阻断MAPK通路对前列腺癌细胞增殖的影响

目的：研究前列腺癌进展中细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的变化，探讨阻断此通路对前列腺癌细胞增殖的影响。方法：用MTT法检测表皮生长因子（EGF）、PD98059对前列腺癌细胞系LNCaP、PC 3和DU145增殖的影响；用Western blot法检测细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）表达和磷酸化ERK1/2水平的差异，以及EGF、PD98059对细胞ERK1/2磷酸化水平的影响。结果：EGF促进LNCaP、PC 3和 DU145的增殖，PD98059抑制细胞增殖；Western blot结果显示，3株前列腺癌细胞的总ERK1/2无明显差异。在血清饥饿的状态下，LNCaP细胞无ERK1/2的活化,而PC 3和 DU145细胞ERK1/2处于持续活化的状态。PD98059能够阻断EGF对3株前列腺癌细胞ERK1/2的激活。结论：MAPK通路的持续活化在前列腺癌的恶性进展中起重要作用，阻断此通路可以抑制前列腺癌细胞的增殖。     

核转录因子-κB通路在CD40-CD154诱导血管内皮细胞活化中的作用

目的 探讨血管内皮细胞(VEC)内核转录因子-κB(NF-κB)通路在CD40-CD154相互作用诱导VEC活化中的作用.方法 应用重组人肿瘤坏死因子α(rhTNF-α)和重组人γ干扰素(rhIFN-γ)刺激人主动脉VEC,通过流式细胞仪(FACS)检测CD40和粘附因子表达水平;通过表达CD154的细胞株D1.1和VEC共同培养后,观察VEC粘附因子的表达水平;通过抗CD154单克隆抗体阻断CD40-CD154间的反应;应用NF-κB阻断剂BAY11-7082观察阻断NF-κB通路后对CD40-CD154诱导VEC活化的影响.结果 未活化的VEC膜表达低水平的CD40、CD54和CD106,但不表达CD62E,经白细胞介素刺激后可上调这些蛋白分子的表达水平.D1.1细胞株和VEC共同培养后可诱导VEC活化并上调CD62E、CD54和CD106的表达水平;抗CD154抗体可阻断CD40-CD154间的反应所诱导的VEC活化;NF-κB阻断剂可阻断rhTNF-α诱导的VEC活化以及CD40-CD154间的反应所诱导的VEC活化.结论 VEC中CD40和T淋巴细胞中CD154之间的相互作用在诱导VEC活化过程中起重要作用;CD40-CD154相互作用并通过NF-κB通路诱导VEC活化;NF-κB通路阻断剂可抑制VEC活化.     

单核细胞诱导同种异体血管内皮细胞产生干扰素诱导T细胞α型趋化因子的作用机制

目的研究外周血单核细胞与同种异体血管内皮细胞（VEC）反应产生干扰素诱导蛋白10（IP—10）和干扰素诱导的T细胞α型趋化因子（I-TAC）生成的机制。方法单独培养的VEC培养液中加入外源性TNF,用Multiplex技术检测上清液中IP-10、I-TAC浓度的变化;外周血单核细胞与同种异体VEC单独培养或共培养,检测上清液中趋化因子以及TNF浓度的变化;单核细胞和VEC共培养液中加入抗TNF抗体或核因子（NF）-kB通路阻断剂BAYll．7082干预免疫反应,观察对趋化因子生成的影响。应用实时PCR技术检测单核细胞与VEC共培养前后细胞内TNF、IP-10、I-TAC基因表达的变化。结果外源性TNF可刺激VEC产生IP-10、I-TAC;单核细胞、VEC单独培养只产生微量的IP-10、I-TAC,共培养24、48、72h后上清液中TNF以及IP-10、I-TAC浓度逐渐升高,细胞内TNF、IP-10、I-TACmRNA表达水平也显著增加;加入抗TNF抗体或BAY11-7082能消除单核细胞和VEC共培养导致的趋化因子生成。结论在同种异体单核细胞与VEC免疫反应中,单核细胞活化后产生TNF,再通过NF—KB信号通路刺激VEC产生IP-10、I-TAC等趋化因子,应用TNF抗体以及NF—KB信号通路阻断剂能减少IP-10、I-TAC等趋化因子的生成。     

局部外膜缓释西罗莫司对内瘘血管内膜增生的影响

目的 建立兔颈总动脉-颈内静脉内瘘模型;探讨血管外膜涂层缓释西罗莫司对内膜增生的影响。 方法 健康雄性新西兰大耳白兔18只,随机分为对照组、F-127组和F-127+西罗莫司组,每组6只,将兔颈总动脉与颈内静脉端吻合,建立内瘘模型后,按组别在吻合口进行不同处理:对照组,不给予任何处理;F-127组,涂抹20% pluronic F-127多聚凝胶0.5 mL;F-127+西罗莫司组,涂抹携带西罗莫司0.5 mg的20% pluronic F-127多聚凝胶0.5 mL。术后3周,获取近吻合口处静脉血管,采用苏木精-伊红染色法观察静脉内膜增生情况,测量静脉血管内膜厚度。采用免疫组织化学法及Western blotting法检测各组转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达。 结果 术后3周,对照组和F-127组较F-127+西罗莫司组血管内膜增生明显(P<0.05);对照组和F-127组较F-127+西罗莫司组TGF-β1和CTGF表达明显升高(P<0.05),对照组与F-127组之间差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 西罗莫司血管外膜涂层缓释可有效抑制内瘘血管内膜的增生;西罗莫司可通过抑制TGF-β1和CTGF的表达来抑制血管内膜纤维化过程。     

孕酮和米非司酮对前列腺癌PC-3细胞作用机理的研究

目的探讨孕酮和米非司酮促进前列腺癌PC-3细胞增殖作用的机理。方法细胞培养观察孕酮和米非司酮对前列腺癌PC-3细胞增殖的影响。RT-PCR检测PC-3细胞孕激素受体mRNA的表达。Westernblot检测孕酮对PC-3细胞细胞外信号调节激酶ERK1/2活性的影响,并观察米非司酮对孕酮的阻断效果。结果细胞培养7d,孕酮(100nmol/L)组细胞数量为(3.2±0.3)×105,明显高于正常培养组[(1.9±0.2)×105](P<0.05);米非司酮(10μmol/L)组为(1.3±0.2)×105,明显低于正常培养组(P<0.05)。PC-3细胞有孕激素受体mRNA的表达。孕酮可以激活ERK1/2,而米非司酮阻断孕酮对ERK1/2的激活,孕酮组与孕酮+米非司酮组p-ERK1/2条带强度差异有统计学意义(吸光度A值分别为70752±16377和12493±3478,P<0.05)。结论孕酮对PC-3细胞的促进增殖作用与激活细胞ERK1/2有关;米非司酮阻断孕酮对PC-3细胞ERK1/2的活化,从而抑制细胞增殖。     

STZ诱导糖尿病大鼠胰岛细胞MHC-1表达的研究

目的探讨链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病的作用机制。方法将20只健康大鼠分为模型组及对照组各10只。模型组采用一次性注射STZ60mg／kg制作1型糖尿病模型,对照组不做任何处理。成模后3d两组各处死5只大鼠,提取胰腺组织做MHC-1免疫组织化学染色及HE染色;成模14d天处死剩余5只大鼠,同上处理。光镜下观察成模后3d及14d胰腺组织MHC-1表达,计数每张切片胰岛细胞表达MHC-1阳性细胞数。结果两组成模后3d及14d胰岛细胞MHC-1表达均为阳性,无异常表达;MHC-1阳性细胞数比较无显著差异。结论大剂量STZ诱导1犁糖尿病模型过程中对MHC—I表达无明显影响。     

动静脉内瘘扣眼穿刺处内膜增生特点及停止穿刺的效果观察

目的 研究动静脉内瘘钝针扣眼穿刺处内膜增生的演变特征,分析内膜增生的可能发病机制,探求合理的干预措施。方法 运用多普勒超声观察动静脉内瘘扣眼穿刺处内膜增生情况,测定增生组织大小,总结其形态学特点;将穿刺处出现内膜增生的扣眼依照是否继续穿刺,分为继续使用组、停止使用组,动态观察穿刺处内膜增生的变化,并采用Spearman相关分析内膜增生与患者临床资料的相关性。结果 共纳入39例患者、82个扣眼。超声检查显示扣眼穿刺处血管前后壁均可出现内膜增生,并表现出不同的特点。初次检查时钝针扣眼组内膜增生发生率为54.9%,高于传统锐针组(χ²=103.197,P<0.001)。Spearman相关分析结果显示扣眼穿刺处内膜增生与穿刺时间呈正相关(r=0.211,P=0.001)。1年内的前后对比结果显示：继续使用组(n=28)内膜增生进行性加重,增生组织长、宽、厚值较前增加(t=-4.030、-3.093、-2.454,P值分别为<0.001、0.005、0.021);停止使用组(n=21)增生组织逐渐消退,增生组织长、宽值较前减小(t=3.140、3.084,P=...     

同种异体单核细胞活化血管内皮细胞产生IP-10、I-TAC的体外研究

目的  研究单核细胞对异体血管内皮细胞（VEC）的活化作用以及产生干扰素诱导蛋白10（IP-10）、干扰素诱导的T细胞α型趋化因子（I-TAC）的效果。方法  人外周血中分离单核细胞，酶消化法分离人主动脉内皮细胞，建立单核细胞与VEC共培养系统。用流式细胞仪（FACS）检测VEC表面粘附分子CD54、CD62E表达的情况，用RT-PCR检测VEC内I-TAC和IP 10 mRNA的表达情况。结果  RT-PCR 检测结果表明，VEC与同种异体单核细胞共培养24h后，细胞内IP-10和I-TAC mRNA表达水平显著增加（P<0.05），且在48、72h的表达维持在较高的水平。 FACS检测结果表明，正常培养的VEC少量表达CD54分子，不表达CD62E分子。与同种异体单核细胞共培养24h后，VEC表面CD62E和CD54的表达水平明显上调（P<0.05）。结论  在同种异体单核细胞 血管内皮细胞免疫反应中，单核细胞能活化血管内皮细胞，使内皮细胞表达IP-10、I-TAC等趋化因子和CD54、CD62E等粘附分子，参与对移植器官的排斥反应。     

腹腔镜和开放去顶减压术治疗多囊肾的临床效果比较

目的:探讨腹腔镜去顶减压术治疗常染色体显性遗传性多囊肾(ADPKD)的临床价值。方法:开放手术68例,分期行双肾去顶减压术;腹腔镜手术54例,一期行双肾去顶减压术。观察两组患者在囊肿处理的数量以及手术效果方面的差异。结果:开放手术组单侧肾脏囊肿处理数量为(268±93)个,术后平均住院7.9d;腹腔镜手术组单侧肾脏囊肿处理数量(197±76)个,术后平均住院5.1d。开放手术组1例发生切口感染,腹腔镜手术组1例发生尿外渗。术后两组患者疼痛明显改善,部分患者的高血压缓解,肾功能无明显变化。随访3年患者疼痛与高血压有复发。组间比较显示,两组患者的治疗效果差异无显著性(P>0.05)。结论:腹腔镜去顶减压术手术创伤小并取得了与开放手术相同的治疗效果。     

米非司酮对前列腺癌PC-3细胞周期及其蛋白的影响

目的 探讨米非司酮（MIF）对前列腺癌PC-3细胞周期及其调控蛋白的影响及其作用机制。方法 MTT法检测1、10、50、100μmol／LMIF作用于PC-3细胞24～120h的吸光度（A）值，流式细胞仪检测10、50μmol／LMIF作用PC-3细胞48h后细胞周期的变化，免疫组化法和Western blot法检测10、50μmol／LMIF处理48h后PC-3细胞cyclinD1、bax、bcl-2蛋白表达的变化情况。结果 1μmol／LMIF作用24～120h的A值与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）；10、50、100μmol／L组A值与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；MIF对PC-3细胞的抑制作用呈时间-剂量依赖性。MIF作用48h后使PC-3细胞停滞于G1／G0期，并使此期细胞比例从对照组的27．4％增加到10μmol／L组的50．4％和50μmol／L组的59．2％，差异有统计学意义（P〈0．05）。处理后PC-3细胞中bcl-2蛋白和cyclinD1蛋白表达量，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；而bax表达量显著增加。结论 MIF以时间．剂量依赖性方式抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖，可能通过下调cyclinD1蛋白表达，阻止PC-3细胞G1期向S期的转换，使其停留于G1／G0期；同时降低bcl-2蛋白的表达及激活bax蛋白的表达等抑制前列腺癌PC-3细胞增殖。