尿激酶受体反义RNA表达质粒的构建

目的 构建能在哺乳动物细胞中表达尿激酶受体（ｕＰＡＲ）反义ＲＮＡ的表达质粒ｐＵＲＡＳ。方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增并克隆尿激酶受体（ｕＰＡＲ）ｃＤＮＡ５’端－４６￣４５４ｂｐ一段为５００ｂｐ的顺序，利用ＤＮＡ重组技术将该片段反向插入表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游。结果 限制性内切酶分析和ＤＮＡ顺序分析证实ＲＴ－ＰＣＲ获得ｕＰＡＲ ｃＤＮＡ片段与文献报道相吻合；重组质粒ｐＵＲＡＳ转染肺癌细     

尿激酶型纤溶系统在乳腺癌细胞侵袭中的作用

目的 研究尿激酶型纤溶系统组分ｕＰＡ、ｕＰＡ、ｔＰＡ及ＰＡＩ－１在人乳腺癌细胞侵袭中的作用。方法 以３株具有不同侵袭转移能力的乳腺癌细胞株作为研究对象,应用ＲＴ－ＰＣＲ方法比较纤溶组分在此３株细胞中的表达,牛奶板法检测细胞培养上清中的纤溶活性,用Ｂｏｙｄｅｎ小室模型测定细胞侵袭能力。结果 发现ＭＤＡＭＢ－２３１细胞表达较高水平的ｕＰＡ、ｕＰＡＲ、ＰＡＩ－１和中等水平的ｔＰＡ,无血清培养上清中总纤溶     

尿激酶受体反义核糖核酸抑制肺癌细胞的侵袭转移

目的用反义核糖核酸(RNA)封闭尿激酶受体的表达,抑制人肺癌细胞株95D的侵袭转移能力,验证反义RNA技术在抗肿瘤中的作用.方法将尿激酶受体(uPAR)反义核糖核酸表达质粒转染具有高度侵袭转移能力的人肺癌细胞株95D,利用改良Bovden小室分析转染细胞的体外侵袭能力,并将转染细胞接种裸小鼠以观察其体内转移能力.结果G418筛选后,鉴定出2个表达uPAR反义RNA细胞克隆,uPAR蛋白质水平相应降低.表达uPAR反义RNA的细胞克隆的体外侵袭能力及在裸小鼠体内的肺转移能力较亲本细胞和空载体对照细胞均有显著性降低(P＜0.05).结论抑制尿激酶受体的表达,能够有效抑制肺癌的侵袭转移,反义RNA技术在抗肿瘤治疗中有良好的应用前景.     

尿激酶受体反义RNA表达质粒的构建

构建能在哺乳动物细胞中表达尿激酶受体（ｕＰＡＲ）反义ＲＮＡ的表达质粒ｐＵＲＡＳ。方法采用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增并克隆尿激酶受体（ｕＰＡＲ）ｃＤＮＡ５’端－４６～４５４ｂｐ一段长５００ｂｐ的顺序，利用ＤＮＡ重组技术将该片段反向插入表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游。结果限制性内切酶分析和ＤＮＡ顺序分析证实ＲＴ－ＰＣＲ获得的ｕＰＡＲｃＤＮＡ片段与文献报道相吻合；重组质粒ｐＵＲＡＳ转染肺癌细胞株９５Ｄ，ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ证实转染细胞克隆有ｕＰＡＲ反义ＲＮＡ的表达。结论重组质粒ｐＵＲＡＳ能在肺癌细胞株９５Ｄ中表达尿激酶受体反义ＲＮＡ，尿激酶受体（ｕＰＡＲ）反义ＲＮＡ表达质粒的构建获得成功。     

放线菌酮抑制转化生长因子-β_1诱导的小鼠肝细胞的凋亡(英文)

目的:研究TGF-β_1诱导细胞凋亡的机制。方法:采用DNA片段化和荧光染色方法对TGF-β_1诱导的细胞凋亡进行定性观察,结晶紫染色方法定量检测TGFβ_1的细胞存活率,免疫印迹方法检测Tak1、p53和Bax的蛋白水平,用荧光素酶报告基因的方法测定TGF-β_1诱导的基因表达,采用薄层层析方法检测脂类信号分子神经酰胺的水平。结果:IGF-β_1诱导AML12小鼠肝细胞出现典型的细胞凋亡变化,包括DNA片段化,细胞核的固缩、碎裂。放线菌酮下调了Tak1的水平以及TGF-β_1诱导的PAI-1表达。TGF-β_1能够诱导p53表达,但不诱导Bax表达。TGF-β_1诱导的细胞凋亡过程中未见神经酰胶水平的升高。结论:TGF-β_1诱导的细胞凋亡需要TGF-β_1诱导的基因表达。     

尿激酶型纤溶系统在乳腺癌细胞侵袭中的作用

目的研究尿激酶型纤溶系统组分uPA、uPAR、tPA及PAI-1在人乳腺癌细胞侵袭中的作用。方法以3株具有不同侵袭转移能力的乳腺癌细胞株作为研究对象,应用RT?PCR方法比较纤溶组分在此3株细胞中的表达,牛奶板法检测细胞培养上清中的纤溶活性,用Boyden小室模型测定细胞侵袭能力。结果发现MDA-MB-231细胞表达较高水平的uPA、uPAR、PAI-1和中等水平的tPA,无血清培养上清中总纤溶活性和uPA纤溶活性最高;MDA-MB-435细胞表达较低水平的uPA和较高水平的tPA,但未测出uPAR和PAI-1的表达,无血清培养上清中总纤溶活性较高,主要是tPA活性;MCF-7细胞表达较低水平的uPAR和较高水平的PAI-1,但未测出uPA和tPA的表达,无血清培养上清中几乎没有纤溶活性。与纤溶活性相一致的是,Boyden小室模型实验结果发现MDA-MB-231在3株细胞中体外侵袭能力最强,MDA-MB-435次之,MCF-7则几乎无体外侵袭能力。经抗uPA和抗uPAR抗体预处理MDA-MB-231细胞,分别使侵袭能力下降83.1%和43.9%(P<0.05)。结论uPA和uPAR的活性与乳腺癌细胞的侵袭转移能力密切相关     

尿激酶型纤溶酶原激活剂及其受体在肺癌组织中的表达

目的 检测尿激酶型纤溶酶原激活剂（ｕＰＡ）及其受体（ｕＰＡＲ）在肺癌组织中的表达，并比较两者在侵袭转移性和非侵袭转移性肺癌组织中表达的差异。方法 采用ＡＢＣ法检测ｕＰＡ和ｕＰＡＲ在３９例肺癌组织中的表达，用Ｍｃ－Ｃａｒｔｈｙ方法进行半定量分析。结果 ｕＰＡ和ｕＰＡＲ主要在肺癌组织中表达，且ｕＰＡｔｕＰＡＲ在侵袭转移性肺癌组织中的表达显著高于非侵袭转移性肺癌组织（Ｐ〈０．０５）。结论 ｕＰＡ和ｕＰＡ     

尿激酶型纤溶酶原激活剂及其受体在肺癌组织中的表达

目的　检测尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)及其受体(uPAR)在肺癌组织中的表达,并比较两者在侵袭转移性和非侵袭转移性肺癌组织中表达的差异。方法　采用ABC法检测uPA和uPAR在39例肺癌组织中的表达,用McCarthy方法进行半定量分析。结果　uPA和uPAR主要在肺癌组织中表达,且uPA和uPAR在侵袭转移性肺癌组织中的表达显著高于非侵袭转移性肺癌组织(P<0.05)。结论　uPA和uPAR的表达可能与肿瘤侵袭转移特性有关