疫学反应.间接ELISA法测定TPPA阳性血清和TPPA阴性血清的符合率分别为95%(19/20)和100%(20/20).结论 重组Gpd蛋白能够与梅毒患者血清发生特异性的免疫学反应,是一种可潜在应用于梅毒血清学诊断的新抗原. 相似文献
10.
目的探讨定量检测抗环瓜氨酸肽抗体(anti-CCP)对类风湿性关节炎(RA)诊疗的应用价值。方法分别检测41例RA患者及85例非RA患者的anti-CCP及类风湿因子(RF)含量,其中anti-CCP采用微粒子酶免分析法(MEIA)检测,RF采用免疫散射比浊法检测。结果 anti-CCP诊断RA的特异度和敏感度分别为94.1%、65.9%,RF诊断RA的特异度和敏感度分别为82.3%、85.4%。二者在特异度和敏感度方面差异均有统计学意义(χ2值分别为5.67、4.23,P<0.05)。结论 anti-CCP相对于RF指标敏感度稍低而特异度较高,建议联合检测anti-CCP和RF,提高诊断RA的敏感性和特异性。 相似文献