组蛋白去甲基化酶含十字形结构域蛋白-3和核因子-κB高表达与肝细胞癌不良进展和预后的关系

目的观察肝细胞癌中组蛋白去甲基化酶含十字形结构域蛋白-3(JMJD3)和核因子-κB(NF-κB)蛋白水平的表达,探讨两者的相关性及其蛋白表达水平与多个临床病理因素的关系。方法采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测25例新鲜肝细胞癌组织及相对应的癌旁组织中JMJD3和NF-κB信使RNA(mRNA)表达,采用免疫组织化学法检测102例肝细胞癌及相对应的癌旁组织中JMJD3和NF-κB蛋白的表达,分析其与肝细胞癌临床病理特征的关系及上述蛋白的相关性,采用生存分析法(Kaplan-Meier)法来评估JMJD3和NF-κB蛋白的异常表达与肝细胞癌患者生存期之间的关系,Cox回归模型分析JMJD3和NF-κB蛋白的表达和临床病理参数与肝细胞癌预后的关系。结果JMJD3和NF-κB mRNA在肝细胞癌组织中的表达水平均高于癌旁组织(t=-15.130、-15.030,P<0.05),差异有统计学意义,肝细胞癌组织中JMJD3阳性率[87.25%(89/102)]显著高于相应癌旁组织[57.84%(59/102),χ²=22.153,P<0.05],差异有统计学意义,肝细胞癌组织中NF-κB阳性率[83.33%(85/102)]显著高于相应癌旁组织[29.41%(30/102),χ²=55.664,P<0.05],差异有统计学意义。JMJD3和NF-κB表达与甲胎蛋白水平、分化程度、有无脉管癌栓、淋巴结转移及TNM分期明显相关(P<0.05),NF-κB与结节数目明显相关(χ²=5.133,P<0.05),差异有统计学意义。JMJD3蛋白高表达者的生存期高于低表达者(χ²=40.568,P<0.05),差异有统计学意义,NF-κB蛋白高表达者的生存期低于低表达者(χ²=48.803,P<0.05),差异有统计学意义。Spearman相关分析结果显示JMJD3与NF-κB呈正相关(r=0.627,P<0.05)。结论JMJD3和NF-κB在肝细胞癌中的异常表达与肿瘤的浸润、转移及无病生存期明显相关。     

慢病毒载体介导的RNAi技术构建稳定抑制β-catenin的人鼻咽癌细胞株

目的建立稳定抑制β-catenin基因表达的人鼻咽癌6-10B细胞株,为探讨Wnt/β-catenin信号在鼻咽癌发生中的作用提供细胞模型。方法于β-catenin CTNNB1基因编码区选择3个siRNA靶点合成3对shRNA干扰序列,分别与pLKO.1载体连接,构建pLKO.1-sh-β-catenin质粒(干扰组1)、pLVTHM-sh-β-catenin(干扰组2)和pLKO.1-sh-β-catenin-Neg质粒(阴性对照组);将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,收集含慢病毒颗粒的上清液感染人鼻咽癌6-10B细胞,感染pLKO.1-sh-β-catenin和pLKO.1-sh-β-catenin-Neg质粒的细胞经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定克隆株。Western blot检测干扰组β-catenin抑制效率及下游基因c-myc蛋白的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测比较细胞增殖状况,Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移率。结果 Western blot检测结果显示pLKO.1-sh-β-catenin(干扰组1)干扰效率最佳,β-catenin及c-myc蛋白表达减少;MTT检测显示干扰β-catenin后细胞吸光度下降,细胞增殖受到抑制;穿过Transwell小室底膜的细胞数:干扰组1为(23.5±4.6)个,明显低于阴性对照组(50.3±5.3,P<0.01)及空白对照组(54.3±5.6,P<0.01)。结论成功构建了β-catenin shRNA慢病毒表达载体,建立了稳定抑制β-catenin基因表达的人鼻咽癌6-10B细胞株,为进一步研究以β-catenin为靶点的鼻咽癌基因治疗奠定基础。     

肺癌与2型糖尿病的相关性研究

目的探讨肺癌与糖尿病的相关性。方法对2002年1月至2007年12月在本院住院的41例肺癌合并2型糖尿病患者的临床资料进行回顾性分析。结果肺癌患者合并2型糖尿病的比例明显高于非肿瘤患者。化疗前确诊的糖尿病患者化疗期间血糖有不同程度的升高,化疗后继发的糖尿病患者化疗结束后有所缓解。结论肺癌与2型糖尿病有明显相关性。     

不同分子亚型的晚期乳腺癌化疗疗效观察

目的：观察不同分子亚型的晚期乳腺癌对多西紫杉醇联合顺铂化疗方案的反应性、疾病进展时间（TTP）及生存时间,进一步评估不同分子亚型乳腺癌的临床特征及预后。方法：利用免疫组化方法将2000年元月至2006年10月收治的62例晚期乳腺癌分为3种分子亚型,62例多西紫杉醇联合顺铂方案化疗,回顾性分析3种亚型乳腺癌的化疗反应性、疾病进展时间及生存期。结果：62例患者中,Basal—like亚型为14例（22．6％）,HER2＋／ER一亚型（16．1％）,Luminal亚型38例（61．3％）。Basal—like亚型有效率为64．3％,HER2＋／ER一亚型为60．0％,Luminal亚型为47．4％（P=0．551）,3者之间无显著性差异。Basal—like亚型,ITI’P为3．2个月,HER2＋／ER一亚型为5．3个月,Luminal亚型为10．1个（P=0．005）,Basal—like亚型生存时间为7．0个月,HER2-4-／ER-亚型为11．3个月,Luminal亚型为19．8个（P=0．004）,3者在TTP及生存时问存在显著性差异。结论：不同分子亚型的晚期乳腺癌对多西紫杉醇联合顺铂化疗方案的反应性相似,但Basal-like亚型和HER2＋／ER-亚型具有较短的疾病进展时间和生存期,Basal-like亚型的预后最差。原因可能主要与它的生物学特征更具侵袭性有关。     

α-常春藤皂苷对黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的:探讨α-常春藤皂苷(α-HN)对黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法:常规培养B16细胞至对数生长期,给予不同浓度α-HN(50,100,200μmol·L~(-1))处理,设未经α-HN处理的B16细胞为空白组;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测α-HN处理24,48,72 h后各组细胞的增殖情况,采用膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)凋亡试剂盒检测α-HN处理48 h后的细胞凋亡率,半胱天冬蛋白酶(Caspase)活性检测试剂盒检测Caspase-3和Caspase-9的活性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达情况。结果:与空白组相比,经50,100,200μmol·L~(-1)α-HN处理24,48,72 h后,B16细胞增殖抑制率显著增加(P0.01),且随着观察时间的延长,增殖抑制率有逐渐增加趋势,该抑制作用呈时间依赖性和浓度依赖性;与空白组相比,α-HN处理48 h后B16细胞的凋亡率升高,Caspase-3和Caspase-9活性增强,且Bcl-2水平降低而Bax水平升高(P0.01);α-HN处理48 h后的p-PI3K,p-Akt,p-mTOR蛋白表达较空白组降低(P0.05,P0.01)。结论:α-HN具有抑制B16细胞增殖及诱导凋亡作用,其可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路来发挥细胞毒及诱导凋亡作用,在黑色素瘤治疗中有较好的应用前景。     

雷公藤甲素通过PTEN表达调控Wnt/β-catenin通路抑制黑色素瘤的机制研究

目的:探讨雷公藤甲素的抗黑色素瘤作用是否与PTEN表达及Wnt/β-catenin通路相关。方法:实验分为5组:空白对照组、雷公藤甲素(20 nmol/L)组、β-catenin抑制剂(5μmol/L IWR-1-endo)组、雷公藤甲素+β-catenin抑制剂组、ATRA(100μmol/L)组。分别采用CCK8法、Annexin V-FITC/PI双染色法、实时定量PCR法和Western blot法检测各组A375细胞活力、凋亡率及PTEN、β-catenin、Bcl-2、Caspase-3、PCNA mRNA及蛋白的表达。结果:雷公藤甲素、β-catenin抑制剂和ARTA处理能抑制A375细胞的增殖并诱导其凋亡,在增强Caspase-3和PTEN表达的同时抑制β-catenin、Bcl-2、PCNA的表达。结论:雷公藤甲素能抑制黑色素瘤细胞A375的增殖并诱导其凋亡,该作用可能是通过增加PTEN的表达进而抑制Wnt/β-catenin通路的激活来实现。     

肝动脉栓塞化学治疗84例中晚期原发性肝癌患者的疗效

目的:评价肝动脉栓塞化学治疗中晚期原发性肝癌的疗效和毒副反应.方法:对84例中晚期原发性肝癌患者采用肝动脉栓塞化疗,化疗2次以上评价疗效.结果:完全缓解(CR)0例,部分缓解(PR)14例,稳定(NC)40例,进展(PD)30例,总有效率为16.7%(14/84),临床获益率为66.7%(54/84).全组患者3个月、半年、1年、2年、3年、4年、7年生存率分别为100%(84/84)、64.2%(54/84)、20.23%(17/84)、13.1%(11/84)、8.33%(7/84)、5.95%(5/84)、1.19%(1/84),其中1例生存7年者是巨块型肝右叶癌患者,为栓塞化疗5次联合瘤体内无水乙醇注射3次.主要毒副反应为发热、骨髓抑制及消化道反应.结论:肝动脉栓塞化疗是中晚期肝癌的有效治疗手段,联合经皮肝癌瘤体内无水乙醇注射法可提高疗效.     

结直肠癌术后患者应用奥沙利铂联合卡培他滨方案化疗对外周血淋巴细胞亚群的影响

目的观察ⅡB期~ⅢC期结直肠癌术后患者应用奥沙利铂联合卡培他滨方案化疗前后外周血淋巴细胞亚群水平变化,探讨奥沙利铂联合卡培他滨方案化疗对外周血淋巴细胞亚群的影响。方法ⅡB~ⅢC期结直肠癌术后患者62例为结直肠癌组,体检健康者84例为对照组。结直肠癌患者术后给予奥沙利铂130mg/m2,静脉滴注,2h滴注完毕,第1天;卡培他滨1000mg/m2,口服,2次/d,第1~14天;21d为1个周期,至发生严重不良发应或疾病进展停药。结直肠癌组于第1、3、5个周期化疗前1d,对照组于体检日采集外周血标本,应用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞亚群百分比。比较结直肠癌组与对照组第1个周期化疗前1d淋巴细胞亚群百分比,结直肠癌患者第1、3、5个周期化疗前1d淋巴细胞亚群百分比。结果结直肠癌组第1个周期化疗前1dCD3⁺CD4⁺T淋巴细胞百分比[(41.12±8.07)%]、CD3⁺CD4⁺/CD3⁺CD8⁺T淋巴细胞比值[(1.57±0.61)%]、CD19⁺B淋巴细胞百分比[(9.10±3.32)%]、CD3^-CD16⁺/56⁺自然杀伤(natural killer,NK)细胞百分比[(17.56±9.28)%]均低于对照组[(44.96±6.34)%、(1.97±0.64)%、(13.93±5.16)%、(20.70±7.55)%](P<0.05),CD3⁺CD8⁺T淋巴细胞百分比[(26.58±8.29)%]高于对照组[(21.94±7.88)%](P<0.05),CD3⁺T淋巴细胞百分比[(71.79±9.17)%]与对照组[(70.90±8.37)%]比较差异无统计学意义(P>0.05)。结直肠癌术后患者第3、5个周期化疗前1dCD3⁺CD4⁺T淋巴细胞百分比[(42.31±8.13)%、(43.31±8.13)%]、CD3⁺CD4⁺/CD3⁺CD8⁺T淋巴细胞比值[(1.67±0.69)、(1.76±0.64)]高于第1个周期化疗前1d(P<0.05),CD19⁺B淋巴细胞百分比[(8.36±3.58)%、(8.18±2.29)%]低于第1个周期化疗前1d(P<0.05),CD3⁺T淋巴细胞百分比[(71.86±10.71)%、(72.56±11.45)%]、CD3⁺CD8⁺T淋巴细胞百分比[(28.22±11.82)%、(27.46±10.57)%]、CD3^-CD16⁺/56⁺NK细胞百分比[(19.05±10.13)%、(18.63±11.66)%]与第1个周期化疗前1d比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论结直肠癌术后患者免疫功能降低,应用奥沙利铂联合卡培他滨方案辅助化疗可增强CD3⁺CD4⁺T淋巴细胞参与的细胞免疫功能,抑制CD19⁺B淋巴细胞相关的体液免疫,对CD3^-CD16⁺/56⁺NK细胞参与的固有免疫无影响。     

白屈菜红碱对黑色素瘤B16细胞增殖抑制和凋亡诱导作用的实验研究

目的探讨白屈菜红碱对黑色素瘤B16细胞增殖抑制和凋亡诱导作用的影响。方法高(8μg/ml)、中(4μg/ml)、低(2μg/ml)浓度的白屈菜红碱处理对数生长期的B16细胞,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)、Annexin V-FITC/PI双染联合流式细胞术、实时定量聚合酶链式反应(real-time q PCR)及免疫印迹(western blot)法检测细胞增殖抑制率、凋亡率、凋亡相关基因及β-catenin、原癌基因(C-myc)、细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达水平。结果白屈菜红碱能有效抑制B16细胞的增殖,且能提高B16细胞的早期凋亡率及晚期凋亡率,与空白组比较,差异具有统计学意义(P0.05);与空白组比较,白屈菜红碱可显著升高半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和Bax的基因表达水平,降低Bcl-2基因表达水平及β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白表达水平(P0.05)。结论白屈菜红碱具有抑制B16细胞增殖及诱导凋亡作用,该作用与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。