AAV9载体在小鼠体内分布的长期研究

目的 研究AAV9载体在小鼠体内的长期分布情况,从而为CRISPR/Cas9技术用于治疗DMD患者的安全有效性提供研究基础。方法 将实验小鼠分为A、B两组,A为实验组、B为对照组,在处理后的第1、3、7、14、30天观察小鼠体内的荧光表达情况并对其主要肌肉组织进行荧光定量分析。结果 经肌肉向小鼠体内注射AAV9-Luc后,在30天内,随着时间的延长,荧光表达量逐渐增加,表达先局限于注射处,后渐渐扩大,且未见除肌肉外其他器官有明显荧光表达。结论 AAV9载体在小鼠体内局限分布于肌肉组织,而在非肌肉器官中几乎没有分布,具有很高的肌肉组织特异性。初步证明在AAV9载体介导CRISPR/Cas9治疗DMD技术中,经肌内注射的安全性较高。     

早期子宫恶性肿瘤术中盆腔淋巴结双显影技术的应用探索

目的 采用盆腔淋巴结双显影技术探讨下肢回流淋巴结与子宫回流前哨淋巴结的关系。方法 选择2022年3～12月22例早期子宫颈癌或子宫内膜癌，双足第一蹼间注射吲哚菁绿显影下肢回流的淋巴结，宫颈注射纳米碳显影子宫回流的前哨淋巴结，观察术中2个来源的盆腔淋巴结分布，记录不良反应及术后并发症。结果 吲哚菁绿盆腔淋巴结显影率100%(22/22),纳米碳前哨淋巴结显影率90.9%(20/22)。前哨淋巴结分布于闭孔淋巴结(8/22)和髂外血管内侧淋巴结(12/22),其中62.5%(5/8)闭孔前哨淋巴结呈现吲哚菁绿与纳米碳双显影。吲哚菁绿显影下肢回流的盆腹腔淋巴结分布于髂外末端淋巴结、髂外淋巴结、闭孔淋巴结、髂总-腹主动脉旁淋巴结。均未出现不良反应，短期随访中仅1例行系统性盆腔淋巴结切除者出现盆腔淋巴囊肿。结论 盆腔淋巴结双显影技术观察到下肢和子宫来源淋巴结的分布规律，在闭孔淋巴结二者均显影较多。     

一个遗传性平滑肌瘤病及肾细胞癌综合征家系的表型和 FH基因变异分析

目的:对一个中国遗传性平滑肌瘤病及肾细胞癌(hereditary leiomyomatosis and renal cell carcinoma,HLRCC)综合征家系进行临床和遗传学分析,为临床诊断提供依据。方法:应用全外显子组测序进行变异筛选,发现 FH基因可疑变异后应用Sanger测序技术对变异位点验...     

子宫血管内腺肌瘤病1例

子宫血管内腺肌瘤病(IVA)是静脉内平滑肌瘤病(IVL)的罕见变异, 术前缺乏特异性的表现, 易误诊为子宫腺肌病。本文报道1例2023年2月收治于郑州大学第二附属医院的子宫IVA患者, 从该患者的术前检查、术中情况及手术方案决策、病理诊断等方面阐述病史, 并参考相关文献研究对IVA的诊治进行讨论。IVL的特征是形态学上良性的平滑肌瘤生长在子宫和子宫外静脉系统内, 可累及右心或肺动脉, 有些也生长于淋巴管内, 多合并子宫肌瘤。子宫IVA发病年龄在50岁左右, 临床症状可能表现为痛经、绝经后出血或盆腔肿块, 彩超检查可表现为宫旁的不均质回声肿物, MRI检查可表现为子宫肌层内或延伸至子宫外的混杂T2异常信号影。组织病理学诊断及鉴别诊断是关键, 应与子宫腺肌病侵及血管以及子宫腺肉瘤等相鉴别。术中应探查血管内肿物的边缘, 手术完整切除病灶是预防复发的唯一方式。     

基于WGCNA联合LASSO筛选宫颈癌预后枢纽基因

目的 运用生物信息学方法筛选宫颈癌预后相关的分子标志物,为宫颈癌的预后预测提供依据。方法 从GEO、TCGA和GTEx数据库下载宫颈癌转录组表达数据和相应的临床数据。在GSE9750和GSE52903数据集中,通过WGCNA和LASSO两种方法联合筛选宫颈癌枢纽基因,GEPIA数据库进一步筛选与预后相关的枢纽基因。在GEO数据集(GSE9750和GSE52903)和TCGA联合GTEx数据集中比较预后相关的枢纽基因在宫颈癌和正常宫颈组织中的表达情况,并在HPA数据库中验证其蛋白水平的表达。利用ssGSEA分析宫颈癌肿瘤微环境(tumor microenvironment, TME)中免疫细胞浸润情况,探究预后相关的枢纽基因与免疫细胞浸润和免疫检查点基因表达的相关性。结果 WGCNA和LASSO两种方法共筛选出7个宫颈癌枢纽基因,GEPIA数据库进一步筛选得到3个预后相关的枢纽基因MCM2、APOD和RAD54L。在GEO数据集(GSE9750和GSE52903)和TCGA联合GTEx数据集中,与正常宫颈组织比较,MCM2和RAD54L在宫颈癌组织中表达上调,而APOD则表达下调,与HPA数据库中免疫组化结果基本一致。3个预后相关的枢纽基因与免疫细胞和免疫检查点的表达有相关性。结论MCM2、APOD和RAD54L基因可能是与宫颈癌预后相关的分子标志物,与TME中免疫浸润相关。     

m6A修饰相关的长链非编码RNA 对肾透明细胞癌预后和免疫治疗的研究

目的 探究与N6-甲基腺嘌呤(m6A)相关的长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)对肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma, ccRCC)预后和免疫治疗的特征。方法 通过TCGA数据库下载532例ccRCC患者组织和72例正常肾组织的转录组数据和临床特征数据,利用共表达和单因素COX回归分析筛选与预后和m6A相关的lncRNA。基于预后和m6A相关的lncRNA的表达进行聚类分析,分析两种聚类分型与免疫检查点程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1, PD-L1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4, CTLA-4)表达的相关性。构建LASSO COX回归风险预后模型,验证其临床应用价值,利用ESTIMATE方法比较ccRCC肿瘤微环境的差异,免疫表观评分(immunophenoscore,IPS)预测ccRCC对免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitor, ICI)的敏感度。结果 通过共表达和单因素COX回归分析筛选出29个与预后和m6A相关的lncRNA,大多数在ccRCC组织中表达上调,而COL18A1-AS1、AC007066.2和AC018752.1则表达下调。通过聚类分析将532例ccRCC组织样本分为cluster1组和cluster2组,cluster2组预后更差,PD-L1和CTLA4表达更高。利用LASSO COX回归算法确定8个与预后和m6A相关的lncRNA,建立ccRCC风险预后模型,该模型在不同临床特征中均有较好的预测价值。依据模型计算风险值将患者分为高风险组和低风险组。高风险组患者预后更差,富含更多免疫细胞成分,对ICI治疗更敏感。结论 m6A相关的lncRNA对ccRCC患者的预后预测和免疫治疗指导具有重要意义。     

免疫原性细胞死亡相关基因对膀胱癌预后分型及免疫治疗的影响

目的 探讨免疫原性细胞死亡（ICD）相关基因对膀胱癌（BC）预后及免疫治疗的影响。方法 通过癌症基因组图谱（TCGA）数据库获取BC数据集,采用两独立样本Wilcoxon秩和检验比较BC中34个ICD相关基因的表达。基于ICD相关基因表达进行聚类分析,对2种ICD相关亚型进行基因本体（GO）、京都基因和基因组数据库（KEGG）富集、体细胞突变差异和免疫细胞浸润差异分析。构建LASSO Cox回归风险预后模型,验证其临床应用价值。结果 ICD相关基因在BC和正常膀胱组织中表达有差异。2种ICD相关亚型的差异基因主要富集于T细胞激活、免疫球蛋白生成等生物学功能;参与T细胞激活、B细胞激活、T细胞活化的正向调节等信号通路。体细胞突变结果显示,ICD高评分组TP53突变频率更高,富含更多免疫细胞。利用7个ICD相关基因建立风险预后模型,该模型在不同临床特征中均有较好的预测价值。结论 ICD相关基因对BC患者的预后预测和免疫治疗指导有重要意义。     

3种炎症指标与早期子宫颈癌盆腔淋巴结转移的相关性研究

目的 探讨中性粒细胞与淋巴细胞比率（neutrophil to lymphocyte ratio,NLR）、血小板与淋巴细胞比率（platelet-to-lymphocyte ratio,PLR）、系统性炎症指数（systemic immune-infammation index,SII）与早期子宫颈癌盆腔淋巴结转移的相关性。方法 纳入郑州大学第二附属医院2016年1月至2021年12月行开腹或腹腔镜下广泛子宫切除术+盆腔淋巴结切除术的早期子宫颈癌患者162例,根据术后盆腔淋巴结转移情况将162例患者分为转移组37例和未转移组125例,通过受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线计算NLR、PLR、SII的最佳截断值;运用卡方检验分析NLR、PLR、SII以及临床病理特征与早期子宫颈癌盆腔淋巴结转移的关系,运用多因素logistic回归分析验证早期子宫颈癌盆腔淋巴结转移的独立危险因素。结果 162例患者中,有37例患者盆腔淋巴结发生转移,转移率为22.8%。单因素分析得出,盆腔淋巴结转移与NLR≥1.7、PLR≥126.6、SII...     

膀胱癌m6A调节因子预后模型建立与分析

目的 分析m6A调节因子对膀胱癌（bladder cancer, BC）预后的影响,建立预后预测模型。方法 从癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas, TCGA）数据库获取397例BC组织的高通量测序数据和对应的临床病理特征数据。在26个m6A调节因子中,采用单因素Cox回归筛选预后相关的m6A调节因子,利用最小绝对值收敛和选择算子（least absolute shrinkage and selection operator, LASSO）Cox回归分析方法构建BC预后预测模型,比较高低风险组总生存期（overall survival, OS）、免疫检查点相关基因和靶向治疗相关基因表达的差异。通过基因集富集分析比较高低风险组中信号通路的富集情况,采用单样本基因富集分析（single sample gene set enrichment analysis,ssGSEA）和估计恶性肿瘤组织中基质和免疫细胞（estimation of stromal and immune cells in malignant tumors using expression data...     

胎儿体内SaCas9蛋白抗体的研究

目的 通过检测成人及胎儿体内是否存在SaCas9蛋白抗体,观察患者体内针对SaCas9蛋白抗体的体液免疫情况,从而进一步评价CRISPR/SaCas9系统临床应用的安全性并探究治疗遗传病的新方法。方法 收集于郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心进行唐氏筛查或产前诊断孕妇检测后欲废弃的血清、羊水、胎儿脐带血样本,通过酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测样本中SaCas9蛋白抗体的存在情况。结果 在42例孕妇血清样本中均可检测到SaCas9蛋白抗体,18例胎儿羊水及10例胎儿脐带血样本中均未检测出。结论 成人血清内存在SaCas9蛋白抗体,而羊水和脐血内均未检测出,表明胎儿体内可能没有针对CRISPR/SaCas9系统的体液免疫,从而为遗传病的宫内基因治疗提供了一定依据。