脂肪组织中血管基质部分(SVF)的细胞成分及应用

目前．脂肪组织因其在能量调控、炎症反应和免疫应答方面的作用已被认为是一个内分泌器官。此外,它还是具有多向分化潜能的多功能细胞的来源之一,而这种多功能细胞就存在于脂肪组织的血管基质部分中。脂肪组织中的血管基质部分（SVF）是脂肪组织经胶原酶消化、过滤、离心除去成熟脂肪细胞后得到的。正因为SVF易于从脂肪组织中提取并含有丰富的、可塑性极强的脂肪组织来源的间充质干细胞（Adipose tissue—derived mesenchymal stem cells、ASC）。这使得揭示SVF的细胞成分（以下简称为SVFc）及阐明其相应的生物学功能显得意义深远。     

黏着斑微操控在创伤和组织修复中的作用

目的 探讨真皮模板单元-黏着斑微操控制对皮肤成纤维细胞生物学行为影响. 方法 采用微图案方法制作微凸阵列,运用分子自组装在微凸上自组装结构蛋白分子,在自制细胞培养仪模拟皮肤生物力学进行细胞牵拉2周,并行形态学观察和细胞免疫组织化学分析. 结果 细胞牵拉2周后,细胞形态多样、丰满,分泌增加,呈现顺应性.细胞免疫组织化学分析发现,整合素β1、α5表达较对照显著减少,张力蛋白tensin表达显著降低. 结论 通过黏着斑微操控,增生性瘢痕成纤维细胞在形态学及生物学行为上发生改变.     

皮下脂肪组织创伤后脂肪细胞的变化

目的观察脂肪组织创伤愈合的情况,探讨成熟脂肪细胞的变化。方法以杜洛克母猪为实验动物,用滚轴取皮刀在其背部制作脂肪组织切割伤皮瓣,大体观察伤后1、2、4及12周的愈合情况。并于伤后3、7、14及21 d在皮瓣中央处取材,观察切缘及周围成熟脂肪细胞的形态学改变,用酶联免疫吸附法和免疫组织化学方法检测脂肪组织中瘦素和脂联素的表达情况。结果脂肪组织切割伤组皮瓣中央与未创伤处皮肤无异,但皮瓣边缘早期有明显炎症反应,后期则呈典型的疤痕生长。组织学观察发现:脂肪组织创伤后,仍以纤维化愈合为主,但愈合过程中,炎症反应的局灶性及小脂肪细胞出现呈现一定的规律性;与未创伤组相比,脂肪组织创伤后其瘦素及脂联素的表达量均呈下降趋势,但两者的比值在愈合的过程中存在差异。结论脂肪组织创伤后,脂肪细胞表面瘦素及脂联素的表达量下降。早期创缘附近出现大量的小脂肪细胞,可能与脂肪分解有关。     

脂肪组织成分对纤维化愈合的影响

目的 探讨脂肪组织成分对纤维化愈合的影响及其可能机制。方法 通过在同一动物个体中分别制作真皮和脂肪组织切割伤创伤模型,组织学检查明确脂肪组织纤维化愈合特征。经体外实验从脂肪组织中分离成熟脂肪细胞和血管基质,观察两种成分对真皮成纤维细胞增殖和分泌胶原能力的影响。结果 与真皮组织比较,脂肪组织纤维化愈合程度轻。成熟脂肪细胞对真皮成纤维细胞具有促进凋亡或坏死的作用,而脂肪组织中血管基质成分对真皮成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原功能具有促进作用。结论 脂肪组织中的成熟脂肪细胞及血管基质成分可对成纤维细胞增殖和分泌胶原等功能产生影响,这可能是创伤后脂肪组织纤维化愈合特征的细胞学机制之一。     

真皮及脂肪组织创伤后愈合差异性观察

目的 观察真皮和脂肪组织创伤愈合的差异性,探讨脂肪组织创伤在瘢痕形成中的作用.方法 以杜洛克母猪为实验动物,用滚轴取皮刀在同一个体背部制作真皮及脂肪组织切割(n=6)或缺损(n=1)创面,采用自身配对观察比较创伤后1、2、4及12周的大体愈合情况.对于真皮及脂肪组织切割伤创面,于创伤后1、2、3周在创面中央取材,观察创伤处组织学改变,免疫组化法观察创面修复细胞表面分子Ⅰ型胶原α2、瘦素及α平滑肌肌动蛋白的表达.结果 从创面中央看,瘢痕只出现在真皮组织切割伤和真皮组织缺损模型.真皮及脂肪组织切割伤同体配对比较结果显示,前者切缘处新生胶原沉积量要多于后者,且胶原类型存在差异;但两者创伤处修复细胞均以成纤维样细胞为主,细胞表面分子Ⅰ型胶原α2、瘦素及α平滑肌肌动蛋白呈阳性表达.结论 真皮组织损伤或缺失是形成瘢痕的主要因素,而脂肪组织损伤或缺失与瘢痕的形成并无直接相关性.与真皮组织切割伤相比,脂肪组织切割伤的创伤处纤维化的程度较轻.     

糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面新生血管形成障碍的研究

目的 了解有糖尿病基础的机体烫伤后,创面新生血管化程度与创面难以愈合的关系. 方法 将SD大鼠分成对照组和以链脲佐菌素诱导的糖尿病组,每组50只.2组大鼠均造成20%TBSA的深Ⅱ度烫伤,于伤后即刻及1、3、7、14和21 d取创面组织,行组织学观察评分,并计算创面愈合率;同时采用免疫荧光双标记法检测创面组织的新生血管化程度及血管内皮细胞数量. 结果 糖尿病组大鼠创面组织评分及创面愈合率均低于对照组;糖尿病组大鼠各时相点新生血管化程度较对照组明显降低(伤后7 d,糖尿病组为12.00±1.40、对照组为60.00±3.00,P＜0.01).2组大鼠各时相点创面血管内皮细胞数量差异不明显,但糖尿病组大部分血管内皮细胞未形成功能性微血管. 结论糖尿病深Ⅱ度烫伤难愈创面虽血管内皮细胞增殖活跃但仍血供不良,其机制与功能性微血管形成障碍有关.     

真皮与脂肪组织来源成纤维细胞致纤维化能力的比较研究

目的初步探讨真皮与脂肪组织来源的成纤维细胞的致纤维化能力及其作用机制。方法自同一杜洛克雌性猪真皮和皮下脂肪组织中分别分离和培养成纤维细胞,利用倒置显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态和超微结构,采用Real-TimePCR技术检测细胞Ⅰ型和Ⅲ型前胶原、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β1（TGF-β1）和类胰岛素样生长因子1（IGF-1）mRNA的相对表达量。结果与脂肪来源的成纤维细胞比较,真皮组织来源的成纤维细胞胞体较大,粗面内质网扩张明显。Real-Time PCR检测结果显示：真皮组织来源的成纤维细胞中Ⅰ型前胶原和α-SMA的mRNA相对表达量均显著高于脂肪来源的成纤维细胞（P〈0.05）,而Ⅲ型前胶原和IGF-1的mRNA相对表达量显著低于脂肪来源的成纤维细胞（P〈0.05）;两种不同组织来源成纤维细胞中TGF-β1 mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论真皮与脂肪组织来源的成纤维细胞在与致纤维化相关的细胞形态和功能方面均存在差异。在真皮和脂肪组织受到创伤后的纤维化进程中,两种组织来源的成纤维细胞致纤维化的起点已存在差异。     

口服联合外涂普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤的有效性与安全性评价

目的 评价口服联合外涂普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤的临床疗效.方法 回顾性分析南京军区福州总医院普通外科201 1年6月-2013年12月收治的61例婴幼儿血管瘤患者的临床资料,给予口服联合外涂普萘洛尔治疗,观察其瘤体大小、颜色、质地变化,检测瘤体血流阻力、血流峰值变化,检测血药浓度及不良反应.结果 59例获长期随访,按Achauer分级标准评定疗效:有效率为96.61％(57/59),随着用药时间延长,血管瘤瘤体静脉阻力系数增大,血流峰值减小(P＜0.05),用药1、3、5、7个月的血药浓度分别(166.94 ±40.75) ng/mL、(164.74±42.31) ng/mL、(152.38 ±47.49) ng/mL、(174.51±56.67) ng/mL,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 口服联合外涂普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤具有疗效显著、不良反应小的优势.     

糖尿病大鼠深二度烫伤创面血管化现象

目的建立糖尿病大鼠深二度烫伤模型,研究创面愈合过程中血管化现象及其与创面愈合的关系。方法60只清洁级SD大鼠,随即分为正常组(对照组,n=30)和以链脲霉素(STZ)诱导的速发型糖尿病组(糖尿病组,n=30)。制备占总体表面积(TBSA)20%的深二度烫伤模型,分别取伤后1、3、7、10、14、21 d创面皮肤组织样本,行组织学观察并计算创面愈合率;荧光显微镜下观察创面组织的血管化;免疫组化法检测创面组织中CD31抗原表达,以了解微血管内皮细胞的改变。结果伤后14 d,糖尿病组大鼠创面愈合较对照组显著延迟,为(31.5±1.0)%vs(59.4±4.2)%(P<0.01)。伤后1、3、7、14、21 d,糖尿病组新生血管化荧光密度值分别为1±0.1、7±0.8、12±1.4、15±2.1和17±1.8,对照组分别为8.5±0.5、35±1.5、60±3.0、72±3.4和72±3.4。各时间点糖尿病组创面血管化均较对照组显著降低(P<0.01)。各时间点两组创面组织中CD31抗原表达无显著差异(P>0.05),但糖尿病组大鼠仅少量血管内皮细胞周边有代表血管化的蓝色荧光微球。结论糖尿病深二度烫伤难愈创面存在血供不良特征,表现为血管内皮细胞增殖活跃与血管化低下的分离现象,其本质是新生血管形成障碍。     

真皮及脂肪组织创伤后愈合差异性观察

目的观察真皮和脂肪组织创伤愈合的差异性,探讨脂肪组织创伤在瘢痕形成中的作用。方法以杜洛克母猪为实验动物,用滚轴取皮刀在同一个体背部制作真皮及脂肪组织切割（n=6）或缺损（n=1）创面,采用自身配对观察比较创伤后1、2、4及12周的大体愈合情况。对于真皮及脂肪组织切割伤创面,于创伤后1、2、3周在创面中央取材,观察创伤处组织学改变,免疫组化法观察创面修复细胞表面分子I型胶原α2、瘦素及α平滑肌肌动蛋白的表达。结果从创面中央看,瘢痕只出现在真皮组织切割伤和真皮组织缺损模型。真皮及脂肪组织切割伤同体配对比较结果显示,前者切缘处新生胶原沉积量要多于后者,且胶原类型存在差异;但两者创伤处修复细胞均以成纤维样细胞为主,细胞表面分子I型胶原α2、瘦素及α平滑肌肌动蛋白呈阳性表达。结论真皮组织损伤或缺失是形成瘢痕的主要因素,而脂肪组织损伤或缺失与瘢痕的形成并无直接相关性。与真皮组织切割伤相比,脂肪组织切割伤的创伤处纤维化的程度较轻。